沙眼衣原体pORF5质粒蛋白抑制肿瘤坏死因子α诱导HeLa细胞凋亡北大核心CSCD

目的 探讨沙眼衣原体质粒蛋白pORF5对肿瘤坏死因子α（TNF？α）诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法 将含pORF5基因的慢病毒重组表达载体与辅助质粒共转染293T细胞制备慢病毒,慢病毒收集浓缩后再感染HeLa细胞,流式细胞仪分选获得pORF5基因稳定转染细胞株（pORF5？HeLa）,同时建立空载体转染对照细胞株（对照HeLa）。将两种细胞株分别分为两组,一组用20 μg/L TNF？α处理（处理组）,一组仅用新鲜培养基培养（未处理组）,作用6 h,Hoechst33258染色观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时 PCR检测凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl？2和Bax mRNA表达水平,Western印迹检测Bax、Bcl？2蛋白表达水平。结果 TNF？α处理细胞6 h后,Hoechst33258染色发现pORF5？HeLa和对照HeLa细胞中均可见不同程度的核固缩、碎裂,高亮蓝色凋亡小体;pORF5？HeLa细胞的凋亡率为（35.5 ± 4.5）%,对照HeLa细胞凋亡率为（63.6 ± 5.8）%,均显著高于相应未处理组［（9.5 ± 1.5）%和（7.9 ± 0.9）%,t值分别为13.53、32.36,均P 〈 0.01］。处理组pORF5？HeLa细胞中Bax和Caspase3 mRNA表达水平较处理组对照HeLa细胞分别降低72.8%和84.5%（t值分别为35.29,42.25,均P 〈 0.01）,但Bcl？2 mRNA的表达水平显著高于处理组对照HeLa细胞（t = 87.12,P 〈 0.01）。处理组pORF5？HeLa细胞中Bax蛋白表达水平亦显著低于处理组对照HeLa细胞（t = 17.58,P 〈 0.01）,而Bcl？2蛋白表达水平较对照HeLa细胞增加6.8倍,差异有统计学意义（t = 18.93,P 〈 0.01）。结论 pORF5可能通过增强抗凋亡蛋白Bcl？2降低促凋亡蛋白Caspase3和Bax的表达,抑制TNF？α诱导的HeLa细胞凋亡。