精子发生相关基因VASA在正常和少精子症患者精子中的表达及意义

目的探讨生殖细胞高度特异性基因VASA和信号分子BMP-4在精子发生中的作用和相关机制。方法正常和少精子症患者精液通过Percoll梯度分离获得精子和未成熟生精细胞,采用RT-PCR、real-time PCR、Western Blot和免疫荧光方法分析基因转录产物表达。结果少精子症精子VASA基因转录产物是正常精子的1/5；两种样本精子中均检测到荧光信号,正常组信号强,与Western blot结果相一致；两种样本精子RT-PCR均未检测到BMP-4及其Ⅰ型受体Alk-3表达,但在分离的未成熟生精细胞中均表达。人正常睾丸组织可检测到BMP- 4及其Alk-3表达。结论少精子症患者精子发生过程中VASA基因及其产物发生变化；BMP-4及其受体Alk- 3并不直接上调VASA表达；睾丸组织包括精子所存在的部分转录产物,而精子转录产物并不完全等同于睾丸组织；睾丸组织内表达BMP-4和Alk-3的可能主要是精原和精母细胞。     

联苯苄唑乳膏治疗单纯糠疹48例临床疗效观察

我们应用联苯苄唑乳膏(商品名：孚琪乳膏，北京四环制药厂)治疗单纯糠疹48例，取得了较满意的疗效，现报告如下。     

细胞因子短期扩增对造血干/祖细胞黏附和迁移能力的影响

目的：探讨干细胞因子（SCF）+白细胞介素-6（IL-6）短期扩增对CD34+造血干/祖细胞黏附和迁移能力的影响。方法:用密度剃度离心的方法分离脐血CD34+细胞，经SCF和IL-6孵育48 h，用CCK-8方法检测CD34+细胞增殖能力；用流式细胞仪检测处理前后的CD49d（VLA-4）、CD11a（LFA-1）、CD62L（L-selectin）及CD184（CXCR4）的表达。用纤连蛋白（FN）包被96孔板，检测经或未经因子扩增的CD34+细胞的黏附能力。扩增的CD34+细胞悬浮于transwell培养板的上层，下层添加基质细胞衍生因子（SDF-1），流式细胞仪检测迁移细胞数，计算迁移率。结果:经SCF+IL-6处理48h后CD34+细胞扩增近3倍；表达CD49d、CD11a、CD62L及CD184的CD34+细胞的百分数分别由原来的26.34%±5.37%、17.63%±4.57%、46.38%±6.61%和9.58%±1.56%增加到65.67%±8.72%、56.67%±6.34%、84.76%±9.57%和19.32%±3.64%（P<0.01）。扩增后的CD34+细胞对FN的黏附能力及在SDF-1诱导下的迁移作用都显著增强（P<0.01）。结论:SCF+IL-6短期扩增CD34+ 造血干/祖细胞显著增加细胞的黏附能力，增加SDF-1诱导的迁移作用，可能是SCF+IL-6促进归巢的主要机制之一。     

睾丸特异性基因TSF22在小鼠中的表达研究

目的 筛选与精子发生相关的基因。方法 将4、9、18、35、54日龄和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交，筛选出差异表达的基因。利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段及小鼠不同组织中的表达。结果 芯片结果分析筛选出一个差异表达杂交点（GenBank登录号：NM_199034），生物信息学分析发现该基因全长1597bp，含有570bp的完整ORF，编码190个氨基酸、分子量为22．106kDa的蛋白质，我们将其命名为TSF22。RT-PCR分析表明TSF22基因特异性表达于睾丸组织及18日龄小鼠睾丸中。结论 TSF22基因的表达与小鼠精子发生的过程一致，可能在精子发生中起重要作用。     

新基因TSC21的生物信息学分析及其原核载体构建表达

目的用生物信息学分析新基因TSC21并进行蛋白表达及纯化。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix金基因组芯片进行杂交并筛选出差异表达的基因。用生物学信息软件对该基因进行生物学信息分析。运用RT-PCR分析该基因小鼠不同组织及人不同组织中的表达。对人的TSC21基因进行cDNA克隆、蛋白表达及纯化。结果通过不同日龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达基因（GenBank登录号：NM_028825），金长有810bp，含有543bp的完整ORF，编码一个有180个氨基酸、分子量为21．040kDa的蛋白质，我们将其命名为TSC21。亚细胞定位预测显示TSC21基因可能在细胞核中表达。基因功能域预测表明在氨基酸34-40处有CK1和CK2磷酸化位点，在氨基酸100-106处有PKA（cAMP-dependent protein kinase A）磷酸化位点。RT-PCR分析表明TSC21基因特异性表达于小鼠睾丸组织。TSC21蛋白在人的同源基因GenBank登录号为NM-152670，在180个氨基酸区域内有82％的同源性，人TSC21（hTSC21）基因特异性地表达于人睾丸组织中。成功构建PET-28a2c（＋）vector／hTSC21表达载体,并转化B121，以IPTG诱导蛋白表达，对诱导剂浓度、诱导时间进行优化后以镍离子亲和层析纯化目的蛋白。结论TSC21基因在小鼠及人的睾丸组织中特异性表达并具有高度同源性，显示其可能在精于发生中起着重要作用。所得人TSC21蛋白可进行其蛋白结构活性、睾丸组织中的定位分布及在男性不育等疾病检测的研究。     

