尖锐湿疣患者皮损及外周血CD4^＋和CD8^＋细胞免疫功能的检测

目的通过对尖锐湿疣（CA）患者皮损及外周血CD4^＋和CD8^＋细胞免疫功能检测的分析,探讨尖锐湿疣患者细胞免疫功能的变化及其对CA的影响。方法通过流式细胞仪（FCM）对40例CA患者及20名正常人外周血进行反映细胞免疫功能的T淋巴细胞亚群的检测,实验采用免疫组化的方法对40例CA皮损样本中CD4^＋和CD8^＋细胞的数目进行检测。结果CA患者外周血及皮损较正常对照组中的CD8^＋细胞百分率增加．CD4^＋细胞百分率及CD4^＋／CD8^＋比值降低。结论CA患者存在全身和局部的细胞免疫功能低下,而且局部皮损细胞免疫功能低下可能在CA的发病中具有重要作用。     

睾丸特异性新基因T490真核荧光表达载体的构建及其表达

目的 构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的睾丸特异性新基因T490超表达质粒pDT490-EGFP,检测其在Hela细胞中的表达情况.方法 采用RT-PCR的方法从成年Balb/c小鼠睾丸组织中扩增T490基冈,将该基凶连接克降到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,再将T490和EGFP融合基因酶切下来,克隆到pcDNA3.1(-)真核超表达载体上,以构建重组质粒pDT490EGFP.将该重组质粒通过阳性脂质体Lipofectamine 2000导入Hela细胞系中,在荧光显微镜F观察转染24h后融合基因的超表达情况,并用RT-PCR的方法进一步证实目的 基因mRNA的表达水平.结果 RT-PCR获取编码T490基因的全序列cDNA,大小为508bp;DNA测序和PCR方法证实T490和EGFP融合基因成功克隆到真核超表达载体L;在荧光显微镜下,转染24h后的Hela细胞具有很强的绿色荧光;RT.PCR显示转染后的Hela细胞T490基因mRNA的表达明显.结论 重组质粒pDT490-EGFP构建成功,并在细胞内明显表达,此质粒可应用于研究睾丸特异性新基因T490的功能,为T490的生物学研究奠定基础.     

被动吸烟对胃肠道动力影响的实验研究

目的：被动吸烟对小鼠胃肠道动力的影响。方法：采用正常环境小鼠和被动吸烟环境下的小鼠进行胃排空（甲基橙胃残留率）和肠道蠕动（炭末推进率）试验,观察小鼠在不同环境中胃肠道运动的结果。结果：浓度3.93%（烟碱含量）烟熏环境中的小鼠与较正常环境中小鼠的甲基橙胃残留率和炭末推进率均降低,有显著性差异（P〈0.05）。浓度11.80%烟熏环境中的小鼠胃排空率低于7.87%烟熏环境的小鼠（P〈0.05）,7.87%烟熏环境的小鼠炭末推进率低于3.93%烟熏环境的小鼠（P〈0.05）。结论：不同被动吸烟环境对小鼠胃肠道动力有抑制作用。     

RNAi抑制皮肤鳞癌A431细胞EGFR表达的实验研究

目的:研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)对皮肤鳞癌A431细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因表达的抑制作用及其对A431细胞增殖、凋亡的影响.方法:设计制备两对针对EGFR基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染A431人皮肤鳞癌细胞株,采用RT-PCR法检测EGFR mRNA的表达;Western Blot测定EGFR蛋白的表达;MTT法检测细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:siRNA2干扰后EGFR mRNA与蛋白的表达强度分别为(16.5±1.6)%和(11.1±1.6)%,与对照组比较有统计学差异(P<0.05);在EGFR表达受到抑制的同时,转染后的A431胞生长速度明显变慢;A431细胞的凋亡率为(12.6±1.4)%,与对照组比较有统计学差异(P<0.05).结论:siRNA2能有效抑制皮肤鳞癌细胞EGFR基因的表达,抑制细胞的增殖,并促进细胞凋亡.     

白芍总苷对经肿瘤坏死因子-α诱导的HaCaT细胞细胞因子分泌的影响

目的观察白芍总苷（TGP）对体外培养的Hacalr细胞白细胞介素（IL）-6、IL-8、IL-10、干扰素（IFN）-γ分泌的影响，以及肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导的HaCaT细胞IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ分泌在白芍总苷的作用下是否发生变化，从而进一步探讨银屑病的发病机制及白芍总苷治疗银屑病的可能作用机制。方法本实验运用TNF—α诱导HaCaT细胞，并用不同浓度的TGP进行处理，通过ELISA法检测TGP作用前后细胞因子分泌的变化。结果TGP对经TNF-α诱导的HaCaT细胞IL-6、IL-8、IFN-γ分泌有抑制作用，而对IL-10分泌有促进作用。且这两种作用均与药物作用浓度相关。结论TGP可能通过抑制HaCaT细胞IL-6、IL-8及IFN-γ的分泌，提高IL-10的分泌，进而发挥一定的免疫调节作用，从而达到治疗银屑病的作用。     

