早期分裂三细胞对囊胚形成预测的研究

目的通过观察体外成熟卵母细胞显微注射受精后胚胎特定时间段是否经历早期分裂的三细胞阶段来对其囊胚形成潜能进行预测。方法未成熟卵子体外成熟后行卵胞浆内单精子注射（ICSI）,授精后33．9～42．9h内每小时观察1次,记录三细胞胚胎形成数,授精后6d统计囊胚形成率。结果经过三细胞阶段的胚胎囊胚形成率（76．67％）明显高于未出现三细胞阶段（4．17％）,差异有统计学意义（P＜0．05）;并且在39．9h之前出现的三细胞胚胎,其囊胚形成率最高。结论通过观察胚胎分裂早期是否经历三细胞阶段可对囊胚形成率有较好的预测,为建立有效的、无创的早期预测胚胎发育潜能的指标奠定理论基础。     

高通量筛选肿瘤转移相关基因的研究

目的利用高通量双萤光素酶报告基因系统筛选与肿瘤转移相关的人类功能基因。方法利用与肿瘤转移相关的重要因子——血管内皮生长因子（VEGF）,将含有VEGF反应序列的萤光素酶报告基因（VEGF—LUC）质粒与409个待筛人类功能基因真核表达质粒共转染Hela细胞以筛选影响VEGF．LUC表达的人类功能基因,进一步通过Westernblot在蛋白质水平验证初筛阳性的基因对细胞内VEGF蛋白表达量的影响。结果染色质重塑蛋白4A（CHMP4A）明显增强VEGF．LUC相对萤光素酶值（P〈0．05）,Westernblot结果表明CHMP4A明显增强Hela细胞内VEGF的表达。结论初步筛选到一个可能通过影响VEGF活性增强肿瘤侵袭性的基因CHMP4A。     

拷贝数变异测序在染色体易位夫妇植入前遗传学诊断中的临床应用

目的探讨拷贝数变异测序(copy number variation sequencing, CNV-seq)用于染色体易位夫妇胚胎植入前诊断的应用价值。 方法回顾性分析2017年1月至2018年12月,在广东省妇幼保健院生殖健康与不孕症科进行植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)的211对染色体易位夫妇患者的临床病例。使用CNV-seq对胚胎染色体进行检测,并对患者一般信息和PGD结果进行分析。 结果1210个胚胎中,被检出837个(79.2%)胚胎存在染色体异常,373个(30.8%)胚胎为整倍体。在241个PGD周期中,68个(27.6%)周期所有胚胎均存在染色体异常,178个(72.4%)周期至少含有一个整倍体胚胎。在176个移植周期中,130个(73.9%)确定临床妊娠,已出生46个健康婴儿,12例发生早期流产。 结论CNV-seq可准确地区分胚胎染色体是否存在异常,避免因胚胎含有染色体异常而被移植,是一种可靠而准确的PGD技术。     

高通量筛选肿瘤转移相关基因的研究

目的 利用高通量双萤光素酶报告基因系统筛选与肿瘤转移相关的人类功能基因.方法 利用与肿瘤转移相关的重要因子——血管内皮生长因子(VEGF),将含有VEGF反应序列的萤光素酶报告基因(VEGF-LUC)质粒与409个待筛人类功能基因真核表达质粒共转染Hela细胞以筛选影响VEGF-LUC表达的人类功能基因,进一步通过Western blot在蛋白质水平验证初筛阳性的基因对细胞内VEGF蛋白表达量的影响.结果 染色质重塑蛋白4A (CHMP4A)明显增强VEGF-LUC相对萤光素酶值(P＜0.05),Western blot结果表明CHMP4A明显增强Hela细胞内VEGF的表达.结论 初步筛选到一个可能通过影响VEGF活性增强肿瘤侵袭性的基因CHMP4A.     

电离辐射影响成纤维细胞基因调控网络的初步研究

目的 探讨电离辐射影响人成纤维细胞基因表达的转录调控机制,并构建基因与相应转录因子的调控网络.方法 先对前期研究已经获得的差异表达基因进行功能注释,选择结合功能类基因(数量最多)进人研究:再用MaxLAPS,TFME和SCOPE 3种软件预测这些基因的转录因子和转录因子结合位点;利用Bibliosphere软件构建转录因子与基因的转录调控网络.结果 获得25条Gene Symbols,基因本体功能注释集中于结合功能(共19条),2种程序预测得到14个相同的转录因子,得分最高的6个转录因子结合位点对应的转录因子与预测的基本一致.按照最高水平标准构建的转录调控网络,显示CASPASE-3位于网络的核心.结论 电离辐射很可能经转录因子TP53介导CASPASE-3激活而致人成纤维细胞凋亡.     

