干扰素γ和TRAIL联合对HaCaT细胞程序性坏死的影响及机制研究

【摘要】 目的 观察干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合对HaCaT人角质形成细胞程序性坏死的诱导作用,并探讨其作用机制。方法 HaCaT细胞分为阴性对照组（不加药物处理）和实验组,实验组分别加入50 μg/L IFN-γ（IFN-γ组）、4 μg/L TRAIL（TRAIL组）、50 μg/L IFN-γ + 4 μg/L TRAIL（细胞因子联合组）,或40 μmo/L zVAD预处理1 h后同时加入50 μg/L IFN-γ及4 μg/L TRAIL（zVAD联合组）。作用48 h后,光镜下观察细胞形态,噻唑蓝法检测药物对细胞的增殖抑制作用,双染色法流式细胞仪检测细胞坏死情况,qPCR检测RIP3、MLKL mRNA相对表达量,Western印迹检测细胞RIP1、RIP3、MLKL及其磷酸化蛋白等的表达,免疫荧光染色观察pRIP3、pMLKL在细胞中的表达分布,以2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯为荧光探针检测各处理对细胞内活性氧产生的影响。采用SPSS 22进行统计学分析,不同组间观察指标的变化采用单因素方差分析,两两多重比较采用LSD-t检验。结果 细胞因子联合组及zVAD联合组作用48 h后HaCaT细胞出现坏死样形态特征。噻唑蓝实验显示作用48 h后,IFN-γ组、TRAIL组、细胞因子联合组、zVAD联合组、阴性对照组细胞存活率分别为73.16% ± 5.71%、81.46% ± 4.68%、72.18% ± 2.93%、69.67% ± 3.24%、100%,5组间差异 有统计学意义（F = 24.34,P < 0.001）。细胞因子联合组、zVAD联合组细胞坏死率分别为9.86% ± 1.31%、10.33% ± 2.16%,均高于阴性对照组（5.26% ± 0.91%,t值分别为4.61、5.07,均P < 0.05）。qPCR结果示,细胞因子联合组、zVAD联合组RIP3、MLKL mRNA表达水平明显高于阴性对照组（tRIP3分别为0.99、1.84,tMLKL分别为1.51、2.17,均P < 0.05）。Western印迹结果示,与阴性对照组相比,细胞因子联合组RIP1、RIP3、MLKL及其磷酸化蛋白表达水平升高（均P < 0.05）,且zVAD预处理后caspase 8水平下降,上述蛋白表达进一步升高。荧光显微镜示IFN-γ和TRAIL联合作用后,细胞质中可见强绿色点状或团块状荧光斑点（pRIP3）,在细胞膜可见明显红色荧光斑点（pMLKL）。活性氧检测示细胞因子联合组平均荧光强度高于阴性对照组,t = 702.00,P < 0.05。结论 IFN-γ和TRAIL可联合诱导HaCaT细胞程序性坏死,并伴有活性氧水平上升。     

云南省文山州银屑病患者血清C3水平与代谢综合征相关性分析

目的:探讨云南省文山州银屑病患者血清补体C_3与代谢综合征(MS)间的相关性。方法:选取云南省文山州728例银屑病患者(银屑病组)及756名体检者(健康对照组),比较银屑病患者与健康对照组MS发生率及补体C_3水平,进一步对银屑病合并和不合并MS患者的临床资料、补体C_3水平进行比较,分析影响合并MS的银屑病患者补体C_3水平的相关因素。结果:银屑病组患者高血糖及血脂异常发生率均高于健康对照组(P0.05),MS发生率高于健康对照组(P=0.003)。饮酒是云南省文山州银屑病患者合并MS的高危因素(P=0.013)。与不合并MS的银屑病患者相比,合并MS的银屑病患者血清补体C_3更高(P=0.015),且C_3与体质指数(BMI)、银屑病面积和严重程度指数(PASI)正相关(P0.05),与寻常型和关节病型银屑病相关(P0.05)。结论:云南省文山州银屑病患者更易发生MS;血清补体C_3水平与MS的发生相关,且与银屑病病情严重程度相关,在寻常型和关节病型银屑病患者中尤其较高。     

银屑病分型与甲状腺功能障碍的关系

 目的 探讨银屑病分型与甲状腺功能障碍的关系。方法 收集复旦大学附属华山医院皮肤科2013年月至2018年10月临床确诊为银屑病并做过甲状腺功能检查的住院患者,共计468例。检测血清游离三碘甲状腺原氨酸（free triiodothyronine,FT3）、游离甲状腺素（free thyroxine,FT4）、总三碘甲状腺原氨酸（total triiodothyronine,TT3）、总甲状腺激素（total thyroxine,TT4）、促甲状腺激素（thyroid-stimulating hormone,TSH）、甲状腺球蛋白抗体（anti-thyrogloblin antibody,TGAb）和甲状腺过氧化物酶抗体（anti-thyroperoxidase antibody,TPOAb）;分析寻常型、脓疱型、红皮病型和关节病型银屑病患者的甲状腺功能,比较各型银屑病中垂体-甲状腺轴各项激素和抗体水平的差异。结果 寻常型银屑病患者血清垂体-甲状腺轴各项激素水平正常的比例更高（P<0.001）,而在红皮病型银屑病患者中更易发生FT3或FT4下降但TSH正常（P<0.001）。脓疱型银屑病患者中FT3水平更低（P<0.05）,红皮病型银屑病患者中FT4水平更低（P<0.05）,关节病型银屑病患者中TSH水平更高（P<0.05）。各组银屑病患者TPOAb平均水平均高于正常值,但在4组银屑病患者中TPOAb和TGAb水平差异无统计学意义。结论 银屑病与桥本氏甲状腺炎相关的甲状腺功能障碍存在一定的关联,尤其在非寻常型银屑病中,但在红皮病型银屑病中需注意合并正常甲状腺病态综合征的可能。