白癜风患者血清前黑素小体蛋白17自身抗体的检测

目的 获取重组前黑素小体蛋白17(Pmel 17)并用于检测白癜风患者血清中Pmel 17自身抗体的分布.方法 通过RT-PCR从原代黑素细胞中获得人的Pmel 17基因,先后插入克隆载体pMD19-T和表达载体pGEX-4T-1,以构建重组质粒.IPTG诱导Pmel 17蛋白表达后以亲和层析法进行纯化.间接ELISA检测白癜风患者血清中抗Pmel 17自身抗体的阳性率.结果 重组质粒经测序,与预期设计完全一致,同时Pmel 17蛋白成功表达和纯化.ELISA检测进展期白癜风患者血清中抗Pmel 17自身抗体阳性率为22％,稳定期白癜风患者阳性率仅为2％,健康对照组未检测到抗Pmel 17自身抗体,进展期和稳定期阳性率差异具有统计学意义.结论 成功表达了Pmel 17重组蛋白,证明Pmel 17自身抗体与白癜风的疾病严重程度有一定关系.     

一种可以应用于脂滴成像的希夫碱类衍生物

目的 脂质代谢的改变和脂质在细胞中的异常储存已知与多种疾病相关，这些疾病涉及肥胖、高脂血症、炎症、动脉粥样硬化甚至肝细胞癌等癌症。为了研究与脂质代谢异常有关的病理过程，特异性的荧光探针对脂质的累积形成过程研究引起了人们极大的兴趣。目前为止，很少有人报道应用于脂滴成像的希夫碱类染料，探讨该希夫碱衍生物的相关物理、化学和生物学特征。方法 探针分子首先以4-溴-1,8-二萘酸酐和丙胺为原料在无水乙醇溶剂中合成S1，然后将S1与过量的80%水合肼反应得S2，之后进一步与1-比甲醛反应得到脂滴探针分子芘希夫碱类的衍生物BPD。测量BPD核磁共振氢谱（1H-NMR）、光物理特性和pH依赖性。将探针BPD制成纳米颗粒，与Hela细胞共培养，进行细胞毒性实验。结果 探针的光物理特征表明在疏水性溶剂中有很强的溶剂致变色行为，较大的斯托克斯位移（约70 nm）和较高的荧光量子产率（0.34）。探针BPD在从520 nm（非极性溶剂正己烷）到590 nm（极性溶剂水）上表现出较大的荧光发射红移（约70 nm）并且伴随着明显的颜色变化（绿色到橙色）。探针于1,4-二氧六环中在宽的pH 5.0～9.0内都是稳定...     

天疱疮和大疱性类天疱疮患者外周血滤泡辅助性T细胞水平的研究

目的 探讨滤泡辅助性T细胞（Tfh）在天疱疮和大疱性类天疱疮发病中的作用。 方法 天疱疮和大疱性类天疱疮患者各10例,与天疱疮和大疱性类天疱疮患者年龄、性别相匹配的正常人对照各10例。采用流式细胞仪检测外周血单一核细胞（PBMC）中Tfh水平,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测其血清中白介素21（IL-21）水平,同时检测大疱性类天疱疮患者血清中抗BP180-NC16A抗体滴度,并进行抗体滴度与IL-21、Tfh水平的相关性分析。结果 天疱疮患者组血清中IL-21水平（95.33 ± 33.69 ng/L）显著高于其正常人对照组（54.50 ± 18.13 ng/L）（t = 3.38,P ＜ 0.01）,Tfh水平（12.08% ± 4.74%）亦显著高于其正常人对照组（6.15% ± 1.62%）（t = 3.74,P ＜ 0.01）。大疱性类天疱疮患者组血清中IL-21水平（106.70 ± 44.91 ng/L）显著高于其正常人对照组（55.37 ± 15.89 ng/L）（t = 3.41,P ＜ 0.01）,Tfh水平（11.85% ± 3.14%）亦显著高于其正常人对照组（6.03% ± 1.74%）（t = 5.13,P ＜ 0.01）。大疱性类天疱疮组抗BP180-NC16A抗体滴度与IL-21水平呈正相关（r = 0.77,P ＜ 0.01）,与Tfh水平亦呈正相关（r = 0.67,P ＜ 0.05）。结论 天疱疮和大疱性类天疱疮患者Tfh及其分泌的细胞因子IL-21水平均明显升高,可能在其发病过程中起一定的作用。     

人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180单链抗体的体外功能鉴定

目的 探讨人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180单链抗体的生物学功能。方法 亲和层析方法纯化大疱性类天疱疮（BP）患者血清自身抗体,通过竞争性ELISA、竞争性免疫荧光和补体活化的竞争性抑制实验来观察所制备的抗BP180单链抗体对BP-IgG自身抗体结合人BP180抗原的竞争性抑制作用。结果 竞争性ELISA结果表明,在0 ~ 60 μg/ml范围内单链抗体对BP-IgG自身抗体的竞争性抑制作用呈剂量依赖关系,最大抑制率可达69.50%（与对照组相比,均有统计学意义,P < 0.01）。竞争性免疫荧光实验中,单链抗体浓度增加至40 μg/ml时,BP-IgG在基底膜带的沉积及其介导的补体C3活化作用均被抑制,呈阴性。结论 人源性抗BP180单链抗体在体外对BP致病性自身抗体与抗原结合及后续的补体活化具有一定的抑制作用。     

