几种组织工程支架材料生物力学性能的研究

背景：采用工程学的方法来构建人体组织及器官的替代品以及介入治疗的器械是目前生物组织工程领域的研究热点,而材料的选择是其核心。所制备的移植物,至少要能够赖受住移植过程中的各种外力而不至于破碎。故对被作为原料应用于组织工程领域的常用物质的力学性质进行评价,可以为组织工程研究中的材料选择提供依据。 目的：考察9种组织工程支架材料的力学性能,为组织工程支架的设计、制作的选材提供力学依据。设计：重复测量试验。单位：重庆大学生物工程学院。 材料：以聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）、胶原、海藻酸钠、脱细胞猪皮、脱细胞血管、脱细胞猪皮-PLGA的复合体、脱细胞血管-聚乳酸/聚羟乙酸共聚物的复合体以及经改性的壳聚糖和明胶作为考察材料。 方法：实验于2006-04/2007-03在重庆大学生物工程学院生物流变学实验室完成。制备上述9种材料试件,同时对壳聚糖和明胶进行改性。然后用INSTRON 1011拉伸实验机对其进行拉伸试验。拉伸速度为10mm/min,在应变范围（0.005-0.02）内计算试件的杨氏模量,并获得最大应变和最大应力。主要观察指标：9种材料的最大应变、最大应力及杨氏模量 结果：①最大应变：脆性依次增大的顺序是：脱细胞猪皮〉脱细胞猪皮-PLGA〉脱细胞血管〉海藻酸钠〉脱细胞血管-PLGA〉胶原〉明胶（P〈0.05）;壳聚糖和PLGA的断裂伸长率比其他7种材料高出很多,分别为133%和276%,差异有显著性意义（P〈0.05）。在与PLGA复合后,脱细胞血管和脱细胞猪皮的断裂伸长率均变小,即脆性增加。②最大应力：脱细胞猪皮以及与PLGA共混后的最大应力即断裂强度均明显高于其他材料,且与PLGA共混后的脱细胞猪皮的断裂强度也略高于脱细胞猪皮。明胶、壳聚糖和脱细胞血管的断裂强度大体相当,介于7.67-9.51MPa。胶原和海藻酸钠的断裂强度最低,介于1.16-1.40MPa。同时,与PLGA共混后的脱细胞血管的断裂强度明显低于脱细胞血管,差异有显著性意义（P〈0.05）。③杨氏模量：明胶的杨氏模量及硬度最大,而且远远大于其他各种材料。脱细胞猪皮的杨氏模量及硬度最低。与PLGA共混后的脱细胞血管及脱细胞猪皮的硬度均增大,差异有显著性意义（P〈0.05）,并于PLGA相当。除明胶以外,其他各材料硬度由大到小的排列顺序依次是：脱细胞血管-PLGA、PLGA、脱细胞猪皮-PLGA、脱细胞血管、壳聚糖、海藻酸钠、胶原、脱细胞猪皮。 结论：①脱细胞血管及脱细胞猪皮具有良好的力学性质。②与组织来源的材料即脱细胞血管及脱细胞猪皮相比,PLGA的韧性较好,强度较低,硬度偏高。③海藻酸钠、明胶、壳聚糖的力学性质有望通过与PLGA的复合而得到改善。     

硫代硫酸钠治疗慢性肾脏病患者血管钙化临床应用进展

近年来,慢性肾脏病(CKD)作为世界范围内主要的公共卫生问题受到越来越多的关注.慢性肾脏病矿物质和骨异常(CKD-MBD)是由于CKD的矿物质及骨代谢异常综合征所致,严重地影响了 CKD患者的生存率和生活质量.血管钙化是CKD-MBD的临床表现之一,其包括:动脉内膜钙化、中膜钙化、心脏瓣膜钙化和钙化防御.目前临床上还未...     

