不同剂量碱性成纤维细胞因子对人类胚胎干细胞生长、凋亡和DNA完整性的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)浓度对人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)特性的影响.方法 建立化学限定性hESCs培养体系,以有饲养细胞培养体系作为参照,比较4、40 ng/ml和100 ng/ml bFGF对hESCs多能性标记、细胞周期、细胞凋亡和DNA完整性的影响.结果 ①低浓度bFGF(4 ng/ml)足以维持hESCs在化学限定性培养基(基础培养基DMEM/F12,N2,B27, 简称 NB 体系)中培养;②bFGF可以抑制hESCs细胞凋亡,且具有剂量依赖性,而对hESCs细胞周期没有影响;③bFGF有助于hESCs DNA完整性维持,在NB体系加入4 ng/ml bFGF时,hESCs在DNA水平上存在75个异常区域,而在加入40 ng/ml bFGF时,只存在1个异常区域.结论 高剂量bFGF有助于hESCs体外快速扩增和hESCs DNA完整性维持.提高bFGF浓度为hESCs体外培养所必需.     

不同培养体系可逆改变人类胚胎干细胞的分化倾向

背景: 人类胚胎干细胞可以在饲养细胞依赖性培养体系和化学限定性培养体系下维持未分化状态,能够在体内外诱导分化成三胚层来源的细胞类型.目的: 比较饲养细胞和化学限定性培养体系对人类胚胎干细胞特性的影响.方法: 将在饲养细胞培养体系下培养27代的人类胚胎干细胞转入到化学限定性培养基体系中培养56代,然后再将其转回到饲养细胞培养体系中,将3种培养条件下的人类胚胎干细胞(饲养细胞培养体系培养70代、化学限定性培养体系培养56代、化学限定性培养体系下培养70代后转回饲养细胞培养体系下培养13代和20代)进行多能性分子标记SSEA4流式分析等检测分析,同时对3种培养条件下人类胚胎干细胞经拟胚体诱导分化后分别检测多能性基因和三胚层分化基因的表达.结果与结论: 人类胚胎干细胞在饲养细胞和化学限定性培养体系下表现出不同的诱导分化倾向,在化学限定性培养体系下表现出向神经诱导分化抑制,这种不同的诱导分化倾向可发生可逆性转换,当人类胚胎干细胞由化学限定性培养体系转回到饲养细胞培养体系时,诱导分化倾向表现出与其在饲养细胞下诱导分化一致的模式.在拟胚体分化中,多能性基因Nanog高可能对诱导分化倾向起着重要作用.与此同时,人类胚胎干细胞SSEA4细胞亚群发生相应的变化,人类胚胎干细胞在饲养细胞和化学限定下培养体系下表现的分化倾向与人类胚胎干细胞亚群所占的比例存在关联.     

不同培养体系可逆改变人类胚胎干细胞的分化倾向

背景：人类胚胎干细胞可以在饲养细胞依赖性培养体系和化学限定性培养体系下维持未分化状态,能够在体内外诱导分化成三胚层来源的细胞类型。 目的：比较饲养细胞和化学限定性培养体系对人类胚胎干细胞特性的影响。 方法：将在饲养细胞培养体系下培养27代的人类胚胎干细胞转入到化学限定性培养基体系中培养56代,然后再将其转回到饲养细胞培养体系中,将3种培养条件下的人类胚胎干细胞(饲养细胞培养体系培养70代、化学限定性培养体系培养56代、化学限定性培养体系下培养70代后转回饲养细胞培养体系下培养13代和20代)进行多能性分子标记SSEA4流式分析等检测分析,同时对3种培养条件下人类胚胎干细胞经拟胚体诱导分化后分别检测多能性基因和三胚层分化基因的表达。 结果与结论：人类胚胎干细胞在饲养细胞和化学限定性培养体系下表现出不同的诱导分化倾向,在化学限定性培养体系下表现出向神经诱导分化抑制,这种不同的诱导分化倾向可发生可逆性转换,当人类胚胎干细胞由化学限定性培养体系转回到饲养细胞培养体系时,诱导分化倾向表现出与其在饲养细胞下诱导分化一致的模式。在拟胚体分化中,多能性基因Nanog高可能对诱导分化倾向起着重要作用。与此同时,人类胚胎干细胞SSEA4细胞亚群发生相应的变化,人类胚胎干细胞在饲养细胞和化学限定下培养体系下表现的分化倾向与人类胚胎干细胞亚群所占的比例存在关联。