白癜风与氧化-抗氧化失衡

白癜风是一种较常见的色素脱失性疾病，临床上以表皮黑素细胞破坏缺失而出现色素脱失斑为主要特征，严重影响患者的外观美容。白癜风的病因学分子机制目前尚无定论，存在多种假说。近年来，对白癜风患者机体抗氧化水平的研究日益增多，越来越多证据提示，机体氧化-抗氧化平衡失调，导致局部微环境中活性自由基大量聚集，引起氧化应激，造成细胞损伤，是引起白癜风发病的一个重要因素。     

黑素细胞及相关细胞群参与白癜风发病的研究进展

【摘要】 白癜风发病机制复杂，黑素细胞缺失是核心。目前认为除黑素细胞自身缺陷外，表皮和真皮细胞群的功能异常及其与黑素细胞的交互作用对白癜风的发病同样重要，充分而准确地了解不同病期白癜风皮肤全层细胞、组织的病理生理状态，对认识和治疗白癜风有重要作用。本文旨在综述黑素细胞及相关细胞群在白癜风发病中作用的研究进展。     

先天性巨结肠症发病机制的分子遗传学研究进展

先天性巨结肠症（HD）是一种小儿常见神经嵴源性肠道异常性疾病,病因复杂,而遗传因素是影响其发病的主要因素,现将HD分子遗传学的发病机制和研究进展作一综述。     

Fam114A1蛋白对黑素细胞生物学功能影响的初步研究

【摘要】 目的 初步探讨Fam114A1对黑素细胞生物学功能的影响。方法 以黑素瘤细胞A375为工具细胞株,通过慢病毒转染的方式构建稳定过表达和抑制Fam114A1蛋白的细胞株,即过表达组和表达抑制组,以转染空载慢病毒的A375细胞作为对照组。实时荧光定量PCR检测Fam114A1对黑素合成相关基因酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TYRP1）、前黑素小体蛋白（PMEL）、小眼畸形相关转录因子（MITF）和多巴色素异构酶（DCT）mRNA表达的影响,Western印迹法检测TYR、MITF蛋白的表达,MTT法、Transwell迁移和黏附实验分别检测Fam114A1对A375细胞增殖活性、迁移细胞数及黏附能力的影响。统计分析采用单因素方差分析和Dunnett-t检验。结果 荧光显微镜观察慢病毒转染效率均在90%左右。与对照组A375细胞Fam114A1相对表达水平（0.850 ± 0.120）相比,过表达组显著升高（1.507 ± 0.170,t = 5.888,P = 0.001）,而表达抑制组显著降低（0.397 ± 0.120,t = 4.065,P = 0.007）,成功构建稳定过表达和抑制Fam114A1的A375细胞株。实时荧光定量PCR及Western印迹结果显示,表达抑制组TYR和MITF mRNA及蛋白表达均显著低于对照组（均P < 0.01）,而过表达组TYR和MITF mRNA及蛋白表达与对照组差异无统计学意义（均P > 0.05）。与对照组相比,表达抑制组细胞增殖活性和黏附能力显著增强（P = 0.009、0.001）,细胞迁移能力显著减弱（P = 0.005）,而过表达组仅细胞迁移能力显著增强（P = 0.021）。结论 Fam114A1可影响A375的增殖活性、迁移和黏附能力,且影响黑素合成相关蛋白TYR和MITF的表达,可能是一种参与调控黑素细胞生物学活性的功能蛋白。     

