肉鸡对不同形态锰源的生物利用率研究

目的 :　研究肉仔鸡对不同形态锰源的相对生物学利用率。方法 :　将 62 4只 1日龄肉公鸡随机分为 1 3组 ,分别饲不添加锰的基础饲粮 (对照组 )或以不同锰化合物添加 60、1 2 0、1 80 mg/ kg锰的试验饲粮 2 1 d。结果 :　肉鸡生长性能各指标和腿病发生率以及肉鸡的跖骨灰锰含量、心肌细胞线粒体中 Mn SOD活性均未受到添加锰源以及锰源与锰水平互作的显著影响 ,但受到添加锰水平的显著影响。肉鸡心肌含锰量和 Mn SOD m RNA水平均未受到添加锰源与锰水平互作的显著影响 ,但受到添加锰源及添加锰水平的显著影响。其中中等和强络合强度有机锰源的生物学利用率明显高于无机硫酸锰和弱络合强度有机锰源。结论 :　中等和强络合强度的复合氨基酸锰对肉仔鸡的生物学利用率明显优于无机硫酸锰和弱络合强度的蛋氨酸锰     

一个新的人NFBD1启动子的鉴定与分析

目的：鉴定分析NFBD1启动子,为进一步研究其转录调控奠定基础．方法：综合应用生物信息学分析和异构体特异性的巢式RT—PCR技术鉴定NFBD1转录起始位点和转录变异体;高保真PCR方法扩增NFBD1基因启动子区域并分别定向克隆入pGL3-basic和pGL3-enhancer载体,构建NFBD1启动子荧光素酶报告基因重组体;荧光素酶分析检测启动子活性;生物信息学方法预测转录因子结合位点．结果：鉴定了一个新的NFBD1转录起始位点和转录变异体,构建了2个含有长度分别为2．5和1．2kb的NFBD1启动子序列的荧光素酶报告基因重组体以及2个相应的含有外源增强子的NFBD1启动子荧光素酶报告基因重组体．启动子活性分析表明,该启动子区域具有启动子活性,且能被外源增强子有效驱动,是一个新的人NFBD1启动子．转录因子结合位点预测分析表明,该启动子区域缺乏典型的CCAAT盒和GC盒,但含有TATA盒以及STAT1,MZF1和MAZ等潜在的转录因子结合位点．结论：鉴定了一个新的NFBD1启动子．     

稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系的建立

目的：构建黑色素浓集激素受体2（MCHR2）/增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y,建立稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系MCHR2-SH-SY5Y。方法：采用聚合酶链反应(PCR)法从人胎脑cDNA文库扩增MCHR2全长cDNA片段。用基因重组方法将其克隆到质粒pEGFPN1,构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,并用Lipofectamine^TM转染到SH-SY5Y细胞,通过G418筛选,建立稳定表达MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞系,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting检测MCHR2的表达并用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白亚细胞定位。结果：扩增出人MCHR2全长cDNA;成功构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2;RT-PCR、Western blotting检测到MCHR2-SH-SY5Y细胞MCHR2的表达,激光共聚焦显微镜观察转染pEGFPN1-MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞融合蛋白定位于细胞膜,而转染空质粒pEGFPN1的SH-SY5Y细胞EGFP定位于细胞质。结论：成功建立稳定表达人MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞株。     

生物化学与分子生物学教学内容的优化整合

通过对国内外多个著名医学院校的生物化学与分子生物学课程设置和教学内容进行调研与分析,在此基础上对生物化学与分子生物学的教学内容进行了优化整合,以期为推动该课程的进一步教学改革和总体课程体系改革奠定坚实的基础.     

苛求芽孢杆菌胞外尿酸酶的表征及其在血清尿酸测定中的应用

目的考察苛求芽孢杆菌(ATCC 26904)分泌型尿酸酶的特性和将其应用于直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸的有效性。方法苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶经DEAE-cellulose层析纯化后,用于以积分法分析尿酸酶反应曲线预测反应体系本底的直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸。结果苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶只含1种肽链,分子量为34.7 kD(1kD=0.992 1 ku),其米氏常数为(0.22±0.01)mmo1/L(n=11),黄嘌呤抑制常数为(36±3)μmo1/L(n=4)。用此尿酸酶,只要被分析反应曲线终点的底物浓度低于起点的30%,应用积分法就能可靠预测本底;直接测定反应前吸收,可使直接动力学尿酸酶法不受常见血清成分、酶活性变化和15μmo1/L黄嘌呤等干扰。监测0.025 U/ml尿酸酶反应5 min的数据,其线性响应范围为1~50μmol/L;所得临床标本血清尿酸含量(Ck)与过氧化物酶偶联间接终点平衡法(Ce)正相关(Ck=-0.008 1.046Ce,r=0.996,n=206),但Bland-Altman法分析表明两种方法不一致。结论苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶可用于直接动力学尿酸酶法测定尿酸,并可保障其优势。     

构建基础学科的探究性实验教学体系

高等教育的实验教学应注重培养学生的科学素质。探究性实验教学体系的教学研究对象、研究方案等由教师指导学生确定。在医药生物化学等基础学科的实验教学中，选用和临床或生物技术药物等有联系的对象为实验教学研究主题，用本学科常用研究策略，常见和新的技术建立研究方案构成具有探索性且开放的实验教学体系，可用于高层次医药人才的实验教学，这有利于促进培养学生的创造意识和科学素质。     

“以器官系统为中心”医学生物化学教学改革初探

为适应医学教育发展,“以器官系统为中心”的课程模式逐渐受到国内医学院校的青睐。借鉴国内外的教学改革经验,根据本校教育教学实际情况,重庆医科大学开展了“以器官系统为中心”的教学改革。这为讲授生物化学这门重要的医学基础课提供了一个良好的机会,我教研室对生物化学教学在教学内容等方面进行调整和重新分配,以期取得更好的教学效果。     

新基因PRR11的克隆、真核表达载体的构建及鉴定

目的：克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其真核表达载体,并进行表达检测及鉴定。方法：以HeLa细胞cDNA为模板,半定量RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-PRR11。然后将pcDNA3.1-PRR11重组载体转染入HeLa细胞中,收集细胞,制备总RNA和细胞裂解液,采用半定量RT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测目的基因表达情况。结果：成功扩增了PRR11基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,测序结果表明序列完全正确,pcDNA3.1-PRR11真核重组表达载体构建成功。半定量RT-PCR和蛋白质免疫印迹法证实了转染入HeLa细胞中的目的基因表达成功。结论：成功构建了PRR11基因的真核表达载体,并可在HeLa细胞中成功表达,为进一步研究PRR11基因的功能奠定了基础。     

应用SYBR实时荧光定量Real-Time PCR法检测人宫颈癌MCPH1mRNA表达

目的 应用SYBR实时荧光定量RT-PCR法检测MCPH1/BRIT1 mRNA的表达.方法 提取人宫颈癌总RNA,经逆转录PCR获得靶基因(MCPH1)及管家基因(GAPDH)的CDNA,采用SYBR Green 荧光实时定量法检测,以GAPDH基因作为内参,计算各组MCPH1 mRNA的相对表达量.结果 在31...