Tfh、IL-21与抗血小板自身抗体检测在CITP中的意义

目的探讨慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)患者外周血滤泡辅助性T细胞(Tfh)细胞数量变化及白细胞介素(IL)-21与抗血小板自身抗体水平在CITP中的意义。方法选取30例CITP患者和30例健康体检者分别作为CITP组和对照组;采用流式细胞仪(FACS)技术测定外周血Tfh细胞的数量与比例,ELISA检测细胞因子IL-21水平,采用改良的血小板抗原单抗特异性固相化法(MAIPA)测定血液中抗GPⅡb/Ⅲa、GP Ib/Ⅸ自身抗体水平。结果与对照组相比,CITP组Tfh细胞比例显著升高,IL-21的水平高于正常对照组,抗GPⅡb/Ⅲa、GPIb/Ⅸ抗体的阳性率分别为46.7%、43.3%,两者之间存在一定的正相关。结论 Tfh细胞、效应细胞因子IL-21、血小板特异性自身抗体可能在CITP发病机制中发挥重要作用,其可为CITP的诊断与治疗提供一种新思路。     

骨髓间充质干细胞胰腺内移植治疗糖尿病：是否发生了细胞的“转分化”？

背景：近年来大量研究认为骨髓间充质干细胞植入后可以改善糖尿病鼠的高血糖状态,但相关的机制尚不明确且存在一些争议。目的：探讨骨髓间充质干细胞移植到糖尿病大鼠胰腺后的作用机制。方法：将增强型绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞移植到糖尿病大鼠胰腺包膜下,血糖仪监测血糖,RT-PCR动态检测受体鼠胰腺组织增强型绿色荧光蛋白阳性细胞中关键转录因子的表达,免疫荧光染色观察胰腺组织中增强型绿色荧光蛋白和胰岛素共表达情况,流式细胞术分析增强型绿色荧光蛋白阳性胰腺组织细胞的细胞周期和DNA倍性。结果与结论：胰腺包膜下移植骨髓间充质干细胞能有效降低糖尿病鼠血糖;Nestin、Nkx 2.2的表达分别在移植后1,3周到达峰值,Pax 4和Ngn 3的表达在移植后4周到达峰值,胰岛素和胰高血糖素的表达至移植后12周到达峰值,PDX-1的表达在8周时达到峰值并维持至12周;免疫荧光染色发现有增强型绿色荧光蛋白和胰岛素共表达细胞;流式细胞术测定增强型绿色荧光蛋白阳性的胰腺组织细胞中处于S＋G2/M期的细胞增加,细胞核型未见多倍体或非整倍体细胞。提示在胰腺微环境中,植入糖尿病鼠胰腺局部的骨髓间充质干细胞在基因调控下向胰岛β样细胞发生横向转分化,而非细胞融合获得β细胞的功能表型。     

网织红细胞多参数分析在地中海贫血患者中测定的意义

目的调查健康中国成人的网织红细胞多参数分析的参考值范围;并进一步观察在地中海贫血时网织红细胞各参数改变情况及临床意义。方法应用Coulter-GENS.system2型全自动血液分析仪检测了66例健康成人和33例地中海贫血患者7项网织红细胞细胞参数。结果①网织红细胞细胞多参数的正常参考值范围(男女混合)为:RET%1.34±0.48(0.86%~1.82%);RET#0.059±0.023(0.036~0.082);IRF0.3±0.04(0.26~0.34);HLR%0.38±0.14(0.24%~0.52%);HLR#0.017±0.007(0.01~0.024);MRV113±7(106~120);MSCV91±6(85~97)。②地贫患者的7项网织红细胞参数中有多项与正常人有相比有显著性差异,其中RET%、RET#、HLR%和HLR#明显增高(P<0.01),MRV、MSCV明显下降(P<0.01),且变化程度病情的严重程度有一定的关联性。贫血程度较轻的血红蛋白病,网织红细胞各参数变化不大。结论网织红细胞细胞多参数测定提示,地中海贫血时患者网织红细胞细胞中未成熟细胞占的比例增加可能是导致“无效造血”的主要原因之一;网织红细胞细胞多参数分析能在一定程度上提示地中海贫血严重程度;在经典网织红细胞指标RET%,RET#基础上,应用HLR%、HLR#和IRF可以更细微、全面地描述网织红细胞的成熟度,从而更好的评价骨髓造血的功能。     