枸杞多糖通过上调脂联素的表达缓解小鼠动脉粥样硬化

目的 探究枸杞多糖（LBP）对动脉粥样硬化（AS）小鼠体内脂联素（APN）表达的调控及其调脂抗炎作用机制。方法 普通饲料喂养的C57BL/6J小鼠为对照组,采用高胆固醇饲料喂养ApoE^-/-小鼠成功建立AS模型,随机分为模型组和3个LBP组（高、中、低剂量分别为100、50、25 mg/kg）。继续喂养4周后,取主动脉血和组织,分别检测血脂、炎症因子、内皮素-1（ET-1）、APN及其受体（AdipoR1）、AMPK通路相关指标的表达;3T3-L1前脂肪细胞经诱导分化后分为对照组、LBP组和LBP+BML-275组,检测各组中三酰甘油（TG）、炎症因子、APN、AdipoR1、AMPK通路相关指标的表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠出现典型的AS病理变化,TG、总胆固醇（TC）、一氧化氮（NO）、ET-1、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平明显升高,高密度脂蛋白（HDL-C）、APN和AdipoR1、PPARα、AMPKα、p-AMPKα蛋白表达和酰基辅酶A氧化酶（ACO）mRNA表达均明显降低;与模型组比较,LBP组中AS病理变化得到明显改善,TG、TC、NO、ET-1、IL-6和TNF-α的水平降低,HDL-C、APN和AdipoR1、PPAR-α、AMPKα、p-AMPKα蛋白及ACO mRNA表达升高,并且这些变化呈剂量相关性。3T3-L1脂肪细胞中,与对照组比较,LBP组的APN、AdipoR1、PPARα、AMPKα、p-AMPKα和ACO的表达均明显升高,TG、IL-6和TNF-α的水平明显降低;与LBP组比较,LBP+BML-275组TG、IL-6和TNF-α水平明显升高。结论 LBP通过上调APN和AdipoR1表达,激活APN/AMPK通路,发挥调脂抗炎作用,从而减缓小鼠动脉粥样硬化。     

白介素22调控角质形成细胞表达角蛋白17的研究

目的:研究白介素(IL)-22对培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)表达角蛋白(K)17的影响.方法:对体外培养的HaCaT细胞分别给予不同浓度的IL-22(0 ～ 100 μg/L)作用24 h,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测K17mRNA 表达水平,以酶联免疫吸附测定技术(ELISA 法)、蛋白质免疫印记法(Western blot)及免疫荧光染色法检测K17 蛋白表达水平的变化.结果:HaCaT细胞经12.5、25.0、50.0、100.0 μg/L 的IL-22 作用后, 均出现不同程度的K17 表达.与空白对照组的HaCaT细胞相比,12.5 μg/L组的mRNA及蛋白表达无明显差异,而25.0、50.0、100.0 μg/L组的mRNA 及蛋白表达则明显上升(P ＜0.05),并且随着IL-22浓度增高,K17mRNA及蛋白表达量增多.免疫荧光染色图片显示,随着IL-22 浓度的增高,HaCaT细胞胞质中K17蛋白荧光染色增强.结论:IL-22可以剂量依赖方式诱导HaCaT细胞表达K17.     

2018年-2021年陕西某医院儿童血流感染病原菌分布及耐药分析

目的 分析陕西某妇儿医院儿童血流感染病原菌分布及其对常见抗生素的耐药分析。方法 回顾性分析了2018年—2021年西北妇女儿童医院儿童血培养分离的病原菌及其药物敏感性。结果 共分离病原菌1 102株，革兰阳性菌占比52.36%,革兰阴性菌占比46.91%。前5位的病原菌依次为凝固酶阴性的葡萄球菌(CNS,41.37%)、木糖氧化无色杆菌(15.43%)、嗜麦芽窄食单胞菌(8.98%)、大肠埃希菌(7.17%)和海水盐单胞菌(6.44%)。甲氧西林耐药的凝固酶阴性的葡萄球菌(MRCNS)占CNS的84.4%。木糖氧化无色杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、海水盐单胞菌对药敏试验的抗生素敏感度较高。耐碳青霉烯酶肠杆菌(CRE)肺炎克雷伯检出率(4.4%)高于大肠埃希菌(1.3%)。结论 西北妇女儿童医院儿童血流感染主要病原菌为CNS和非发酵菌。应合理使用抗菌药物，减少多重耐药菌的产生。注意操作的规范性，降低定植菌和条件致病菌在院内的传播。