大肠癌相关免疫球蛋白新基因SNC73结构与表达研究

目的 研究由减式杂交方法获得的人大肠癌相关基因SNC734 结构和功能。方法 对SNC73的cDNA进行了核苷酸序列测定,分析得到全长序列,并对其编码的蛋白进行了分析及预测;采用In situ-Max荧光原位杂交方法结合荧光R带技术对SNC73在人染色体上的定位作了研究;利用Northern杂交、逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法检测了SNC73在多种肿瘤细胞系中的表达,及在大肠癌组织与这粘中膜中的表达情况;应用原位杂交／原位PCR技术检测SNC73 mRNA在肠上皮中的表达情况。结果 对SNC73序列及开放阅读框9ORF）进行分析,发现其与免疫球蛋白IgA高度同源,为一免疫球蛋白样基因。该基因定位于人染色体14q3 2。SNC73在大肠癌组织也 肠粘膜的表达有差异（P＜0.05）。SNC73在肠上皮表达阳性。结论 SNC73在大肠癌中低表达,可能为一新的肿瘤标记物,并提示上皮细胞、非淋巴细胞存在IgA类的蛋白。     

肿瘤相关基因SNC90 cDNA真核细胞表达型重组质粒的构建及其转染研究 *

目的:构建肿瘤相关基因SNC90哺乳动物细胞表达型载体并进行转染研究.方法:肿瘤相关基因SNC90cDNA片断亚克隆至哺乳动物细胞表达型质粒pREP9中,并运用脂质体和电穿孔法将重组质粒pREP9-SN90转入3株人大肠癌细胞中,用G418筛选抗性细胞克隆.结果:重组体pREP9-SN90对SW1116,COLO205和SW620肠癌细胞株克隆形成均有一定的抑制作用,抑制率分别为72.2%,74.2%和59.7%.结论:这提示肿瘤相关基因SNC90对肠癌细胞生长起负性调节作用.     

Construction of p53 antisense RNA expression vector and its effect on colon cancer cells

Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｐ５３ａｎｔｉｓｅｎｓｅＲＮＡｅｘｐｒｅｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒａｎｄｉｔｓｅｆｅｃｔｏｎｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｓＣａｏＪｉａｎｇ曹江，ＴｅｎｇＬｉｓｏｎｇ滕理送，ＺｈｅｎｇＳｈｕ郑树，ＣａｉＸｉｎｈａｎ蔡心涵ａｎｄＧｅ...     

原位杂交检测新免疫球蛋白基因 SNC73 在大肠癌中的表达

目的：确定新免疫球蛋白基因 SNC73在大肠癌中的组织学定位;观察它在大肠癌发生、发展不同阶段的表达状况;探讨其表达与大肠癌表型的相关性。方法：用地高辛标记的原位杂交技术检测 SNC73基因在 29例大肠癌病人的正常肠粘膜、癌旁粘膜、腺瘤 (5例 )以及癌组织中的表达状况。结果： SNC73基因的表达发生在大肠的正常腺上皮结构上,着色颗粒位于胞浆,胞核无或着色较淡;癌组织中没有或有少量表达,且一般较正常粘膜染色为淡; SNC73基因在肠粘膜的淋巴滤泡中可见较多的阳性染色,而在其他间质和肌层中未见明显阳性信号。正常粘膜标本中 SNC基因阳性率为 62.07％;癌旁粘膜中 31.03％;腺瘤中 20.00％;癌组织中 20.69％。 SNC73基因在同一大肠癌病人正常粘膜和癌组织中表达之间存在显著性差异（ P<0.01） ,在大肠癌组织中表达的阳性率明显低于正常肠粘膜。结论： SNC73基因在大肠癌中的表达率一定程度上低于相应的正常粘膜,其生物学功能可能不同于一般意义上的免疫球蛋白。     

应用套式PCR克隆ST13基因cDNA的5′端序列

目的 获得ST13基因cDNA5′端的未知序列.方法 应用套式PCR方法直接从cDNA文库中扩增该基因的5′端序列,然后将扩增的片段克隆到pGEM-T.easy载体,并进行序列分析.结果 第1次PCR后得到1条约550bp的片段,经套式PCR后获得1条约480bp的片段,经序列分析证实该扩增的片段是ST13基因cDNA的5′端未知序列.结论 套式PCR技术是克隆基因cDNA的5′端未知序列较简捷、有效的方法.     

pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As重组质粒构建及其转染Bcap-37细胞后细胞凋亡的研究

目的构建人反义Hsp70重组质粒[pcDNA3．1（＋）-Hsp70^144-517As]并观察其对乳腺癌Bcap-37细胞凋亡特性的影响。方法依照人hsp70mRNA全长序列，通过计算机分析，设计一对引物，在上游引物中带有1个BamHⅠ位点，经RT—PCR扩增、电泳、回收和纯化hsp70144—517片段，通过T—A克隆到pGEM—TEasy原核表达质粒中，经DNA测序和EcoRⅠ酶切图谱鉴定；EcoRⅠ酶切产物回收后亚克隆到pcDNA3．1（＋）质粒中EcoRⅠ位点之间，利用BamHⅠ酶切图谱筛选反向插入重组质粒，经DNA测序得到pcDNA3．1（＋）-Hsp70^144-517As重组质粒。以脂质体介导法将pcDNA3．1（＋）-Hsp70^144-517As转染列乳腺癌Bcap-37细胞中并克隆培养建株得到AsHsp—Bcap细胞。以DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞周期分析观察转染细胞的凋亡特性。结果本研究成功构建人反义hsp70重组质粒[pcDNA3．1（＋）-Hsp70^144-517As]；转染到乳腺癌Bcap-37细胞后在DNA琼脂糖凝胶电泳上观察到细胞凋亡特征性DNA Ladder及流式细胞周期分析发现G1峰前有1个特征性Ap峰（亚二倍体峰）。结论构建人反义重组质粒pcDNA3．1（＋）-Hsp70^144-517As对乳腺癌Bcap-37细胞有促进细胞凋亡的作用。     

