针对丝聚合蛋白基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建及筛选

目的构建丝聚合蛋白(FLG)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体。方法设计针对人FLG基因的mRNA干扰靶序列,合成相应双链DNA,通过BamH I和EcoRI酶切后的PGLV/H1/GFP载体连接产生shRNA载体,并与pHelper 1.0、pHelper 2.0两种载体共转染293T细胞培养,获得重组慢病毒载体后,转染目的细胞,实现针对FLG基因的RNA干扰。结果经鉴定该实验的慢病毒载体,对人正常皮肤细胞HACAT干扰效果达75%~95%,以RNAi3的沉默效应最佳。结论重组的慢病毒载体为有关FLG基因的进一步研究奠定良好实验基础,并能广泛用于体内基因治疗及基因功能研究。     

中波高能紫外线诱导豚鼠皮肤色素沉着改变的实验研究

目的 观察中波高能紫外线对皮肤色素沉着的诱导作用及其色素增加的作用机制。方法 以正常棕黄色豚鼠皮肤为实验模型,在其背部脱毛处理后,取4个相邻的区域依次作为对照组和低、中、高剂量中波高能紫外线照射组,分别采用肉眼评估、黑素细胞染色（Imokawa法）以及黑素颗粒染色（Masson-Fontana法）方法,研究中波高能紫外线所致色素沉着作用;应用免疫组化染色法对不同照射剂量组豚鼠皮肤中的一氧化氮合酶（NOS）进行检测;HE染色观察表皮组织学改变。结果 各照射组均出现不同程度的色素沉着,除中、高剂量组色素沉着评分结果差异无统计学意义外,其余各组的色素沉着评分平均黑素数量以及多巴阳性黑素细胞数之间的差异均具有统计学意义（P < 0.05）,且中剂量组结果高于高剂量组。诱导型NOS的表达呈照射剂量依赖式递增,对照组和低、中、高剂量组诱导型NOS含量评分中位数分别为0.50、1.25、1.75、2.00,组间差异具有统计学意义（P < 0.05）。结论 中波高能紫外线可诱导豚鼠皮肤色素增加,且这种效应有一定的剂量依赖性,但并非剂量越高越好。短期内接受中波高能紫外线照射是安全有效的。     

二甲基苯蒽?巴豆油联合 NB－ UVB 照射构建鳞状细胞癌动物模型

@@@@目的：建立二甲基苯蒽？巴豆油外涂联合窄谱中波紫外线（NB－UVB）照射诱导小鼠皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）动物模型。方法：取120只健康小鼠，随机分为4组：A组（40只）外涂二甲基苯蒽？巴豆油，联合NB－UVB照射；B组（40只）涂二甲基苯蒽？巴豆油；C组（20只）仅照射NB－UVB；D组（20只）仅外涂丙酮液。定期肉眼观察小鼠背部皮肤的变化，并于第5、15、20周统计各组存活小鼠数及荷瘤小鼠数，计算荷瘤率。20周时取肿瘤组织行组织病理检查，分别计算各组小鼠皮肤鳞癌的发生率。结果：第20周时A、B、C、D组小鼠荷瘤率分别为86．7％、66．7％、21．1％、0。鳞癌发生率分别为：56．7％、21．2％、0、0。 A组与B组相比鳞癌发生率差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：外涂二甲基苯蒽？巴豆油联合NB－UVB较单独外涂二甲基苯蒽？巴豆油可以提高小鼠皮肤鳞癌的发生率。