中药调控一氧化氮合酶-一氧化氮系统的研究

一氧化氮(NO)是生物体细胞内及细胞间的重要信号分子,由不同类型一氧化氮合酶(NOS)催化生成,即内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)。生理情况下,组织中eNOS和nNOS持续低水平表达维持正常生理功能。病理情况下,eNOS活性下降,NO生成减少,中药可以通过蛋白质磷酸化调节eNOS活性增加NO浓度以及通过抗氧化作用提高NO的生物利用度。而iNOS在生理情况下不表达,炎症状态下,iNOS被激活产生大量NO,导致组织损伤,加剧炎症进程。中药通过NF-κB和p38MAPK下调iNOS减少NO生成治疗炎症。不少活血化瘀药可以下调iNOS起到抗炎作用,为活血化瘀药治疗炎症提供了试验依据。     

滋阴清热药在维护健康血管内环境中的作用

现代医学研究表明,滋阴和清热类中药在维护血管内环境健康中起着重要的作用,可以改善和调节血管内环境紊乱时的氧化应激、炎症损伤、血液高凝状态等;从中医理论分析,滋阴和清热类中药药性寒凉,性属阴,可以抑制体内阳热(氧化应激、炎症、凝血、血管收缩物质,归为阳)的过盛,维护机体阴阳协调平衡。     

自发性高血压大鼠脑组织炎症反应和过氧化物酶体增殖物激活受体亚型的表达

目的 观察自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)脑组织(皮质、纹体、小脑)炎症状态和过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)三个亚型PPARα、PPARβ/δ和PPARγ表达的变化.方法 以Wistar-Kyoto大鼠为对照,SHR为研究对象.紫外分光光度法检测脑组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性和蛋白质羰基化水平;RT-PCR法和Western blot法观察炎性因子(IL-1β、TNFα、ICAM-1、iNOS)和PPARs各亚型表达.结果 与Wistar-Kyoto大鼠相比,SHR除血压显著升高外,皮质、纹体、小脑组织中(1)MPO活性显著增高,炎性因子IL-1β、TNFα、ICAM-1、iNOS表达增强,除IL-1β在纹体、小脑和TNFα在小脑未检测到明显改变外,其余差异均有统计学意义;蛋白质羰基化水平明显增加,分别为(3.27±0.43)nmol/mg和(11.87±1.11)nmol/mg、(4.02±1.04)nmol/mg和(14.06±1.36)nmol/mg、(5.94±0.71)nmol/mg和(14.95±1.82)nmol/mg,差异具有统计学意义(t=17.70、14.36、11.30,均为P＜0.05).(2)PPARα、PPARβ/δ和PPARγ三亚型的基因和蛋白表达被显著诱导.在皮质、纹体和小脑PPARα蛋白表达分别增加644.78%、791.95%和42.85%(t=13.53、9.86、3.14);PPARβ/δ增加106.72%、94.12%和161.44%(t=7.17、9.07、7.95);PPARγ增加2700.16%、790.81%和875.00%(t=16.25、11.60、12.77),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 SHR大鼠脑组织(皮质、纹体、小脑)存在明显的炎症反应,同时PPARs各亚型表达增加.炎症可能在高血压及其脑组织并发症的病理改变中起重要作用,而PPARs代偿不足可能参与了高血压所致炎症反应的发生和发展.     

survivin基因启动子的克隆及其在人喉癌Hep-2细胞中的特异性表达

目的:构建survivin启动子调控的真核表达载体pSurp-EGFP,利用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)检测该启动子在Hep-2细胞中的特异表达活性。方法:PCR扩增survivin启动子,置换pShuttle载体中的CMV启动子,构建质粒pSurp;分别双酶切pShuttle、pSurp和pEGFP-C1载体,构建分别携带survivin启动子和巨细胞病毒(CMV)启动子的真核表达载体pCMV-EGFP和pSurp-EGFP;脂质体法转染Hep-2细胞及血管内皮细胞ECV304,荧光显微镜下观察EGFP的表达。结果:成功扩增survivin基因启动子,构建了survivin基因启动子调控的真核表达载体pSurp-EGFP,用其转染两种细胞后,荧光显微镜下见Hep-2细胞发出较强的绿色荧光,而ECV304细胞没有表达。结论:成功克隆survivin启动子,其在Hep-2细胞具有较强的肿瘤特异性启动活性,为进一步开发肿瘤的特异性基因治疗奠定了实验基础。     

