芍药苷对APP/PS1小鼠的神经细胞保护作用及机制研究

目的:探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)通过抑制细胞凋亡通路而产生神经细胞保护作用的机制。方法:分别选用15只5月龄雄性APP/PS1非显性小鼠作为正常对照组,15只5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠为模型组和15只5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠为给药组(5 mg/kg的PF腹腔注射)。采用水迷宫实验检测各组小鼠的学习和记忆能力。采用TUNEL荧光染色法检测脑内神经细胞凋亡情况。采用Western Blot检测脑内皮层及海马区PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平,并用免疫组化分析caspase-3和caspase-9的蛋白表达水平及分布情况。结果:(1)与正常对照组相比,APP/PS1模型组小鼠的学习和记忆能力明显下降;与APP/PS1模型组相比,PF明显改善小鼠的学习和记忆能力。(2)与正常对照组相比,APP/PS1模型组小鼠脑内神经细胞凋亡明显增多,分布区域较广,而PF给药组小鼠凋亡细胞明显减少。(3)与APP/PS1模型组相比,PF给药组能显著下调促凋亡因子caspase-3、caspase-9和Bax的表达水平(P0.05),同时上调抑凋亡因子pPI3K、p-Akt和Bcl-2的表达水平(P0.05)。结论:PF可能通过激活PI3K/Akt通路而上调Bcl-2,下调caspase-9、caspase-3和Bax的蛋白表达水平,从而抑制神经细胞凋亡和保护神经细胞,以治疗神经退行性疾病。     

移植人羊膜间充质干细胞促进脊髓损伤大鼠神经功能恢复

目的研究移植人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）是否促进脊髓损伤大鼠神经功能恢复,探索其可能作用机制。 方法60只雌性SD大鼠按照随机数字表法分为磷酸盐缓冲液（PBS）治疗组（30只）和hAMSCs治疗组（30只）。脊髓损伤采用脊髓撞击损伤模型,hAMSCs或PBS立刻移植到离脊髓损伤中心2 mm的头尾两端。免疫荧光检测细胞分化,血管再生和轴突再生。酶联免疫吸附剂测定试剂盒检测脑源性神经营养因子（BDNF）和血管内皮生长因子（VEGF）含量,BBB运动功能评分检测行为学。 结果在脊髓损伤后14 d、21 d和28 d,hAMSCs治疗组BBB评分分别为（8.75±0.701）、（10.375±0.532）和（12.125±0.350）,高于PBS组（6.0±0.463）、（7.25±0.412）和（9.125±0.440）,差异具有统计学意义（P<0.05）。在第7天和第14天,hAMSCs治疗组BDNF表达水平分别为（75.138±4.367）pg/mg和（66.483±4.099）pg/mg,高于PBS组（43.901±3.607）pg/mg和（41.108±3.848）pg/mg,差异具有统计学意义（P<0.05）。在第7天,第14天和第28天,hAMSCs治疗组VEGF表达水平分别为（23.328±2.463）pg/mg,（22.301±2.223）pg/mg和（14.855±1.282）pg/mg,高于PBS组（9.978±1.572）pg/mg,（9.271±1.496）pg/mg和（7.113±1.123）pg/mg,差异具有统计学意义（P<0.05）。hAMSCs治疗组血管数目（17.5±2.102）高于PBS组（6.25±1.750）,差异具有统计学意义（P<0.05）。hAMSCs治疗组小鼠抗5羟色胺阳性神经纤维面积（3486±203.643）和GAP43阳性神经纤维面积（4568.25±253.881）高于PBS组（2070.25±156.344）和（2455.725±314.475）,差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论移植hAMSCs能促进脊髓损伤大鼠神经功能恢复,其作用机制可能是通过增加神经营养因子表达,促进血管再生和轴突再生。因此hAMSCs移植是治疗脊髓损伤的理想方法。     