大鼠骨髓来源内皮祖细胞的分离培养及鉴定

目的建立体外分离培养及鉴定大鼠骨髓来源内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells,EPCs）的方法。方法采用密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离得到骨髓单个核细胞,并结合差时贴壁法,收集24h后未贴壁细胞,然后用添加有多种细胞因子的内皮细胞基础培养基（endothelial basal medium,EBM-2）诱导培养获取EPCs。通过形态学观察、CD133和VEGFR-2抗体免疫荧光染色并结合FITC-UEA-1和Dil—ae—LDL的摄取功能来对EPCs进行鉴定分析,同时通过体外管样结构形成能力对EPCs进行功能性评价。结果在EBM-2培养基中诱导培养7d后,出现类似于血岛样的细胞集落,集落中央的细胞呈圆形,周边的细胞呈放射状;80％以上的细胞都是CD133＋／VEGFR＋2＋细胞,并且这些细胞同时能够摄取Dil-ac—LDL和结合FITC-UEA-1;EPCs在基质胶表面形成管腔样结构。结论密度梯度离心法结合差时贴壁法从骨髓中分离获得的单个核细胞,然后经EBM-2条件培养基诱导培养可获得较高纯度的EPCs。     

线粒体在糖尿病血管内皮功能障碍中的作用

随着经济发展和人们生活方式的改变,糖尿病发病率呈明显上升趋势.据国际糖尿病联合会(international diabetes federation,IDF)发布的最新数据[1]:2017年全球约4.25亿成年人(20?79岁)患糖尿病,预计到2045年患者数将增加至6.29亿.糖尿病已成为全球重大的慢性疾病,患病率持...     

CXCR7在SDF-1介导内皮细胞参与血管形成中的作用

目的探讨CXCR7在SDF-1诱导内皮细胞参与血管生成中的作用。方法用Western blot和流式细胞仪检测脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中CXCR7和CXCR4的表达;利用小分子拮抗剂分别阻断CXCR4或CXCR7,然后通过MTT、Transwell小室法及三维基质胶血管样结构形成实验分别考察CXCR7和CXCR4对SDF-1诱导HUVECs增殖、迁移及管样结构形成能力的影响。结果 HUVECs细胞中同时高表达CXCR4和CXCR7;CXCR7的拮抗剂显著抑制SDF-1诱导HUVECs的增殖(P<0.01);而SDF-1诱导HUVECs迁移却被CXCR4的拮抗剂阻止(P<0.01);CXCR7和CXCR4的拮抗剂均显著阻止SDF-1诱导HUVECs形成血管样结构(P<0.01)。结论 CXCR7和CXCR4在SDF-1诱导HUVECs参与血管生成的过程中均起着不可或缺却又不尽一致的作用,SDF-1诱导HUVECs的增殖主要通过CXCR7发挥作用,而CXCR4主要参与SDF-1诱导HUVECs的迁移,两者共同参与SDF-1诱导HUVECs形成管样结构的调节。     

碱性氨基酸对丙交酯/乙交酯共聚物体外降解时集酸程度的调节

背景：丙交酯/乙交酯共聚物在降解中会产生酸性单体乳酸和乙醇酸而使局部集酸，从而引起机体局部产生炎症反应。 目的：采用赖氨酸、组氨酸、精氨酸分别与丙交酯/乙交酯共聚物进行复合，考察它们对丙交酯/乙交酯共聚物降解时集酸程度的调节功效。 设计：重复测量实验。 时间及地点：实验于2006-07/2007-08在重庆大学生物工程学院完成。 材料：丙交酯/乙交酯共聚物（80:20）为美国Sigma公司产品，赖氨酸、组氨酸、精氨酸（纯度 >99%）为美国Sigma公司产品；壳聚糖（脱乙酰度85%）为成都科龙化工试剂厂产品；海藻酸钠（黏度1.05~1.15）为天津大茂化学试剂厂产品。 方法：将赖氨酸、组氨酸、精氨酸分别各按5%和10%的比例与丙交酯/乙交酯共聚物制成复合物，于体外在37 ℃下在三蒸水中进行降解2 个月。用pH计检测降解液pH 的变化；在检测点将试件从人工降解液中取出滤干后再真空干燥12 h 后进行称重以计算失重率。取相同种类的3 份试样的平均pH 值作为该监测点下此试样的pH 值；取相同种类的3 份试样的平均初始质量的平均值作为该此试样的初始质量，取该试样的终质量的平均值作为此试样的终质量。以上述实验结果为依据，将碱性氨基酸的调节效果与海藻酸钠、壳聚糖、碳酸氢钠的调节效果进行比较。 主要观察指标：降解液pH 的变化；复合物的失重率。 结果：各种碱性添加剂都有一定的缓解酸度的能力，NaHCO3的缓解能力最强，海藻酸钠和壳聚糖的缓解能力较低，而碱性氨基酸的缓解能力适中；赖氨酸的添加量为5%时能够得到较佳的综合调节效果。 结论：碱性氨基酸能有效地缓解丙交酯/乙交酯共聚物降解后的集酸程度。其中，赖氨酸的添加量为5%时能够得到较佳的综合调节效果。     

