单增李斯特菌质粒研究进展

单增李斯特菌是一种可引起李斯特菌病的重要食源性病原体,质粒在单增李斯特菌中分布广泛,这些质粒对宿主的环境适应能力、毒力以及耐药有一定的促进作用.基因组测序技术的发展为质粒的发现及功能研究提供了很好的基础.本文综述了单增李斯特菌质粒的分类、分布及其生物学功能研究进展.     

四川省一起伴中毒性休克综合征的人感染猪链球菌2型暴发

目的 调查2005年7月中旬四川省资阳市一家医院报告5例以败血症休克为主要临床表现的聚集性病例的病因。方法 建立了病例主动发现、报告的加强监测系统，根据病例的流行病学暴露史和临床表现进行临床诊断；采集患者标本进行细菌分离培养和生化反应鉴定，应用PCR方法对猪链球菌2型的种属和毒力基因进行检测和序列测定；与当地往年报告的流行性脑脊髓膜炎发病数进行比较。结果 2005年6月10日至8月21日，四川省共报告了68例实验室确诊人感染猪链球菌病例，发病前都有屠宰、洗切、加工等病（死）猪的直接暴露史。其中26例（38％）表现为中毒性休克综合征，15例（58％）死亡。其他病例临床表现为轻型败血症或脑膜炎。分离菌株应用PCR方法检测猪链球菌2型的种属和毒力基因（tuf、16S rRNA、cps2J、mrp、sly、ef）均为阳性。同期还报告了136例有相似暴露史，但缺乏实验室确诊依据的临床诊断病例。结论 证实该起发生在四川省部分农村地区直接暴露于病（死）猪后的疾病为猪链球菌2型感染暴发。推测这种罕见的、表现为高病死率的中毒性休克综合征可能是由于感染某种高致病性菌株循环所致。     

16SrRNA基因克隆文库用于菌群分析的效能研究和评价

目的建立16SrRNA基因克隆文库进行菌群相对定量的方法，评价其对细菌的检测效率以及对混合菌群巾低含量细菌的分析能力。方法取脆弱类杆菌等9种细菌以相同及级差比例制备细菌悬液，分别用或不用变溶菌素处理后，用试剂盒提取核酸，16SrRNA基因通用引物进行PCR扩增、纯化、连接、克隆和测序，建立16SrRNA基因克隆文库，将序列与数据库进行比对分析。结果相同比例制备的菌悬液，加或不加变溶菌素提取的核酸，掺入的9种细菌均可检出。级差比例制备的菌悬液，加变溶菌素提取核酸，掺入的9种细菌均可检出；不加变溶菌素提取核酸，数量少难裂解的革兰阳性菌双歧杆菌未能检出。混合菌悬液中各种细菌的比例与文库反映的各种细菌的比例有数量对应关系，但不是线性对应关系。结论16SrRNA基因序列分析是一种较好的细菌菌群分析方法，它可以同时检出多种细菌，并能对混合细菌标本进行菌群相对定量，反映菌群中各种细菌的丰度，但不能准确定量菌群中各种细菌的数量。     

118株单核细胞增生李斯特菌的毒力基因检测

目的 了解中国单核细胞增生李斯特菌(Lm)的毒力基因分布情况.方法 对Lm的6个毒力基因(hly、prfA、plcB、inlA、actA、iap)分别设计聚合酶链反应(PCR)引物,建立PCR检测方法.对hly、plcB、iap 3个基因的PCR方法进行了特异性试验.结果 对国内多个地区多种来源的118株Lm进行了PCR检测,结果表明除2株菌不含prfA基因外,其他菌株均包含6个毒力基因.PCR引物特异性试验结果表明hly、plcB、iap3个基因的PCR引物特异性良好,可用于Lm的鉴定.结论 Lm普遍具有毒力基因,具有潜在的爆发风险,应加强对其监测.     

