反义周期蛋白B1基因抑制HT29细胞的增殖

用ＤＮＡ重组技术将人类ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的全长ｃＤＮＡ，反向插入到真核表达载体ｐＸＪ４１－ｎｅｏ的ＢａｍＨ１位点，得到ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的反义ＲＮＡ表达载体ｐＡＳ－Ｂ１。利用ＤＮＡ磷酸钙共沉淀方法，将ｐＡＳ－Ｂ１转染进ＨＴ２９细胞。在含有Ｇ４１８的培养基中，挑选出独立的细胞克隆。利用ｃｙｃｌｉｎＢ１ｃＤＮＡ作探针，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交鉴定出一株内源性ｃｙｃｌｉｎＢ１ｍＲＮＡ受到抑制的细胞株ＨＴＢ１。比较ＨＴＢ１与对照细胞ＨＴ２９发现，ｃｙｃｌｉｎＢ１的反义ＲＮＡ明显抑制ＨＴ２９细胞的增殖，细胞内３Ｈ－ＴｄＲ参入量减少。流式细胞光度术分析，处于Ｇ１期细胞比率的升高与Ｓ期、Ｇ２＋Ｍ期细胞数量的下降都十分显著。     

NIH3T3细胞不同增殖时相c－fos和c－jun癌基因表达的动态分析

ＮＩＨ３Ｔ３细胞经血清刺激由静止期进入Ｇ１期，提取该期不同时相细胞的总体ＲＮＡ，并提取同步化于Ｇ１、Ｓ、Ｇ２和Ｍ期细胞的总体ＲＮＡ，分别与ｃ－ｆｏｓ（２．１ｋｂ）和ｃ－ｊｕｎ（１．８ｋｂ）基因探针进行斑点杂交。结果显示２个癌基因除了在血清刺激后１ｈ都出现ｍＲＮＡ聚集高峰外，ｃ－ｊｕｎ还在血清刺激后１６ｈ时出现第２个聚集峰，生长期细胞在细胞周期各时相均只有ｃ－ｆｏｓ基因的少量表达，而ｃ－ｊｕｎ在Ｓ期的表达量明显高于其他各期。说明ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ除了在细胞进入生长周期时发挥基因调控功能外，ｃ－ｊｕｎ还可能在晚Ｇ１／Ｓ期产生作用，这种作用不需ｃ－ｆｏｓ蛋白的参与。     

一种高效率的细胞同步化技术的建立

生命的基本特征是细胞增殖与分化。增殖与分化是通过细胞周期运转而实现的,细胞在生长过程中,各种分子事件特别是核分子事件,在细胞周期的各个时相中的发生、发展的研究,将是医学细胞生     

环孢菌素对朊细胞体外增殖及其殖相关基因表达的影响

本文观察了环孢菌对人角朊细胞ＣＯＬＯ－１６体外增殖及其增殖相关基因表达的影响。结果表明环孢菌素对角朊细胞的增殖及ＤＮＡ合成具有明显的剂量依赖性抑制作用。ＲＮＡ杂实验表明环孢菌素能显著地抑制解朊细胞ｃ－ｍｙｃ基因的表达；相反，对ＴＧＦ－β的表达则有显著的促进作用。提示环孢菌素抗银屑病的药理机制除了免疫抑制作用外，部分是通过调节角朊细胞的ｃ－ｍｙｃ及ＴＧＦ－β及ＴＧＦ－β基因的表达、进而抑制增殖而实现     

Id4对K562细胞增生的影响及其机制的探讨

为了探讨Id4基因的反义核酸对人红白血病K5 62细胞增生的作用 ,用DNA重组技术将人反义Id4基因插入到真核表达载体pXJ41 neo上 ,重组质粒和空载体分别转染K5 62细胞 ,得到 pAId4和 pK5 62 (对照 )克隆细胞株。发现 :pAId4的生长受到抑制 ,倍增时间加长。免疫印迹实验分析相关蛋白的表达 ,其中CDK4和CyclinD1在 pAId4细胞中的表达量均低于对照细胞 pK5 62 ,而RB蛋白在 pAId4细胞中的表达量高于对照细胞pK5 62 ,揭示了反义Id4引起细胞出现生长抑制的可能机制 ,并探讨了Id4基因对人红白血病K5 62细胞增生的具体作用。研究结果对造血干细胞的体外扩增、分化及红白血病的基因治疗均有重要的参考价值。     