维A酸霜和喷昔洛韦乳膏治疗扁平疣的疗效观察

为了提高扁平疣的治愈率,笔者采用维A酸霜及喷昔洛韦乳膏联合治疗扁平疣,取得满意效果,现报告如下。临床资料:扁平疣患者66例,男39例,女27例,年龄12～33岁;病程3个月以内15例,3～6个月29例,6～12个月17例,12个月以上5例。将患者分为两组,治疗组36例,对照组30例。治疗组每日2次外用1%喷昔洛韦乳膏,每晚外用1次0.025%维A酸霜;对照组每晚外用1次0.025%维A酸霜。两组用药前均清洗皮损部位皮肤,待皮肤干燥后再涂搽药物,且反复按摩。疗程为8周。治疗前、后2、4、6、8周复诊,观察皮疹情况(数目、高出皮面程度、色素改善程度等),按“0分=无,1分=轻…     

第一、三代维A酸类药物和喷昔洛韦治疗扁平疣临床研究

目的观察第一、三代维A酸类药物和喷昔洛韦治疗扁平疣的疗效。方法外用治疗，第一代维A酸类药物——全反式维A酸（维A酸霜）联合喷昔洛韦治疗36例为A组，维A酸霜治疗30例为B组。第三代维A酸类药物——他扎罗汀联合喷昔洛韦治疗45例为c组，他扎罗汀治疗30例为D组。结果A组（94．44％）与B组（86．67％）、C组（95．56％）总有效率比较，D组（93．33％）与B组、C组总有效率比较，B组与D组治愈率比较，c组与A组治愈率比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）；B组与A组治愈率比较，D组与c组治愈率比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论第一、三代维A酸类药物治疗扁平疣均有效，二者和喷昔洛韦联合能提高扁平疣的治愈率。     

新基因TSBAG的生物信息学分析及其在小鼠睾丸组织中的表达

目的：筛选与精子发生相关的睾丸特异性新基因,并探讨其在精子发生过程中所起的作用。方法：将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,通过杂交信号的比较,筛选出差异表达的基因。用生物信息学软件对该基因进行生物信息学分析。RT-PCR分析该基因在小鼠不同发育阶段睾丸、小鼠不同组织中的表达。结果：通过4日龄、9日龄、18日龄、35日龄、54日龄和6月龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达功能未知的新基因(GenBank登录号：BC049770),全长891 bp,含有702 bp的完整ORF,编码一个233个氨基酸、相对分子量为26．938 kD的蛋白质,我们将其命名为TSBAG(testis-specific BAG-like protein)。亚细胞定位预测显示,TSBAG基因可能在细胞核中表达。EBI功能域预测发现,在蛋白质序列8-62处有一个BAG功能域。RT-PCR分析表明,TSBAG基因特异性表达于小鼠睾丸组织中且具有时序性表达。TSBAG蛋白在人的同源基因GenBank登录号为AY349359,在233个氨基酸区域内有83%的同源性。结论：TSBAG基因在小鼠睾丸组织中特异性表达,且与小鼠精子发生过程一致。     

他扎罗汀联合喷昔洛韦治疗扁平疣疗效观察

目的 为了提高扁平疣的治愈率,观察他扎罗汀与喷昔洛韦联合的疗效.方法 75例扁平疣患者(治疗组45例,他扎罗汀与喷昔洛韦联合;对照组30例,他扎罗汀单用)采用外用治疗.结果 治疗8周后两组治愈率(75.56%,50.00%比较:x2=4.123,P《0.05,差异有显著性.两组总有效率(95.56%,93.33%)比较:x2=0.011,P》0.05,差异无显著性.结论 他扎罗汀是治疗扁平疣疗效较好的药物,联合方案能提高扁平疣的治愈率.     

新基因TSC43在小鼠和人睾丸组织中的表达分析

目的筛选与精子发生相关的睾丸特异性新基因。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetiix全基因组芯片进行杂交，通过杂交信号的比较，筛选出差异表达的基因。用生物学信息软件对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠不同发育阶段睾丸、小鼠不同组织及人不同组织中的表达。结果通过4、9、18、35、54日龄和6月龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达基因（GenBank登录号：XM_156106），全长有1364bp，含有1146bp的完整ORF，编码一个有381个氨基酸、分子量为43．578kDa的蛋白质，我们将其命名为TSCA3。亚细胞定位预测显示TSCA3基因可能在细胞核中表达。EBI功能域分析表示该基因可能参与了cAMP依赖的PK（Protein kinase）的锚定。RT-PCR分析表明TSCA3基因特异性表达于小鼠睾丸组织中且具有时序性表达。TSCA3蛋白在人的同源基因GenBank登录号为NM-152539，在381个氨基酸区域内有49％的同源性，人TSC43（hTSC43）基因特异性地表达于人睾丸组织中。结论TSCA3基因的表达与小鼠精子发生的过程一致，在小鼠及人的睾丸组织中特异性表达，显示其可能在精子发生中起着重要作用。