白藜芦醇对黑素瘤细胞株A375增殖及骨桥蛋白表达的影响

目的:确定白藜芦醇(Resveratrol,Res)对黑素瘤细胞株A375细胞增殖及骨桥蛋白表达的影响.方法:用不同浓度的白藜芦醇处理A375细胞,MTT比色法分别检测白藜芦醇对细胞增殖的抑制作用,RT- PCR和蛋白印迹方法检测骨桥蛋白的mRNA和蛋白的表达.结果: 白藜芦醇对A375细胞增殖的抑制呈时间和浓度依赖性;白藜芦醇能显著减少内皮素作用后黑素瘤细胞株A375骨桥蛋白中mRNA和蛋白的表达(P＜0.05).结论: 白藜芦醇作为内皮素受体拮抗剂有可能通过抑制内皮素受体(ETR-B)下调骨桥蛋白的表达,进而抑制A375细胞的增殖.     

白藜芦醇对人黑素细胞的细胞毒性作用研究

为探讨白藜芦醇对体外培养的正常人黑素细胞的细胞毒性作用,采用不含佛波醇酯和霍乱毒素的培养液培养黑素细胞,白藜芦醇处理细胞后,分别用显微镜观察细胞形态,CCK-8法测定细胞的增殖活性,Annexin V/PI染色法检测细胞的凋亡率,并与熊果苷的作用比较.白藜芦醇在10 μM时的细胞形态和密度与对照组无明显差异,50 μM以上时细胞梭形化,树突减少;白藜芦醇0.1～10 μM时对细胞无增殖抑制作用,50～1000 μM时则呈剂量依赖性地抑制细胞增殖;白藜芦醇0.01～10 μM时的细胞早期、晚期和总凋亡率与空白对照组相比均无明显差异(P>0.05),且较熊果苷组低.白藜芦醇在50 μM浓度以上能改变人黑素细胞的形态并抑制其增殖,而在10 μM浓度以下无细胞毒性作用.     

内皮素对黑素细胞的调控作用

内皮素系统包括内皮素及其受体。该系统能够单独或者协同α-黑素细胞刺激素、干细胞因子和编码性别相关转录因子等信号分子调节黑素细胞的发育、分化、增殖、黑素合成、黏附和移行，并在色素沉着过度、白癜风和黑素瘤等皮肤色素障碍性疾病的发病过程中起着重要的作用。因此，深入研究内皮素系统与色素障碍性疾病的关系，以及研发选择性作用于内皮素受体的新型药物将为某些色素障碍性皮肤病的治疗提供新的思路和方法。     

不含佛波醇酯和霍乱毒素条件下黑素细胞的培养

目的:建立不含佛波醇酯(TPA)和霍乱毒素(CT)培养液培养人类正常表皮黑素细胞的方法,避免TPA的致瘤危险和霍乱毒素的毒性。方法:临床环切包皮经中性酶-胰酶(D ispaseⅡ-Trypsin)两步消化后,获得表皮基底细胞悬液,于不含TPA和CT的KC-SFM角质形成细胞无血清培养基培养,用差速贴壁法及胰酶差速消化法去除角质形成细胞,用两段法去除成纤维细胞污染,观察黑素细胞的增殖情况和树突伸展状态,采用多巴(Dopa)染色和免疫组化对黑素细胞进行鉴定。结果:经过7天的培养,黑素细胞达到70%汇合,细胞呈双极、三极或多极的树突状。经1-2次传代,黑素细胞纯度达98%以上,Dopa染色和抗S-100单抗染色阳性。结论:用不含TPA和CT的KC-SFM角质形成细胞培养基可以获得大量高纯度黑色素细胞。     

白藜芦醇和全反式维A酸对人黑素瘤细胞株A375 LSD-1表达的影响

目的: 确定白藜芦醇(resveratrol,Res)和全反式维A酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对人黑素瘤细胞株A375赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶 1(LSD-1)基因表达的影响.方法: MTT比色法检测Res和ATRA对A375细胞增殖的抑制;倒置显微镜观察A375细胞形态的变化;RT-PCR方法检测LSD-1的mRNA的表达.结果: Res和ATRA均能抑制A375细胞的增殖.100 μmol/L Res及25.0 μmol/L ATRA均能显著减少人恶性黑素瘤细胞株A375中LSD-1的mRNA的表达, 与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),但对LSD-1的下调作用无显著差异(P＞0.05).结论: 抑制黑色素瘤细胞LSD-1的表达,可能是Res和ATRA抗肿瘤的途径之一.