加热法人心肌钙蛋白T的提取与纯化

目的以加热法从人左心室肌组织中提取并纯化心肌肌钙蛋白Ｔ（ＣＴｎＴ）。方法取新鲜人左心室肌经捣碎、淬取、加热、透析后提取ＣＴｎＴ,以ＤＥＡＥ５２柱层析纯化。结果经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳初步鉴定,每１００ｇ左心室肌经此法可得１１．７９ｍｇＣＴｎＴ纯品,纯化后的ｃＴｎＴ为单一条带,分子量为３７ＫＤ。结论本法提取ＣＴｎＴ步骤简单,纯度尚可,可做抗原使用。     

GPx4基因rs4807542位点多态性与子痫前期遗传易感性的关系

目的探讨谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)基因rs4807542位点单核苷酸多态性与子痫前期遗传易感性的关系。方法以山东地区1 007例确诊的子痫前期病人为病例组,1 392例正常分娩的孕妇为对照组,采用TaqMan探针实时荧光PCR技术扩增两组外周血DNA,对GPx4基因的rs4807542位点进行基因分型和等位基因频率分析。结果病例组和对照组GPx4基因rs4807542位点的基因型分布和等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。轻度及重度子痫前期组与对照组比较,早发型及晚发型子痫前期组与对照组比较,该位点的基因型分布和等位基因频率差异均无显著性(P>0.05)。结论 GPx4基因rs4807542位点的单核苷酸多态性与子痫前期遗传易感性无相关性。     

中国山东沿海地区汉族男性人群白介素-23受体基因多态性与痛风的易感性研究

目的探讨中国山东省沿海地区汉族男性群体的白细胞介素23受体（IL-23R）基因rs7517847位点G／T的多态性是否与痛风的易感性有关。方法选取202例痛风患者和346例健康对照者,检测中国汉族男性群体的IL-23受体内含子区rs7517847位点基因多态性分布,数据经,检验得出其与痛风发病的遗传易感性的关系。结果经,检验,痛风组和对照组中IL-23R基因rs7517847位点GG,GT和1Tr基因型频率（10．4％,49．5％,40．1％;16．2％,49．7％,34．1％;X^2=4．305,P〉0．05）与等位基因频率G和T（35．1％,41％;64．9％,59％;X^2=3．727,P〉0．05）均无统计学意义。IL-23R基因rs7517847位点G／T基因多态性与痛风病的危险因素无显著性关联。结论尚不能认为中国沿海地区汉族男性人群中IL-23R内含子区rs7517847位点基因多态性与痛风有关联性。     

甲醛固定石蜡包埋子宫内膜癌变组织中microRNA-29b表达及其临床意义

目的探讨以甲醛固定石蜡包埋组织为材料、实时荧光定量PCR技术检测子宫内膜癌变组织中microR-NA-29b表达的可行性及其临床意义。方法选取甲醛固定石蜡包埋组织96份,其中正常子宫内膜16份,不典型增生内膜20份、子宫内膜癌60份。设计microRNA-29b和U6的茎环结构反转录引物和PCR扩增引物,以U6为内参,利用SYBR green实时荧光定量PCR技术检测子宫内膜癌变组织中microRNA-29b的含量,分析microRNA-29b在癌变组织中的表达及其与临床病理特征的关系。结果 microRNA-29b在甲醛固定石蜡包埋组织中有表达;mi-croRNA-29b在子宫内膜癌组织中的表达低于正常内膜及不典型增生内膜(P均<0.05);microRNA-29b表达与病理分期及有无淋巴结转移有关(P均<0.05)。结论可以利用甲醛固定石蜡包埋组织进行microRNA-29b的相关研究;microRNA-29b在子宫内膜癌变组织中表达的差异可能与子宫内膜癌的发生、发展有关,对子宫内膜癌的早期诊断、预后评估可能有一定的指导意义。     

家兔精液传播弓形虫的实验研究

目的 了解弓形虫能否通过精液传播，并探讨雌兔阴道不同健康状态对精液传播弓形虫的影响。 方法 8只健康新西兰雄兔经腹腔分别感染1×10⁵个RH株弓形虫速殖子，分别于感染前、后用假阴道采集雄兔精液，每周将采集到的精液混合液化后0.1 ml/只， 分别经宫腔内人工受精管感染4组阴道健康状态不同的成年新西兰雌兔（阴道正常组、阴道损伤组、滴虫性阴道炎组和霉菌性阴道炎组）， 共采集8周，将所得8份混合精液分别感染8次。每次受精后第2～3天耳缘静脉采血2 ml， 分别用ELISA和PCR检测血清抗弓形虫抗体和全血中弓形虫B1基因片段。 结果 ELISA结果显示，雌兔在初次受精后第16天可检测到抗弓形虫抗体，第1～4组抗体阳性家兔数分别有2、1、3和1只，ELISA阳性率为25.9％（7/27）。PCR检测最早在受精后3 d和最晚51 d可扩增出弓形虫B1基因片段200 bp， 第1～4组阳性家兔数分别有2、1、2和0只，PCR阳性率为18.5%（5/27）。其中两种检测结果均为阳性的3只。 结论 弓形虫可通过精液感染雌兔。雌兔的阴道健康状态对经精液感染弓形虫无影响。     

遗传性痉挛性截瘫一家系19例

先证者(Ⅴ5) 男,36岁.20年前开始出现双腿僵硬,走路不便,步态不稳,易跌倒,上下楼梯困难,病情呈进行性加重.查体:痉挛步态(+),髌阵挛(-),下肢腱反射亢进,双下肢病理征(+),弓形足,诊断为遗传性痉挛性截瘫.     

