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目的探讨LRRK2G2019S位点突变对驱铁处理后小胶质细胞活化的影响及其机制。方法 (1)利用人类诱导多能干细胞(IPSC)经造血祖细胞(HPC)分化产生小胶质细胞, 免疫荧光染色进行鉴定, 利用蛋白纯化技术获取α-突触核蛋白(α-syn)A53T突变蛋白。(2)将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+甲磺酸去铁胺(DFO)组, 分别加入磷酸盐缓冲液(PBS)、1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白、1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白+30 mmol/L DFO作用24 h。采用比色法检测细胞Fe2+浓度, Western blotting实验检测细胞Rab35蛋白的表达, 流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平, 实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)mRNA的表达。将3组小胶质细胞培养上清液(MCS)转移到SH-SY5Y细胞中, 采用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞的凋亡情况。(3)双向DNA测序检测1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白处... 相似文献
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