一些细菌的亚碲酸钾抗性

在临床微生物实验室,在培养基中添加亚碲酸钾,选择性地分离病原菌已有80多年的历史,如白喉杆菌、霍乱弧菌、葡萄球菌、大肠杆菌O157等。碲是自然环境中含量较低的元素,并非细菌生长的必     

李斯特菌感染病例的临床及病原学分析

目的分析单核细胞增生李斯特菌(LM)感染患者临床及其LM病原学特征。方法收集北京协和医院LM感染患者信息及其LM菌株,对菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型、血清学、毒力基因检测。结果 18例李斯特菌感染患者中,妊娠相关病例4例,其中2例死胎。14例非妊娠相关病例中,男、女各7例,年龄19～77岁;均患有基础疾病;3例预后不良。18株LM临床分离株的PFGE型别均为数据库中已有带型; 6例入院48 h后起病的患者LM菌株中,存在PFGE同型菌株,需进一步全基因测序对其进行同源性分析。结论李斯特菌感染多累及老人、孕妇、新生儿和免疫功能低下者,临床医师需引起重视。当经验用药未果时,需考虑是否为LM感染。李斯特菌对青霉素类敏感,该类药物可作为治疗李斯特菌经验用药的首选。     

猪链球菌脉冲场凝胶电泳分析方法的建立

目的 建立一种可共享的猪链球菌脉冲场凝胶电泳分析(PFGE)方法.方法 利用PulseNet技术优化猪链球菌PFGE分子分型方法,提出新的分析方案,包括胶块的制备、内切酶的选择、电泳条件等.利用DNAStar的Mapdraw软件对猪链球菌基因组序列进行分析,发现在242种内切酶中,Swa Ⅰ、Sma Ⅰ、Apa Ⅰ种酶比较适合.结果 通过对34个血清型共100株菌的分析,发现使用Swa Ⅰ可获得59种带型,使用Sma Ⅰ可获得53种带型,使用Apa Ⅰ可获得43种带型.其中以Swa Ⅰ的分辨率最好.结论 提出猪链球菌的Swa Ⅰ PFGE分析方法,并对条件进行优化,较原方法所需时间短、图像清晰,更具有可重复性,基本具备推广的条件.     

马鞍山市食品中单核细胞增生李斯特菌污染调查及分子生物学特征

单核细胞增生李斯特菌(listerial monocytogenes,LM)在自然界分布广泛,主要以家畜、家禽为宿主,可引起人和动物脑膜炎、败血症、流产等症状,是人畜共患病的致病菌,病死率达20%～30%[1].近30年来,国外多次报道由LM引发的食物中毒事件.目前,国内虽没有LM引起食物中毒暴发的相关报道,但食品监测显示食品中LM污染情况较为严峻[2-3],同时我周也曾报道多起由该菌引起临床感染的病例报告[4-5].     

建立检测产气肠杆菌的TaqMan荧光定量PCR和普通PCR方法

目的 建立敏感、特异的普通聚合酶链反应(PCR)方法和TaqMan 荧光定量PCR方法对产气肠杆菌进行快速检测。方法 以产气肠杆菌组氨酸脱氢酶基因(hdc)为靶基因设计引物以及TaqMan FAM探针,建立对产气肠杆菌进行检测的普通PCR方法和TaqMan 荧光定量PCR方法,并评价该方法的特异性、灵敏性和稳定性。结果 普通PCR和TaqMan 荧光定量PCR方法均能对产气肠杆菌进行特异检测;普通PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为 100 copies/l和1.0105 cfu/g,TaqMan 荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本的检测下限分别为33 copies/l和1.0104 cfu/g;TaqMan 荧光定量PCR方法对质粒标准品和粪便模拟标本检测的扩增曲线良好;在稳定性评价试验中,普通PCR方法的重复性良好,TaqMan 荧光定量PCR方法对质粒标准品检测Ct值的组内差异为0.15%~0.98%,组间差异为0.55%~1.63%。结论 本研究建立的检测产气肠杆菌的普通PCR方法和TaqMan 荧光PCR方法特异性好、灵敏度高,能够用于产气肠杆菌的快速检测。