中国沿海地区汉族男性人群白细胞介素-1β-31C/T基因多态性与痛风的易感性研究

目的 探讨山东省沿海地区中国汉族男性群体的白细胞介素(IL)-1β启动子区rs1143627(-31C/T)基因多态性的分布状况及其与痛风易感性之间的关系.方法 选取208例痛风患者和210名健康对照者,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(RFLP)技术,检测中国汉族男性群体的IL-1β启动子区rs1143627(-31C/T)位点基因多态性与痛风发病的遗传易感性的关系.采用Hardy-Weinberg检验确认标本的群体代表性,数据分析采用χ2检验和t检验.结果 痛风组中IL-1β启动子区-31C/T位点CC,CT和TT基因型分别为32.7%,43.3%和24.0%,健康对照组分别为31.9%,46.2%和21.9%,2组比较差异无统计学意义(χ2=0.427,P>0.05);2组的等位基因频率C和T间差异也无统计学意义(分别为54.3%,55.0%;45.7%,45.0%;χ2=0.038,P>0.05).经χ2检验,IL-1β基因-31C/T位点基因多态性与痛风病的危险因素无显著性关联.结论 尚不能认为中国沿海地区汉族男性人群中IL-1β启动子区rs1143627(-31C/T)基因多态性与痛风有关联性.

Abstract：

Objective To explore gene polymorphism of the C/T genotype of rs1143627 in the promoter of IL-1β gene in male population living in the coastal area of Shandong, and thus to investigate the relationship between the gene polymorphism of IL-1β and gout. Methods A total of 208 gout patients and 210 healthy controls were enrolled. The possible association between the polymorphism of IL-1 β -3 1C/T and gout in Chinese were investigated and genotype frequencies and allelic frequencies was calculated by polymerase chain reaction (PCR)-restriction fragment length polymorphism (RFLP) method. Hardy-Weinberg was used to verify the representativeness of the sample. Comparisons between the groups were performed with χ2 test and t-test. Results The frequencies of CC, CT, and TT genotypes were 32.7%, 43.3% and 24.0%,respectively among gout patients, while they were 31.9%,46.2% and 21.9%, respectively among the controls.There was no statistically difference in IL-1β -31C/T genotype frequencies between gout patients and controls (χ2=0.427, P>0.05). The allele frequencies of C and T in gout cases were different from those in the controls (54.3%, 55.0%; 45.7%, 45.0%; χ2=0.038, P>0.05). Moreover, no association between IL- I β-31 C/T genotypes and risk factors for gout were observed in gout cases by χ2 test. Conclusion Results of the present study suggest that the C/T genotype of rs1143627 in the promoter of IL-1β gene is not associated with gout in male population living in the coastal area of Shandong.     

血吸虫循环抗原检测及疗效考核价值

采用单克隆抗体(McAb)S31/32双夹心ELISA法检测感染不同寄生虫病人血清中循环抗原(CAg)427份,其中慢性血吸虫病188例,阳性检出率为95.2%,晚期血吸虫病阳性率4.5%(2/44),正常53人假阳性率5.7%.测定其他寄生虫感染患者及肝炎病人,除发现肺吸虫病、旋毛虫病和华枝睾吸虫病有交叉反应外,其它均呈阴性反应.同时,检测血吸虫病治疗前、后CAg,计495 份血清,慢性血吸虫病治疗前188例,阳性率95.2%,吡喹酮治疗后3、6、12和36个月,其阴转率分别为20.4%、31.9%、96.2%和87.7%.比较双夹心ELISA法和一步法ELISA检查CAg,无显著差异.测试结果提示,采用单抗S31/32建立的双夹心ELISA检测血吸虫循环抗原有很高的敏感性和良好的特异性,病人在治疗后一年其阴转率高,有很好的疗效考核价值.     

日本血吸虫循环抗原检测的血清预处理方法比较

血吸虫循环抗原主要有三大类：ＭＡＡ、ＧＡＡ和ＳＥＡ。在检测过程中，常存在交叉反应。为排除血清中杂蛋白的干扰，采用ＴＣＡ沉淀法［１］、ＰＥＧ沉淀法［２］和热碱处理法［３］３种方法预处理，并对其效果进行比较。材料与方法血清样品２０条尾蚴感染兔第８ｗｋ血清...     

登革2型病毒NGC株E基因部分序列原核蛋白表达

目的:构建登革2型病毒NGC株E基因区1～476 bp的原核表达载体并进行原核表达.方法:将登革2型病毒NGC株E基因区部分序列克隆入原核表达载体pET28a(+),命名为pET28a(+)-En;经酶切、PCR及测序鉴定后转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE、Western印迹鉴定表达蛋白;对表达蛋白进行纯化,并滴定对C6/36细胞的TCID50.结果:(1)成功构建了pET28a(+)-En原核表达重组质粒,SDS-PAGE分析表明,E基因区部分序列获得高效表达,相对分子量约为23 kD,表达量约占菌体总蛋白的29%;Western印迹表明该目的蛋白可与登革2型病毒鼠单克隆抗体结合;(2)用Ni柱亲和层析法纯化原核表达蛋白,纯度达90%;(3)DEN-2 NGC株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞的TCID50为10-4.88/0.1 ml.结论:pET28a(+)-En可在BL21(DE3)菌株中高效表达,DEN-2 NGC株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞有一定的细胞毒作用.