分子靶向型中药对一氧化氮信息系统的调控作用

一氧化氮（NO）在各类分子进程中均作为重要的信号分子出现,其在生理学和病理学的作用已被广泛研究。作为气体分子和带非共用电子的自由基,NO参与不同的生物进程。在许多例子中NO通过活化环鸟苷酸和提高胞内cGMP合成来介导其生物效应;然而NO非cGMP依赖效应的种类列表也在快速增长。过量NO为特征的炎症反应在多种炎症性疾病中存在,靶向NO信号的治疗策略已于近年引起研究者注意。许多中药及其活性成分的使用在中医药传统治疗和现代生物医学研究中都享有盛誉。主要介绍NO作为药物的使用历史,着重指出发展靶向NO信号分子型新中药的重要性,并提出使用药理学、生物化学和分子生物学方法于细胞、器官及无细胞水平来鉴定、纯化和重组以调控NO信号途径将是治疗NO产量不平衡为特征的众多病理情况的新策略。     

老年胃溃疡出血患者再发出血的危险因素分析

【摘要】 目的 探讨分析老年胃溃疡出血患者再发出血的相关危险因素。方法 选取 2020 年3月至2022年3月许昌市中心医院收治的 140 例老年胃溃疡出血患者作为研究对象, 收集患者性别、年龄、发病部位、胃溃疡长径、出血活动度、是否为胃溃疡 A1 期、是否合并幽门螺杆菌 (Hp) 感染、有无吸烟史、有无饮酒史、合并其他慢性疾病种类 (≤2 种、>2 种)、是否进行消化内镜治疗、是否长期使用非甾体抗炎药 (NSAIDs) 等资料,并根据患者止血成功后 1 个月内是否再发出血将患者分为发生组与未发生组? 多因素 Logistic 回归分析老年胃溃疡出血患者再发出血的危险因素。结果 140 例老年胃溃疡出血患者均于止血成功后随访 1 个月, 随访过程中 21例 (15.0%) 患者再发出血, 设为发生组; 119 例 (85.0%) 患者未再发出血, 设为未发生组。单因素分析结果显示, 发生组胃溃疡 A1 期、Hp 感染、未进行消化内镜治疗、长期使用 NSAIDs 的患者比例均明显高于未发生组(χ2 = 4.269、7.381、7.580、11.836, P= 0.039、0.007、0.006、0.001); 多因素 Logistic 回归分析结果显示, 胃溃疡 A1 期、Hp 感染、未进行消化内镜治疗、长期使用 NSAIDs 是老年胃溃疡出血患者再发出血的独立危险因素(95%CI 为 1.039~ 9.660、1.909~ 58.707、0.059~ 0.585、1.880~ 18.559, P= 0.043、0.007、0.004、0.002)。 结论 胃溃疡 A1 期、Hp 感染、未进行消化内镜治疗、长期使用 NSAIDs 是老年胃溃疡出血患者再发出血的独立危险因素, 临床应根据患者具体情况制定针对性干预措施, 以降低再出血发生风险。     

祖师麻醋酸乙酯提取物体外抗炎作用及其机制

目的研究祖师麻醋酸乙酯提取物(EAEDGC)的体外抗炎作用及其机制。方法用γ-干扰素(IFN-γ)和脂多糖(LPS)协同制备小鼠RAW264.7细胞炎症模型,Griess反应测定细胞上清液中NO生成量,MTT法测定细胞活力,三价铁还原抗氧化能力测试(FRAP assay)测定细胞总抗氧化能力,RT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达;Western blotting检测iNOS、COX-2、HO-1、p-ERK蛋白表达水平。结果 EAEDGC以剂量依赖方式抑制细胞上清液中NO的生成,提高细胞总抗氧化能力,下调iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA及iNOS、p-ERK蛋白的表达,上调HO-1 mRNA和蛋白表达,同时不影响细胞生长;但对COX-2 mRNA和蛋白表达影响不大。结论 EAEDGC部分通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)中的细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路抑制iNOS基因和蛋白的表达,从而抑制NO的生成,提高细胞总抗氧化能力,同时下调IL-1β、IL-6、TNF-α炎症介质和上调抗炎介质HO-1的表达,进而发挥抗炎作用。     