2-甲氧基雌二醇对脊髓损伤大鼠运动功能及神经细胞凋亡的影响

摘要 目的：探讨2-甲氧基雌二醇(2ME2)对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能及细胞凋亡的影响。 方法：将成年雄性SD大鼠72只随机分为假手术组(n=24)、脊髓损伤组(n=24)、2ME2治疗组(n=24)。采用改良的 Allen法制作脊髓损伤模型,造模成功后1、3、7、14、21、28d应用BBB运动评分系统对各组大鼠运动功能进行评估,造模成功后连续7天对2ME2治疗组大鼠腹腔注射2ME2(24mg/kg),第7天应用免疫荧光技术检测各组大鼠caspase-3表达,应用TUNEL染色进行凋亡细胞计数。 结果：脊髓损伤组及2ME2治疗组损伤后随时间延长BBB评分升高,其中2ME2治疗组损伤后第14、21、28天BBB评分显著高于脊髓损伤组,差异具有显著性意义（P<0.05）。与假手术组（4.583±2.234）比较,脊髓损伤组（33.417±4.274）及2ME2治疗组（22.250±4.048）免疫荧光染色caspase-3蛋白表达阳性细胞数显著增加,2ME2治疗组caspase-3蛋白表达阳性细胞数较脊髓损伤组显著减少,差异具有显著性意义（P<0.05）。与假手术组（12.25±2.67）相比,脊髓损伤组（49.17±4.75）及2ME2治疗组（38.67±4.44）凋亡细胞数显著增多, 2ME2治疗组凋亡细胞数较脊髓损伤组显著减低,差异具有显著性意义（P<0.05）。 结论：2ME2改善脊髓损伤大鼠模型脊髓损后的运动功能,具有神经保护作用;2ME2降低脊髓损伤大鼠模型脊髓损后caspase-3蛋白表达,抑制神经细胞凋亡。     

儿童基底节生殖细胞瘤的早期诊断和治疗

目的　探讨儿童基底节生殖细胞瘤的早期诊断和治疗。 方法　2006年11月至2017年1月本院收治的21例基底节生殖细胞瘤患儿，分析其临床特点、影像学和肿瘤标志物特征。 结果　基底节生殖细胞瘤常以男性为主，少年多发，以一侧肌力下降为主要临床症状，伴智力下降；CT显示基底节区占位并压迫脑室和同侧颞叶萎缩；MRI显示T1相呈点、片状等信号或囊变样不均匀混杂增强信号，T2相可见明确的占位征象及同侧颞叶萎缩，脑沟、池增宽；生化检查HCG升高；诊断性放疗可以明显缩小瘤体，结合放化疗可以达到完全治愈的目的。 结论　影像学显示无明显边界的基底节区占位并同侧颞叶萎缩，11岁左右的男性，一侧肌力下降伴智力下降，且HCG异常升高，可初步诊断为基底节生殖细胞瘤，予行诊断性放疗明确诊断，完成化疗和放疗，减少手术风险。     

人TN-R蛋白及其EGF-L片段抗血清对大鼠皮层神经元的影响

目的 制备Tenascin-R(TN-R)蛋白的EGF-L功能片段及该片段抗血清,联合TN-R蛋白研究其在体外对大鼠皮层神经元的作用,探讨该功能片段抗血清用于治疗中枢神经系统(CNS)损伤后轴突再生的可行性. 方法 制备人TN-R蛋白EGF-L片段抗血清,再以该抗血清联合TN-R蛋白包被多孔板形成不同的铺板状态,分EGF-L抗血清组、TN-R蛋白组、TN-R蛋白+EGF-L抗血清组,仅包被有多聚赖氨酸(PLL)处为对照组.单细胞悬液法原代培养大鼠皮层神经元24h后免疫荧光染色检测β-Ⅲ-tubulin,比较不同的铺板状态下所黏附的细胞数;7d后免疫荧光染色检测β-Ⅲ-tubulin,观察神经元的形态并比较神经元突起主干、分支点数量及突起总长度.小组织块法培养大鼠皮层神经元7d后观察包被的蛋白与PLL之间形成的边界对神经元突起生长的影响. 结果 成功制备高浓度的TN-R蛋白EGF-L片段抗血清.4组所黏附的细胞密度不同,比较差异有统计学意义(P＜0.05).与EGF-L抗血清组和对照组比较,TN-R蛋白组所黏附的细胞密度、神经元的突起主干、分支点数量及突起总长度较低,TN-R蛋白+EGF-L抗血清组上述指标均较高,差异有统计学意义(P＜0.05); TN-R蛋白组从组织块中迁徙出的细胞及细胞突起均几乎不能越过边界,TN-R蛋白+ EGF-L抗血清组可见有少量的细胞突起越过边界生长. 结论 TN-R蛋白EGF-L片段抗血清在体外能削弱TN-R蛋白对于神经元生长的抑制功能,有望将该抗血清用于体内,为CNS损伤后轴突再生创造有利的内环境.