先天性非综合征性耳聋患者 100 例常见耳聋基因分析

目的应用耳聋基因芯片对先天性非综合征性耳聋（NSHI）患者进行基因筛查。方法采集宁波市儿童听力筛查诊断中心确诊的100例先天性NSHI患者的外周血,提取DNA。应用基质辅助激光解吸／离子化飞行时间质谱多态性分型技术检测缝隙连接蛋白[32（GJB2）、GJB3、SLC26A4、线粒体DNA（mtDNA）、12SrRNA热点突变位点。结果共检出GJB2基因突变22例（22％）、SLC26A4基因突变12例（12％）;未检出GJB3基因和线粒体12SrRNA突变。结论本组耳聋人群中与筛查位点有关的耳聋比例高达34％,该人群遗传性聋GJB2突变的发生率最高,SLC26A4突变的发生率次之。     

橙皮苷减轻鱼藤酮诱导的神经细胞损伤

<正>帕金森病是一种与年龄相关的、进行性的神经退行性疾病,患病者年龄往往超过50岁。近年来,帕金森病的实验研究已经取得较多进展,特别是通过使用细胞模型对该疾病进行研究。在体外建立稳定的多巴胺能神经元细胞模型可用于研究帕金森病的发病机制,并有助于为临床提供新的治疗策略。目前常用的可用于帕金森病研究的细胞模型主要包括嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma,PHEO)细胞,人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞和原代培养的脑神经元[1-2]。当用帕金森症诱导剂,如1-甲基-4-苯基吡啶鎓(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)、6-羟基多巴胺(6-     

bcl-3基因通过cyclin D1及Bax蛋白影响人结肠癌RKO细胞的凋亡

目的:研究bcl-3基因对人结肠癌RKO细胞迁移及凋亡的影响及机制。方法:采用人bcl-3基因的RNA干扰慢病毒载体沉默人结肠癌RKO细胞bcl-3基因的表达后,划痕实验观察bcl-3基因沉默前后RKO细胞迁移能力的变化,Annexin V/PI双染色法检测bcl-3基因沉默前后RKO细胞凋亡率的变化,Western blot法检测bcl-3基因沉默前后细胞周期蛋白cyclin D1及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的变化。结果:划痕实验显示,划痕后36 h,bcl-3基因沉默前后RKO细胞划痕愈合率分别为84.00%及40.00%,差异具有统计学意义(P0.05)。Annexin V/PI双染色法流式细胞术分析显示,bcl-3基因沉默前后的RKO细胞均经5μmol/L顺铂处理24 h后,沉默前后的RKO细胞凋亡率分别为12.89%及59.67%,差异具有统计学意义(P0.05)。Western blot法检测显示bcl-3基因沉默后cyclin D1蛋白表达显著下降(P0.05),Bax蛋白表达显著上升(P0.05),但Bcl-2表达无明显变化(P0.05)。结论:沉默bcl-3基因后,RKO细胞迁移能力下降,凋亡率增加,并伴细胞周期蛋白cyclin D1及凋亡相关蛋白Bax表达的变化。bcl-3基因可能通过改变cyclin D1及Bax蛋白的表达而影响RKO细胞的凋亡。     

SLCO1B1 521T>C基因多态性对瑞舒伐他汀钙降脂疗效的影响

目的观察SLCO1B1 521TC基因多态性对瑞舒伐他汀钙降脂疗效的影响。方法纳入2015年1月-2015年12月期间我院神经内科高脂血症患者,均口服瑞舒伐他汀钙片10 mg,一次/日,睡前服用。应用ARMS-PCR方法探索中国人群中SLCO1B1 521TC的基因型分布频率,并分别检测用药前与用药后1 w、6 w的血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),并计算其变化率。结果瑞舒伐他汀治疗1 w后,各组TC、TG、LDL-C、HDL-C变化率差异均无统计学意义(P0.05)。用药6 w后,TC组和CC组较TT组能显著降低TC、LDL-C及升高HDL-C水平,有统计学意义(P0.01),但TC组和CC组间差异无统计学意义(P0.05)。各组间TG变化率差异无统计学意义(P0.05)。结论 SLCO1B1 521TC基因变异可增强瑞舒伐他汀钙降脂疗效。     

