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1.
恶性疟原虫RNA组分的分离南京军区福州总医院检验中心第一军医大学疟疾免疫研究室福州350001兰风华,林来兴妹,赵雨田,毕惠祥,彭一兵,李英杰为了研究恶性疟原虫的RNA,综合文献报道的多种方法,建立了从同批虫体中分离多个不同RNA组分的方法,效果良好... 相似文献
2.
目的:初步分析人核受体hLRH-1不同变异体在多种肿瘤组织和细胞系中的表达。方法:常规RT-PCR法分析hLRH-1v1和hLRH-1在肝癌等多种肿瘤组织和HepG2等肿瘤细胞系中的表达情况,实时定量PCR法分析hLRH-1v1,hLRH-1和hOct4在HepG2,SMMC-7721和BEL-7402三株肝癌细胞系的表达水平。结果:hLRH-1v1的表达见于所有检测的12种类型肿瘤和8种恶性肿瘤细胞系,hLRH-1的表达则仅在12种类型肿瘤中的6种肿瘤组织中可检测到,但8种恶性肿瘤细胞系均为hLRH-1阳性表达;在HepG2,SMMC-7721和BEL-7402三株肝癌细胞系中hLRH-1v1和hOct4的表达呈正相关。结论:hLRH-1v1在肿瘤中广泛表达,可能在维持肿瘤干细胞的自我更新中发挥重要作用。 相似文献
3.
肾上腺脑白质营养不良的分子诊断(附2例报告) 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 探讨肾上腺脑白质营养不良(ALD)的分子诊断方法。方法 在临床诊断的基础上,从2名患者外周血提取白细胞总RNA,进行反转录后,用PCR方法分四段扩增ALD基因编码区。纯化PCR产物,并对其进行序列测定。查出突变位点后,对患者家系成员的基因组DNA进行PCR-限制性酶切分析。结果 患者A的ALD基因第280位密码子发生CGC→CTC改变,使原来编码的精氨酸被亮氨酸取代(R280L突变);患者B的ALD基因第508位密码子发生了CCC→CTC改变,使正常的脯氨酸被亮氨酸替换(P508L突变)。两个突变通过酶切分析和家系调查得到进一步确证。结论 建立了ALD的分子诊断技术,并在中国人ALD患者发现了两个新的ALD基因突变。 相似文献
4.
中国人遗传性高铁血红蛋白血症研究进展 总被引:5,自引:0,他引:5
1 概述 高铁血红蛋白血症是指血中高铁血红蛋白(methemoglobin)水平超过血红蛋白总量1%时的临床状态。按原因分为获得性和遗传性两大类。获得性高铁血红蛋白血症最常见,多为摄入某些氧化(还原)性药物或毒物时的一过性表现。遗传性高铁血红蛋白血症(hereditarymethemoglobinemia,HM)绝大部分为NADH细胞色素b5还原酶(NADHcytochromeb5reductase,b5R)的遗传缺陷所致,呈常染色体隐性遗传,故又称隐性先天性高铁血红蛋白血症(reces… 相似文献
5.
6.
遗传性高铁血红蛋白血症分子诊断方法的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨遗传性高铁血红蛋白血症的分子诊断方法。方法 采用RT-PCR和PCR产物直接测序法,对3例遗传性高铁血红蛋白血症患者细胞色素b5还原酶(b5R)cDNA编码区序列进行分析。通过基因组DNA的PCR-限制性酶切或PCR-序列测定,验证cDNA策略所检出的突变。结果 患者A的b5R cDNA在第527位碱基呈T/C杂合状态,第608位碱基呈G/A杂合状态;患者B的b5R cDNA在第170位碱基和第179位碱基均呈G/A杂合状态;患者C的b5R cDNA在第608位碱基呈G/A杂合状态,第791位碱基呈C/T杂合状态。基因组DNA策略与cDNA策略所得结果一致。结论 建立了遗传性高铁血红蛋白血症的分子诊断方法,并在3例患者中发现了3个以复合杂合子形式存在的、新的b5R基因突变。 相似文献
7.