电离辐射影响成纤维细胞基因调控网络的初步研究

目的探讨电离辐射影响人成纤维细胞基因表达的转录调控机制，并构建基因与相应转录因子的调控网络。方法先对前期研究已经获得的差异表达基因进行功能注释，选择结合功能类基因（数量最多）进入研究；再用MaxLAPS，TFME和SCOPE3种软件预测这些基因的转录因子和转录因子结合位点；利用Bibliosphere软件构建转录因子与基因的转录调控网络。结果获得25条Gene Symbols，基因本体功能注释集中于结合功能（共19条），2种程序预测得到14个相同的转录因子，得分最高的6个转录因子结合位点对应的转录因子与预测的基本一致。按照最高水平标准构建的转录调控网络，显示CASPASE-3位于网络的核心。结论电离辐射很可能经转录因子TP53介导CASPASE-3激活而致人成纤维细胞凋亡。     

二代测序技术在东南亚缺失型α珠蛋白生成障碍性贫血夫妇胚胎植入前遗传学检测中的应用

目的 探讨二代测序技术在东南亚缺失型(――SEA)α珠蛋白生成障碍性贫血(以下简称"地贫")夫妇胚胎植入前遗传学检测中的应用价值.方法 选取1对2017年12月于广东省妇幼保健院就诊的东南亚缺失型α地贫不孕不育夫妇.选择――SEA缺失区域为目标区域,在其上下游2 Mb区域内选择高密度紧密连锁的单核苷酸多态性(SNP)位...     

华蟾素注射液对HepG2细胞NF-κB通路的影响

目的探讨华蟾素注射液对肝癌细胞株HepG2NF-κB通路的影响。方法在TNF-α激活NF-κB通路的条件下利用双荧光素酶报告基因系统检测华蟾素注射液对含有NF-κB反应元件的萤火虫荧光素酶报告基因pNF-κB-TA-luc转录活性的影响。Western blotting进一步验证华蟾素注射液对HepG2细胞核内NF-κB亚基p65蛋白量的影响,同时半定量RT-PCR检测NF-κB下游靶基因细胞间黏附分子1(ICAM-1)的转录水平。结果0.25、0.5μg/ml浓度的华蟾素注射液可有效地抑制pNF-κB-TA-luc报告基因的相对荧光素酶值(P<0.05)。Western blot结果进一步证明华蟾素可使NF-κB亚基p65蛋白量降低,RT-PCR结果表明NF-κB下游靶基因ICAM-1表达降低。结论华蟾素注射液的抗癌机制可能与抑制癌细胞NF-κB通路的活化有关。     

蚊浓核病毒非结构蛋白1的生物信息学分析

目的 通过生物信息学分析软件对蚊浓核病毒(mosquito densovirus,MDV)菲结构蛋白1(Nostructual proteinl,NS1)的结构与功能进行分析预测.方法 应用EXPASY pmtparam tool、ClagtalX1.83、Bioedit、MEGA3.1、ScanProsite、Motifscan等分析软件和在线生物信息学分析工具对MDVNS1的理化特性、同源性、进化关系、二级结构与主要功能结构域进行分析预测.结果 MDV NSI属不稳定亲水性蛋白,氨基酸序列高度保守,与虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)进化距离较近;MDV NSI具有小分子DNA病毒编码的解螺旋酶超家族3(Saperfamily 3 helicage of DNA viruses)的结构域,该结构域包含有NTP-binding区域,使其具有金属离子依赖的ATPase的活性,蛋白靠近N端包含有病毒滚筒复制rolling-circle replication(RCR)起始蛋白的结构域并具有单链切口酶的生物学功能.结论 生物信息学预测结果提示MDV NS1蛋白在病毒的复制、包装等各个阶段起关键性作用.     

短时受精联合早期补救性ICSI 与重复周期直接ICSI 的临床数据分析

目的回顾性分析本中心2013年1月~2015年1月的77例短时受精联合早期补救性ICSI的患者与该中心同期3295个直
接ICSI的患者正常受精率、优胚率、妊娠率的对比。整理其中17例第一周期常规IVF受精失败联合早期ICSI补救未妊娠的患
者与该患者重复周期直接ICSI的临床数据分析。方法回顾性收集2013年1月~2015年1月期间在我中心接受IVF治疗3295个
周期,其中受精完全失败77个周期,发生率为2.3%,839个成熟MII卵子行早期补救性ICSI,2PN率69%、优胚率89.2%、临床妊
娠率48%。对其中短时受精联合早期ICSI补救移植胚胎未妊娠的17例患者与该患者重复周期直接行ICSI的临床结局进行分
析：257个成熟MII卵子行ICSI,2PN率73%、优胚率68%、临床妊娠率55%。结论短时受精失败后行补救性ICSI,可以减低取
消周期数目,获得较高的受精率和优胚率,但是其临床妊娠率仍低于本中心同期ICSI的临床妊娠率;相同患者重复周期直接
ICSI的2PN率、优胚率均较短时联合早期补救ICSI高,17例患者中3例获得临床妊娠。