空气负离子对γ线致死作用的影响

本文报告了不同时间用空气负离子处理的大鼠在接受707rad⁶⁰Coγ线照射后30天内的死亡率和平均活存时间,从而确定负离子对大鼠辐射抗性的影响。结果表明。(1)在受照射前后均用负离子处理的大鼠死亡率比对黑组少41%,平均活存时间明显延长,损伤恢复较快;(2)在受照射前用负离子处理,照射后给正常空气的大鼠死亡率比对照组少39%,平均活存时间也明显延长,(3)在受照射前给正常空气,照射后立即角负离子处理的大鼠在30天内全部死亡,平均活存时间显著缩短。     

V79和V798细胞周期及其调控因子的差异比较

为了解Ｖ７９和Ｖ７９－８两种细胞及调控因子的差异，用「＾３Ｈ『胸腺嘧核苷参入法检测两种细胞，发现Ｖ７９细胞无可检测到的Ｇ２期；Ｖ７９－８细胞则同时缺管可测到的Ｇ１和Ｇ２期。流式细胞光度术显示，Ｖ７９Ｇ１ＡＤＷＥ调控上存在差异。比较两者Ｇ１期周期调控因子的ｍＲＮＡ表达水平发现，Ｖ７９－８ｃｙｃｌｉｎＤ１，ｃｙｃｌｉｎＤ３和ＩＤ表达水平明显高于Ｖ７９，这可能直接导致了两者Ｇ１的差异。     

转化生长因子α，β对人结肠腺癌细胞株HT_（29）细胞生长调节影响的研究

用生长曲线、３Ｈ－ＴｄＲ参入及细胞周期分析等方法，研究了ＴＧＦ－α，β在体外对人结肠腺癌细胞株ＨＴ（２９）细胞的生长调节作用，为进一步探讨ＴＧＦ－α，β对ＨＴ（２９）细胞的生长调节作用机制，采用Ｄｏｔ杂交分析探讨了ＴＧＦ－α，β对ＨＴ（２９）细胞ｃ－ｍｙｃ基因ｍＲＮＡ表达的影响。结果发现ＴＧＦ－α可促进ＨＴ（２９）细胞生长和增殖，而ＴＧＦ－β则抑制其生长和增殖，ＴＧＦ－α可增加其ｃ－ｍｙｃ基因表达，而ＴＧＦ－β则抑制其ｃ－ｍｙｃ基因表达。本研究还采用肿瘤细胞无血清培养技术以及分子生物学方法，观察了ＨＴ（２９）细胞自分泌生长以及在其自分泌生长调控中ＴＧＦ－α，β，βｍＲＮＡ表达。研究发现ＨＴ（２９）细胞具有自分泌调控生长能力，在无血清培养条件下ＴＧＦ－αｍＲＮＡ表达增加，而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达则受到某种程度的抑制。上述研究结果表明ＴＧＦ－α，β分别作为正、负生长调节因子在ＨＴ（２９）细胞自分泌生长调节中可能具有重要作用。ＴＧＦ－α，β平衡失调同结、直肠癌发生、发展具有密切关系。     

转化生长因子α，β在人结、直肠癌、癌旁及正常肠粘膜组织中mRNA表达及其基因变化的分析

转化生长因子α，β（ＴＧＦ－α，β）分别作为正负自分泌生长调控因子，其在结、直肠癌的发生和发展过程中具有重要作用。本研究采用Ｄｏｔ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交等分子生物学方法，探讨了１２例人结、直肠癌组织、癌旁及正常肠粘膜组织中ＴＧＦ－α，βｍＲＮＡ表达程度及其基因变化。研究发现，ＴＧＦ－αｍＲＮＡ的表达由高到低依次为癌、癌旁及正常肠粘膜组织，但癌组织及癌旁肠粘膜组织间无显著差异（Ｐ＞０．０５）。另外，发现１例病人的癌旁组织ＴＧＦ－αｍＲＮＡ的表达明显升高，且高于其相应的癌组织。ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达由高到低的顺序与ＴＧＦ－αｍＲＮＡ相反，为正常肠粘膜组织、癌旁肠粘膜组织和癌组织，前两者间无显著差异（Ｐ＞０．０５），而其与癌组织间均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。其中有２例病人的癌旁组织中，ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达高于其相应的正常组织。研究还发现，ＴＧＦ－αｍＲＮＡ表达可能与其基因扩增有关，而引起ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达变化的机制尚不清楚。上述研究结果初步表明：人结、直肠癌组织中ＴＧＦ－αｍＲＮＡ表达的增加和ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达的降低，可能通过自分泌和旁分泌生长调控作用同结、直肠癌的发生和进展有密切