A novel serine protease SNC19 associated with human colorectal cancer

Objective To study the structure and function of a novel serine protease gene associated w ith human colorectal cancer SNC19.Methods The cDNA sequence was determined by both manual and automatic sequencing techniq ues. The full length cDNA sequence was obtained by the 5’-Rapid Amplification of cDNA Ends technique and web-based analysis. Open reading frame analysis and protein function prediction were also performed. Northern blot was used to det ect the expression of SNC19 in various human normal tissues and tumor cell lines . Fluorescent in situ hybridization combined with fluorescent R-banding techni que was employed to map the SNC19 gene on human chromosome.Results Full length SNC19 cDNA, size 3152 bp, encodes a protein highly homologous to a m ouse serine protease epithin. In normal human tissues, high SNC19 expression le vels were observed in the kidney, pancreas, prostate, small intestine and colon; moderate SNC19 expression levels were observed in the placenta, lung, liver, sp leen thymus, testis and peripheral blood lymphocytes; and extremely low expressi on levels were observed in the heart, brain, skeletal muscle and ovary. In tumo r cell lines, colorectal cancer cells SW480, SW620, SW1116 and Colo205, breast c ancer cell Bcap37 and gastric cancer cells MKN28 and SGC7901 showed high levels of SNC19 expression; cervical cancer cell HeLa-S3, lung cancer PAA, oral epithe lial cancer cell KB and lymphoma cell Raji showed moderate levels of SNC19 expre ssion; and tongue squamous cancer cell Tca8113, leukemia cells HL-60, K562, MOL T-4, lung cancer cell A549 and melanoma cell G361 showed very low levels of SNC 19 expression. SNC19 was mapped to human chromosome 11q24-25. Conclusion SNC19 encodes a novel human serine protease with 855 amino acid residues. As a novel serine protease associated with human colorectal cancer, the expression of SNC19 in various tissues and cell lines may have very important impact on their phenotypes and biological behaviors.     

原位杂交检测新基因ST13（SNC6）在大肠癌中的表达及临床意义

目的 确定新基因ST13在大肠癌中的组织学定位,观察它在大肠癌发生、发展不同阶段的表达情况,探讨其表达与大肠癌临床病理特征的关系。方法 用RNA－RNA原位杂交的方法检测ST13基因在30例大肠癌病人的正常肠黏膜、癌旁黏膜、腺瘤以及癌组织中的表达状况。结果 ST13基因表达在大肠的正常腺上皮结构上,着色颗粒位于胞浆,而胞核无或着色较淡,癌组织中没有或有少量表达,且一般较正常黏膜染色为淡;在间质和肌层中未见明显阳性信号。正常黏膜标本中阳性率为20／30;癌旁黏膜中15／30;腺瘤中4／4;癌组织中9／30。ST13基因在同一大肠癌病人正常黏膜和癌组织中表达之间存在显著性差异（P＜0．01）。在癌组织中ST13有表达和无表达病例组之间Dukes各期分布有差别,有表达者中属DukesA期和B期为多,C期为少;而无表达者中C期较多,A、B期为少,但差异无显著性（P＝0．052）。同时,还发现有淋巴结转移者ST13在癌组织中表达阳性率（3／17）低于无淋巴结转移者（6／13）,但差异无显著性（P＝0．099）。结论 ST13基因在大肠癌中的表达率低于相应的正常黏膜,此种低表达多见于Dukes C期及淋巴结转移者,ST13基因可能在大肠癌的发生、发展中起作用。     

Screening and identification of down-regulated genes in colorectal carcinoma by subtractive hybridization: a method to identify putative tumor suppressor genes.

Ｓｃｒｅｎｉｎｇａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｏｗｎ┐ｒｅｇｕｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｂｙｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：ａｍｅｔｈｏｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｐｕｔａｔｉｖｅｔｕｍｏｒｓ...     

原位杂们检测新免疫球蛋白基因SNC73在大肠癌中的表达

目的确定新免疫球蛋白基因SNC73在大肠癌中的组织学定位;观察它在大肠癌发生、发展不同阶段的表达状况;探讨其表达与大肠癌表型的相关性。方法用地高辛标记的原位杂交技术检测SNC73基因在29例大肠癌病人的正常肠粘膜、癌旁粘膜、腺瘤(5例)以及癌组织中的表达状况。结果SNC73基因的表达发生在大肠的正常腺上皮结构上,着色颗粒位于胞浆,胞核无或着色较淡;癌组织中没有或有少量表达,且一般较正常粘膜染色为淡;SNC73基因在肠粘膜的淋巴滤泡中可见较多的阳性染色,而在其他间质和肌层中未见明显阳性信号。正常粘膜标本中SNC基因阳性率为62.07％;癌旁粘膜中31.03％;腺瘤中20.00％;癌组织中20.69％。SNC73基因在同一大肠癌病人正常粘膜和癌组织中表达之间存在显著性差异（P<0.01）,在大肠癌组织中表达的阳性率明显低于正常肠粘膜。结论SNC73基因在大肠癌中的表达率一定程度上低于相应的正常粘膜,其生物学功能可能不同于一般意义上的免疫球蛋白。