白癜风患者皮损处核因子E2p45相关因子2核转位异常

目的 明确白癜风患者皮损处是否存在核因子E2p45相关因子2(Nrf2)核转位异常.方法 应用试剂盒检测8例表皮移植白癜风患者皮损处与正常供皮处疱液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)水平,采用细胞免疫荧光组化法鉴定8例寻常型白癜风患者皮损处与正常供皮处表皮细胞以及3例健康对照包皮原代培养的表皮细胞中Nrf2的表达,同时应用蛋白质印迹法检测上述样本中表皮细胞的胞质和胞核中Nrf2的表达水平.结果 皮损处SOD与CAT水平显著低于正常供皮处(P＜0.05),MDA水平显著高于正常供皮处(P＜0.05);细胞免疫荧光结果显示,健康对照、患者正常供皮处Nrf2在表皮细胞的胞质和胞核中均有表达,而患者皮损处Nrf2表达主要集中在胞质,胞核中表达量非常低.蛋白质印迹结果显示,核蛋白中Nrf2表达水平,白癜风患者皮损处(0.11±0.03)明显低于正常供皮处(0.27±0.06)和健康对照(0.32±0.02,均P＜0.01);胞质蛋白Nrf2表达水平,皮损处(0.63±0.04)与正常供皮处(0.61±0.03)和健康对照(0.65±0.04)差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 白癜风患者皮损处表皮细胞存在Nrf2核转位异常.     

黑素生成素诱导小鼠成黑素细胞增殖和分化的研究

目的 观察从胎盘中提取的黑素生成素对小鼠成黑素细胞NCCmelb4M5增殖和分化的影响，从诱导成黑素细胞增殖和分化的角度，探讨其治疗白癜风的可能机制。方法 NCCmelb4M5细胞的增殖应用常规MTT法检测；倒置显微镜直接观察黑素生成素作用后细胞形态的变化。RT－PCR检测不同浓度黑素生成素作用后细胞表面分子表达的变化。结果 50，100，200 μg/mL的黑素生成素均可促进NCCmelb4M5细胞的增殖（P < 0.001），100 μg/mL作用效果最为明显；50，100 μg/mL黑素生成素可以刺激表面分子c-Kit和酪氨酸酶在NCCmelb4M5细胞中的表达由阴性转为阳性，并增加小眼畸形相关转录因子（MITF）在细胞内的表达。100 μg/mL的黑素生成素可明显诱导NCCmelb4M5细胞的形态从成黑素细胞向黑素细胞改变。结论 从胎盘中提取的黑素生长素可诱导NCCmelb4M5细胞由成黑素细胞向黑素细胞分化，这种诱导作用可能是使白斑复色的途径之一。     

不同取材方法检测尖锐湿疣中人HPV分型研究

<正>人乳头状瘤病毒(HPV)有120多个亚型[1]。目前临床分型上多采用切取或钳取疣体组织进行,患者依从性差。本实验采用基因芯片技术对尖锐湿疣患者疣体组织及疣体表面组织进行HPV分型的灵敏度比较,以期寻找一种患者痛苦小,简便易行且灵敏度较高的取材方法。     