SHR高血压进程中不同类型血管内皮功能损伤及药物修复研究

目的探讨SHR大鼠在高血压发展进程中,不同血管内皮功能损伤程度及抗高血压药物对其的修复。方法以SHR为模型,7～24wk(wk:周龄)给予卡托普利(3.375g.kg-1.d-1),停药观察至32wk。6、18、24和32wk时分别进行病理学切片检查胸主动脉、肠系膜上动脉和心尖小动脉形态结构,及胸主动脉和肠系膜上动脉乙酰胆碱(ACh)浓度依赖性血管舒张功能检测(n=6)。结果SHR在18wk时胸主动脉、肠系膜上动脉和小动脉均出现结构病变,并随时间逐渐加重,三级动脉中胸主动脉病变较之严重,表现为内皮细胞脱落和中膜增厚;随年龄增大SHR胸主动脉和肠系膜上动脉ACh依赖性舒张度均下降,但胸主动脉舒张度降低幅度大于肠系膜上动脉(P=0.10,18wk;P<0.01,24、32wk);卡托普利能抑制18wkSHR胸主动脉舒张度的降低(P<0.05vsSHR),但对肠系膜上动脉没有该作用。结论伴随SHR高血压的发病进程,体内各级动脉内皮细胞均发生损伤,内皮依赖性舒张功能降低,大动脉内皮功能损伤出现早,程度也往往高于中、小动脉,抗高血压药物可抑制大动脉内皮功能障碍,但对中、小动脉内皮功能损伤无作用。     

吴茱萸次碱对2型糖尿病肥胖大鼠的干预作用

目的观察吴茱萸次碱(rutaecarpine,Rut)对2型糖尿病肥胖大鼠(T2DM)的干预作用。方法用高脂饲料喂养结合一次性尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)30 mg.kg-1建立2型糖尿病肥胖大鼠模型。用Rut干预治疗,以二甲双胍片作为阳性对照。给药7 wk后观察对大鼠空腹血糖(FBG)、甘油三脂(TG),总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和血清炎症因子C-反应蛋白(CRP)等的影响,及肾脏、肝脏和胰脏的病理变化。结果 Rut能明显降低T2DM的TC、TG和LDL-C,升高HDL-C(P<0.05);Rut组CRP明显降低(P<0.05),病理切片观察Rut可以改善T2DM肥胖大鼠的肾、肝、胰的病理变化。但对血糖值没有明显降低(P>0.05),与二甲双胍组比较没有统计学意义(P>0.05)。结论 Rut能降低2型糖尿病肥胖大鼠的血脂,减轻炎症反应,改善肾、肝、胰的病理变化。Rut作为治疗T2DM代谢综合征的潜在药物值得进一步的研究。     

桑枝提取部位及其组合对巨噬细胞炎症介质的影响

目的 研究桑枝不同提取部位及其配比对脂多糖（LPS）协同γ-干扰素（IFN-γ）刺激的巨噬细胞RAW264.7中炎症介质的影响。方法 采用有机溶剂萃取和大孔树脂富集的方法制备桑枝乙醇提取物不同萃取部位I～IV。各提取部位及不同部位组合分别作用于细胞后,Griess法测定RAW264.7细胞亚硝酸盐的量;MTT法检测细胞活力;三价铁还原抗氧化能力测试（FRAP）法测定细胞抗氧化能力;半定量PCR法测定炎症介质基因的表达;Western blotting法测定炎症介质蛋白的表达。结果 桑枝4个提取部位中,I和II以剂量相关方式抑制细胞悬液中亚硝酸盐的量,IC₅₀分别为145.23、152.14 mg/L。在I与II 3种配比（1∶1、1∶4、4∶1）组合中,1∶1配比时抑制细胞上清液中亚硝酸盐量的IC₅₀值最低,为110.31 mg/L,且对细胞活力具有保护作用。与模型组相比,I和II在200 mg/L时显著下调白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、诱生型NO合酶（iNOS）、环氧合酶-2（COX-2）、核因子-κB（NF-κB）基因表达水平（P＜0.05、0.01）,同时上调血红素加氧酶（HO-1）和过氧化物酶增殖体受体（PPAR-γ）基因表达水平（P＜0.05）,提高细胞抗氧化能力（P＜0.05）,且抑制ERK蛋白的磷酸化（P＜0.05）。I和II（1∶1）组合对COX-2、IL-1β、HO-1、NF-κB、PPAR-γ的表达有一定的协同调控效果。结论 提取部位I和II是桑枝抗炎的活性部位,其部分通过NF-κB和ERK/MAPK信号转导通路调控炎症介质的表达,其1∶1配比组合对炎症中某些靶点均有较好的协同调控作用,抗炎效果更佳。