基质金属蛋白酶-1基因启动子区（-1607）基因多态性与肾移植后环孢素诱导牙龈增生的相关性

目的研究MMP1基因单核苷酸多态（-1607）1G/2G与环孢素诱导牙龈增生（CsA-GO）发生风险的关系。方法以聚合酶链反应和限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析方法,分别检测42例环孢素诱导牙龈增生病人和118位正常对照者MMP1（-1607）1G/2G多态的基因型;以Logistic回归模型计算不同基因型与环孢素诱导牙龈增生风险的关系。结果环孢素诱导牙龈增生病例组的MMP1（-1607）3种基因型频率分布与对照组无显著差异（P=0.37）。携带MMP1（-1607）2G基因型者发生环孢素诱导牙龈增生的风险比携带1G基因型者高1.38倍（95%CI=0.81-2.36,P=0.24）,而1G基因型与环孢素诱导牙龈增生风险无关。结论 MMP1基因启动子区（-1607）1G/2G单核苷酸多态性可能并非环孢素诱导牙龈增生的遗传易感因素,携带2G基因型的患者发生CsA-GO的风险有增高趋势。     

沉默泡膜蛋白1对SW480细胞增殖与侵袭影响的研究

目的 泡膜蛋白1(vacuole membrane protein-1,VMP1)是近年来新发现的一个重要功能的抑癌基因.为明确VMP1在结直肠癌中的功能和意义,本研究通过慢病毒载体沉默结直肠癌细胞系SW480中VMP1基因的表达,探讨VMP1基因沉默后对结直肠癌细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用.方法 应用RT-PCR及蛋白质印迹法检测5种结直肠癌细胞系中VMP1的表达状况;设计人VMP1基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染VMP1高表达的结直肠癌细胞系,运用蛋白质印迹法鉴定其对VMP1基因的沉默效果;VMP1基因沉默后,通过MTT法和软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞技术检测细胞凋亡;运用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力.结果 VMP1在5种细胞系中存在差异性表达.具有低转移潜能的HT-29和SW480细胞与具有高转移潜能的LoVo、RKO和SW620细胞相比,有更高的VMP1表达水平,其中mRNA表达差异有统计学意义,t=3.88,P=0.005;而蛋白表达差异有统计学意义,t=14.29,P＜0.001.选取低转移细胞株中VMP1表达相对较高的SW480细胞作为研究对象,构建VMP1 shRNA慢病毒载体沉默SW480细胞中VMP1的表达.蛋白质印迹结果提示,VMP1稳定沉默的SW480细胞构建成功.在稳定沉默VMP1基因后,MTT法显示SW480细胞的增殖速度在24和48 h显著升高,F值分别为79.77和12.35,P值分别为＜0.001和0.025.软琼脂克隆形成实验结果显示,SW480细胞的集落数目显著增多,F=75.23,P＜0.001.二者均表明SW480细胞增殖能力增强.流式细胞技术检测显示,VMP1基因沉默后可抑制SW480细胞凋亡,F=84.44,P＜0.001.Transwell迁移实验结果显示,VMP1沉默后SW480迁移能力增强,F=155.90,P＜0.001.结论 VMP1基因可能与结直肠癌的细胞增殖、凋亡与转移有关,进而参与了结直肠癌的发生、发展.     