CXCR7-shRNA慢病毒载体对人肝癌细胞生长及侵袭能力的抑制作用

目的探讨CXCR7-shRNA慢病毒表达载体靶向抑制CXCR7的表达对人肝癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法利用
RNA干扰技术,构建CXCR7的shRNA慢病毒表达载体,转染人肺转移肝癌细胞株HCCLM3,分别通过RT-PCR和Western blot
检测HCCLM3细胞中CXCR7 mRNA和蛋白质表达水平的变化;然后通过MTT法考察CXCR7沉默对HCCLM3细胞增殖侵袭
能力的影响,通过体外粘附实验和Transwell小室法分别考察CXCR7沉默对HCCLM3细胞粘附及侵袭能力的影响。结果与空
白对照组比较,转染CXCR7-shRNA慢病毒载体的HCCLM3细胞中CXCR7 的mRNA及蛋白水平表达均明显降低（P<0.01）,
SDF-1诱导的HCCLM3细胞的增殖能力显著下降（P<0.05）,同时HCCLM3细胞的粘附及侵袭能力也明显受到CXCR7-shRNA
的抑制（P<0.01）。结论靶向沉默CXCR7能显著抑制结肝癌细胞的增殖和侵袭能力,为肝癌的治疗提供一个潜在的作用靶点。
     

浓度与压力梯度可调的三维细胞培养微流控芯片的研制

目的制作化学浓度梯度与压力梯度可调的细胞三维培养微流控芯片,构建可模拟在体细胞生长所处动态微环境的体外模型。方法利用光刻成型技术、模塑法以及等离子键合工艺,制作3通道结构的微流控细胞培养芯片。通过微注射泵控制微通道内溶液流动生成浓度梯度,利用液面高度差生成压力梯度,并通过骨架染色比较二维培养与三维培养下的细胞形态。结果获得了化学浓度梯度与压力梯度可调的微流控细胞培养芯片。在2μL.min-1的流速下,中间通道的浓度梯度3 h后可达到相对稳定。100 Pa的压力差在中间通道生成的视在压力梯度为0.11 Pa/μm,从而驱动三维支架内间隙渗流的生成。并在微流控芯片内实现脐静脉内皮细胞稳定的三维培养。结论该芯片结构简单,制作方便,能灵活调控细胞生长所处的微环境,可进一步用于研究不同的微环境参数对细胞行为的影响。     

Ki-67蛋白表达在弥漫大B细胞淋巴瘤预后判断中的意义

目的：探讨Ki-67蛋白表达在DLBCL中预后判断的意义。方法收集58例DLBCL患者的手术或活检标本并制作其组织芯片,采用免疫组化对DLBCL进行免疫表型分类,同时检测Ki-67蛋白的表达,并行CHOP方案化疗。结果58例DLBCL患者Ki-67表达高低与性别、年龄、LDH、结外病变、临床分期和IPI评分无关（ P〉0．05）。中位随访12个月后,生存曲线分析显示Ki-67高表达组中位疾病无进展生存时间（ PFS）为16个月,短于Ki-67低表达组27个月,两组PFS差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在DLBCL患者中Ki-67高表达预后较差。