地中海贫血患者网织红细胞多参数分析的意义

目的　调查健康中国成人网织红细胞多参数分析的参考值范围,并进一步观察地中海贫血时网织红细胞各参数的改变情况及其临床意义。方法　应用 Coulter GENS system 2 型全自动血液分析仪检测66例健康成人和 33 例地中海贫血(地贫)患者 7 项网织红细胞细胞参数。结果　(1)网织红细胞细胞多参数的正常参考值范围(男女混合)为:网织红细胞细胞百分比(RET%) 1.34±0.48(0.86%~1.82%);网织红细胞细胞绝对值(RET#)0.059±0.023(0.036~0.082);不成熟指数(IRF)0.3±0.04(0.26~0.34);高光散网织红细胞细胞绝对值(HLR%) 0.38±0.14(0.24%~0.52%);高光散网织红细胞细胞绝对值(HLR#) 0.017±0.007(0.01~0.024);体积参数 平均网织红细胞细胞体积(MRV)113±7(106~120);平均球红细胞体积(MSCV) 91±6(85~97)。(2)地贫患者7项网织红细胞细胞参数中多项与正常人相比有显著性差异,其中RET% 、RET# 、HLR%和 HLR#明显增高(P<0.01),MRV、MSCV明显下降(P<0.01),且变化程度与病情的严重程度有一定的关联性。贫血程度较轻的血红蛋白病,网织红细胞各参数变化不大。结论　网织红细胞细胞多参数测定提示,地中海贫血时患者网织红细胞细胞中未成熟细胞所占比例增加可能是导致“无效造血”的主要原因之一;网织红细胞细胞多参数分析能在     

雌二醇对6-羟基多巴胺诱导PD模型SIRT1表达的影响

目的 探讨雌二醇(E2)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞帕金森病(PD)模型中沉默信息调节因子1 (SIRT1)表达及PD大鼠外周血及脑组织SIRT1的影响。方法(1)将6-OHDA作用的嗜络细胞瘤细胞(PC12),给予不同浓度的E2进行干预,根据E2干预浓度的的不同进行分组:PD模型组、E2低剂量组(E2 1×10^-8mol·L^-1)、E2中剂量组(E2 1×10^-7mol·L^-1)、E2高剂量(E21×10^-6mol·L-1),正常细胞作为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡率,免疫细胞化学法检测络氨酸羟化酶(TH)和SIRT1表达;(2)采用6-OHDA诱导并制备PD大鼠模型,将PD大鼠分为PD模型组、E2低剂量组(25μg·kg^-1)、E2中剂量组(50μg·kg^-1)和E2高剂量组(100μg·kg^-1),将健康大鼠作为对照组,10只/组。对照组...     

M2型抗线粒体抗体的靶抗原三联体克隆表达技术改良

目的改良构建M2型抗线粒体抗体(AMA-M2)靶基因三联体重组表达载体技术,建立检测AMA-M2的酶联免疫吸附法(ELISA)并进行评价。方法通过聚合酶链反应(PCR)扩增基因三联体BPO,构建表达载体pGEX-4T-1-BPO,转入大肠杆菌BL21表达,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到重组蛋白,并通过亲和层析纯化得到目的蛋白,建立ELISA检测AMA-M2。结果获得纯度大于95%的重组蛋白;检测326例临床样本,43例原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者中有41例呈AMA-M2阳性,灵敏度为95.3%(41/43),特异度为98.2%(278/283),PBC组与非PBC组的AMA-M2检出率差异有统计学意义(P0.05)。结论该改良技术获取的目的蛋白可以用于AMA-M2检测,AMA-M2对PBC的临床诊断具有较高的灵敏度和特异度。