p53^（-/-）,k-ras基因型小鼠肺癌细胞株的建立与鉴定

背景与目的:在肺癌的基础研究中,有特定基因变化的肺癌细胞株非常重要.k-ras激活和p53突变在肺癌的发生发展中有重要作用.本研究通过诱导小鼠肺癌生成,对肿瘤进行培养,建立p53-/-,k-ras基因型的小鼠肺癌细胞株.方法:用病毒吸入法,对p53loxp/loxp,Loxp-Stop-Loxp k-rasG12D转基因小鼠肺部细胞进行条件性基因敲除,诱导小鼠产生肺癌.通过HE染色和PCR法对小鼠肺癌组织进行组织病理学和基因型鉴定,对肿瘤细胞原代培养建立p53-/-,k-ras基因型的小鼠肺癌细胞株,并通过软琼脂克隆形成实验、生长曲线分析和核型分析对细胞株进行验证.结果:成功建立p53-/-,k-ras基因型的小鼠肺腺癌细胞株.p53-/-,k-ras基因型的小鼠肺癌细胞株体外生长速度与人肺腺癌细胞A549生长速度接近,能够在软琼脂中形成肉眼可见的克隆.结论:成功建立p53-/-,k-ras基因型的小鼠肺癌细胞株,为下一步的实验研究打下了基础.     

索拉非尼联合塞来昔布在体外对肝癌HepG2细胞的影响

目的研究索拉非尼联合塞来昔布在体外对肝癌Hep G2细胞增殖的影响。方法以不同浓度索拉非尼和塞来昔布分别组成单药组和联合用药组作用于Hep G2细胞,MTT法检测增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期。Western blot检测Cyclin D1、Cyclin D3、CDK4蛋白的表达。结果索拉非尼、塞来昔布单药与联用均能抑制Hep G2细胞增殖,呈时间-剂量依赖效应,两药联用有协同效应(P<0.05)。药物组与空白组相比,G0/G1期细胞比例增高,联合用药组最高。联合用药组与单药及空白对照组相比,Hep G2细胞中Cyclin D1、Cyclin D3蛋白的表达显著降低。结论索拉非尼联合塞来昔布可能通过下调Cyclin D1、Cyclin D3表达,增强G0/G1期阻滞,发挥协同抑制Hep G2细胞增殖的作用。     

原因不明的复发性流产患者外周血与蜕膜中Foxp3的表达

目的检测调节性T细胞中Foxp3在原因不明的复发性流产（URSA）患者的外周血与蜕膜中的表达,探讨Foxp3在免疫耐受中的作用及与复发性流产的关系。方法选择2012年3月—2013年3月就诊的原因不明复发性流产患者28例为URSA组,正常早孕要求终止妊娠的妇女30人为正常组。收集两组患者外周血液及蜕膜组织标本。采用半定量、实时荧光定量PCR分析外周血及蜕膜中Foxp3 mRNA相对含量。结果 Foxp3转录水平在复发性流产患者的外周血及蜕膜组织中明显低于正常对照组（P〈0.01）。结论 Foxp3在维持早期妊娠中可能有一定作用,其表达下调可能与复发性流产的发生有关。     

乳腺癌干细胞的树突状细胞疫苗对细胞毒性T淋巴细胞增殖的影响

目的探讨加载人类乳腺癌干细胞（BSC）的树突状细胞（DC）疫苗对细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活化效果的影响。方法从11例乳腺癌患者中分离并评价BSC,探讨BSC作为DC疫苗抗原的适用性,并在体外评估了杀伤BSC的能力。结果BSC表达高水平的干细胞相关分子CD44+、CD24-和CD133+,乳腺癌贴壁细胞表达CD44+、CD24＋和低CD133+。在体内,富集的乳腺癌细胞球表现出比贴壁细胞更强的致瘤能力。使用BSC裂解物的DC疫苗接种引发针对BSC的特异性T细胞应答。DC疫苗接种刺激Th1应答并诱导IFN-γ产生,与活化的CTL数量呈正相关。结论乳腺癌细胞球细胞具有干细胞特性和强致瘤功能,使用BSC抗原的DC接种可引发有效的抗原特异性Th1应答,进一步激活抗原特异性CTL并诱导IFN-γ产生。