卵巢滤泡激素在干扰素γ介导的黑素细胞凋亡以及趋化因子分泌中的作用研究

【摘要】 目的 研究卵巢滤泡激素（FLCN）在干扰素γ（IFN-γ）介导的黑素细胞凋亡及趋化因子分泌中发挥的作用。方法 从正常人包皮环切组织及白癜风移植患者正常部位的吸疱表皮分离正常原代黑素细胞及白癜风原代黑素细胞。采用Western印迹检测正常原代黑素细胞、白癜风原代黑素细胞及人原代黑素细胞系PIG1细胞中FLCN蛋白的表达。以10 ng/ml IFN-γ刺激48 h的PIG1细胞为诱导组,未经处理的PIG1细胞为对照组,采用qRT-PCR检测两组细胞FLCN及自噬相关微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ、Beclin基因mRNA表达,Western印迹检测FLCN、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ水平及腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的磷酸化水平。进一步对采用10 ng/ml IFN-γ刺激的黑素细胞感染FLCN抑制病毒进行不同的处理,分为阴性对照组、FLCN抑制组、抑制FLCN及添加mTOR抑制剂的自噬增强组和抑制FLCN及添加AMPK抑制剂的自噬抑制组。采用流式细胞仪检测各组PIG1细胞凋亡,酶联免疫吸附实验检测各组细胞上清液中趋化因子CXCL10和CCL20的浓度。多组间计量资料比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD-t检验。结果 正常原代黑素细胞（0.850 ± 0.120）、白癜风原代黑素细胞（1.507 ± 0.170）和PIG1细胞（0.697 ± 0.130）FLCN蛋白的相对表达差异有统计学意义（F = 50.09,P < 0.001）,白癜风原代黑素细胞高于正常原代黑素细胞和PIG1细胞（t = 4.06、5.89,均P < 0.01）。诱导组FLCN mRNA及蛋白相对表达均高于对照组（均P < 0.01）,LC3Ⅱ、Beclin mRNA及蛋白相对表达均低于对照组（均P < 0.01）;诱导组PIG1细胞LC3Ⅱ/Ⅰ水平（0.72 ± 0.02）、AMPK磷酸化水平（0.714 ± 0.023）低于对照组（1.13 ± 0.02、1.176 ± 0.002,t = 7.34、6.67,均P < 0.01）,mTOR磷酸化水平（1.051 ± 0.023）高于对照组（0.451 ± 0.016,t = 3.81,P = 0.009）。对照组、诱导组及各处理组PIG1细胞凋亡率及CXCL10、CCL20浓度差异均有统计学意义（均P < 0.001）,诱导组高于对照组,FLCN抑制组低于阴性对照组,自噬增强组低于FLCN抑制组,自噬抑制组高于FLCN抑制组（均P < 0.05）。结论 白癜风黑素细胞中高表达FLCN,FLCN表达以及下游信号通路受IFN-γ调控,FLCN可通过调节自噬参与IFN-γ介导的黑素细胞凋亡和趋化因子分泌。     

InnVit基因对永生化黑素细胞B10BR迁移的影响

目的分析InnVit基因对永生化黑素细胞B10BR迁移的影响,探讨InnVit基因对黑素细胞生物学功能的调控情况。方法化学合成InnVit基因特异性SiRNA,构建InnVit基因表达载体P3XF-P120,lipofectamineTM2000转染B10BR细胞。半定量RT-PCR鉴定抑制和过表达效率;Transwell观察InnVit基因抑制和过表达后黑素细胞的迁移能力,明胶酶谱分析MMP2和MMP9的活性。结果成功在永生化黑素细胞B10BR中抑制和过表达InnVit基因。细胞处理20h后,抑制和过表达组Transwell滤膜下层黏附细胞数与对照组相比无显著性差异(P0.05),MMP2和MMP9活性较对照组也无显著性差异(P0.05)。结论InnVit基因对黑素细胞的迁移无明显调控作用。     

蛋白激酶B和丝裂原活化蛋白激酶在烟酸保护的HaCaT细胞抵抗中波紫外线损伤中的作用

目的 探讨烟酸保护由UVB诱导的角质形成细胞损伤的胞内信号传导分子机制。 方法 UVB照射和烟酸处理HaCaT细胞,TUNEL法检测细胞凋亡,Western印迹检测蛋白激酶B（Akt）/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相关蛋白Akt、P38、JNK、ERK1/2的磷酸化水平变化。ELISA检测细胞分泌内皮素1（ET-1）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的水平。结果 Western印迹结果表明,UVB照射和烟酸处理HaCaT细胞后,p-Akt、p-P38、p-JNK、p-ERK1/2蛋白在60 min内都显著激活（P < 0.01）。烟酸预处理后的HaCaT细胞再经UVB照射,可以发现p-Akt、p-P38、p-ERK1/2信号分子在2 h内激活更显著（P < 0.01）。３个抑制剂加UVB照射组较3个单独抑制剂组ET-1、bFGF表达降低,差异均有统计学意义,其中LY294002组、SB203580组ET-1、bFGF水平最低;烟酸预保护的抑制剂处理组HaCaT细胞在UVB照射后,LY294002和U0126组没有出现ET-1、bFGF水平回升,SB203580组bFGF水平出现回升。结论　Akt信号分子在烟酸保护的HaCaT细胞抵抗UVB损伤中起一定的调控作用。