目的 对1个有3例女性杂合子患者的X-连锁肾上腺-脑白质营养不良(X-linked adrenoleukodystrophy,X-ALD)家系进行基因突变分析.方法 提取1例患者的外周血白细胞总RNA,以此为模板,采用长链逆转录-PCR技术,分4个片段扩增ABCD1基因(X-ALD疾病基因)编码序列并对其PCR产物进行直接测序.通过PCR和限制性内切酶分析患者及其家庭成员相应的基因组DNA片段,进一步确证所发现的基因突变.对突变及其对ALD蛋白结构的影响进行生物信息学分析.结果 在患者A月CD1基因第1外显子的第283位密码子发现1个新的错义突变:CAC→CGC(p.H283R),此突变使相应DNA片段的1个Msl Ⅰ酶切位点消失,其子不存在此突变.突变所改变的氨基酸残基在进化上高度保守.p.H283R突变位于ALD蛋白的跨膜结构域,可引起该分子跨膜区整体结构的改变.结论 在国内首次报道了3例杂合子女性X-ALD患者,并在其家系发现了1个新的ABCD1基因突变,即p.H283R突变. 相似文献
8.
人甲胎蛋白基因启动子siRNA表达载体的构建及效应鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探索基于人甲胎蛋白基因启动子构建的siRNA表达载体介导目的基因RNA干扰的可行性,为实现肝癌细胞靶向RNAi治疗作一初步研究。方法:PCR法扩增获得人甲胎蛋白基因启动子并插入pSilencer1.0-U6中以置换其U6启动子;依据hLRH-1基因RNAi靶位点设计出siRNA模板DNA,体外合成相应寡核苷酸片段后经退火形成短双链,再克隆构建成靶向人hLRH-1基因siRNA表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入HepG2细胞中,实时定量PCR法初步分析所建系统在AFP表达细胞中触发靶基因hLRH-1的RNAi效应,以及hLRH-1调控下游靶基因的表达改变。结果:获得人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体pSiAFP。所建的RNAi载体系统可在表达AFP的HepG2细胞中有效诱导靶基因hLRH-1表达下调,抑制率约达85%;同时调控hLRH-1下游靶基因CyclinE 1与Oct4的表达相应下调。结论:人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体可在表达AFP的HepG2细胞中有效介导靶基因的RNAi效应。 相似文献
9.
目的探讨经载体介导的RNA干涉法建立周期蛋白E1表达稳定抑制细胞系的可行性。方法将源自pSSC-9质粒的neo基因亚克隆至干涉载体pSilencer 1.0-U6以构建稳定干涉载体pSineo,再将其与合成的靶向周期蛋白E1基因特定的RNA干涉模板片段连接,重组载体经脂质体LipofectamineTM2000介导法转染肝癌细胞株BEL-7402;转染细胞经G418筛选,常规抽提G418抗性克隆细胞的基因组DNA并行PCR法鉴定外源导入载体的稳定整合情况。结果酶切及测序鉴定结果均表明,重组载体pSineo-cyc E1符合预期设计;PCR鉴定结果显示,稳定筛选出的6个克隆均整合有靶向周期蛋白E1基因的干涉载体。结论本研究建立了6个稳定整合有靶向细胞周期蛋白E1基因RNA干涉载体的肝癌细胞系,为肿瘤的癌基因靶向干涉治疗作了有益探索。 相似文献
10.
精子特异性乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase—C4。LDH-C4)特异地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸和精子细胞中,具有和其它同工酶不同的独特理化性质,与精子的生成、代谢、获能和受精有密切关系,为精子能量代谢的一个关键酶,其抗生育效果在多种哺乳动物,包括灵长类已得到证实。鉴于在分布上的特异性,LDH—C4一直被当作避孕疫苗的候选对象而受到重视。为了进一步研究LDH—C4的功能,制备针对LDH—C4的特异性抗体,我们构建了人精子特异性乳酸脱氢酶C(HLDH-C4)的原核表达载体,并进行原核表达和鉴定。 相似文献