蛋白酪氨酸磷酸酶:治疗前景

蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)大家族,是信号转导途径中的重要调节因子.最近的小鼠基因敲除实验发现,PTP1B极有希望成为开发抗糖尿病/肥胖症药物的作用靶点.PTP也参与体内包括癌症在内的多种疾病的病理过程.特异抑制单个PTP同工酶活性的小分子物质得以鉴定,并取得重要进展.本文概述PTP的基本结构、作用特征及其在信号转导途径中的地位,并对其小分子抑制剂的治疗用途作一展望.     

亚油酸对纤溶酶原激活物抑制剂-1表达的影响及其机制

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体α（PPARα）的特异性激活物亚油酸对HepG2细胞1型纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）mRNA表达及其活性的影响和在该基因转录调控中的作用机制.方法用不同浓度亚油酸为诱导因素刺激HepG2细胞,采用半定量RT-PCR法检测PAI-1mRNA水平,发色底物法检测PAI-1的活性变化.构建四个含PAI-1启动子序列从-804～＋17间不同长度片段驱动的荧光素酶报告基因质粒,体外瞬时转染HepG2细胞,检测荧光素酶的活性.结果与对照组相比,亚油酸组能使HepG2细胞PAI-1mRNA表达及蛋白活性显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,且呈一定剂量依赖性;亚油酸诱导可使PAI-1转录活性显著升高（P＜0.01）;与转染质粒PAI-pGL3-A（-804/＋17）相比较,当转染质粒含有PAI-pGL3-B（-636/＋17）、PAI-pGL3-C（-449/＋17）时,荧光素酶活性显著降低（P＜0.01）;共转染PPARα表达质粒（PPARα-pSG5）的细胞在亚油酸诱导下PAI-1转录活性显著升高（P＜0.01）.结论亚油酸可以增加HepG2细胞PAI-1mRNA表达及其蛋白活性,调节PAI-1的基因转录,PPARα参与亚油酸对PAI-1基因的表达调控;在PAI-1启动子-804～-636、-449～-276区域内存在亚油酸作用的调控PAI-1基因表达的序列.     

非诺贝特与过氧化体增殖物激活型受体α对人肝瘤细胞1型纤溶酶原激活物抑制剂表达的影响

目的探讨非诺贝特对人肝瘤细胞株(HepG2)细胞1型纤维酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达的影响及机制。方法用不同浓度非诺贝特刺激HepG2细胞,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PAI-1mRNA水平,发色底物法检测PAI-1的活性变化。构建4个荧光素酶报告基因质粒,分别由PAI-1启动子序列从-804至+17间不同长度片段驱动,体外转染HepG2细胞,检测荧光素酶的活性。结果非诺贝特能使HepG2细胞PAI-1mRNA表达及蛋白活性显著降低,且呈一定剂量依赖性;还可使PAI-1转录活性显著降低;当转染质粒含有PAI-1启动子序列-636~+17、-449~+17-、276~+17 bp 3个片段时,荧光素酶活性显著增高;共转染过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)表达质粒(PPAR-αpSG5)的细胞在非诺贝特诱导下PAI-1转录活性显著降低。结论非诺贝特可以抑制HepG2细胞PAI-1mRNA表达及其活性,调节PAI-1的基因转录,PPARα参与非诺贝特对PAI-1基因的表达调控。     

美托洛尔对老年男性非ST段抬高型心肌梗死病人淋巴细胞GRK2表达水平的影响

目的观察美托洛尔对老年男性心肌梗死病人外周血淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)表达的影响。方法选取65岁以上急性非ST段抬高型心肌梗死病人80例,分为对照组和美托洛尔组。对照组行常规治疗,美托洛尔组在常规治疗基础上应用美托洛尔,随访2年。分别于发病24 h内和治疗3、6、12、24个月时行心脏超声检查,并分别抽取外周血2 m L,分离淋巴细胞,提取RNA及蛋白,检测GRK2 mRNA和蛋白的表达水平。结果治疗前2组心脏超声各项指标、外周血淋巴细胞GRK2的表达无明显差异;治疗后,美托洛尔组GRK2表达逐渐降低,治疗12个月后GRK2表达水平明显低于对照组,而心脏射血分数则显著高于对照组。结论老年急性非ST段抬高型心肌梗死病人经美托洛尔治疗后,外周血淋巴细胞GRK2表达水平明显降低,心脏射血分数等指标无明显变化。随着疗程的增加,治疗效果越显著。     

促红细胞生成素及其基因治疗的研究进展

在简要回顾EPO研究进展的基础上,较系统地介绍了EPO在贫血基因治疗研究中的进展。最后,对该研究领域存在的问题及前景进行了总结和展望。     

G蛋白偶联受体激酶2与血清可溶性ST2对老年心肌梗死后心力衰竭预警的意义

目的分析75岁以上老年急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)患者外周血淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)与血清可溶性ST2(sST2)水平在心力衰竭(心衰)预警中的意义。方法选取75岁以上老年男性急性NSTEMI患者80例作为急性心肌梗死(AMI)组,平均年龄(85.4±3.2)岁;选取同期体检的健康老年男性30例作为对照组,平均年龄(84.8±2.9)岁。测定2组患者GRK2、血清sST2水平,并行超声心动图检测LVEF、左心室收缩末期容积(LVESV)、左心室舒张末期容积(LVEDV)。AMI组患者在发病后3、6、12、24个月时进行随访。结果AMI组患者GRK2的表达、血清sST2水平均高于对照组[3.60 vs 0.72,(30.63±1.36)μg/L vs (26.87±0.55)μg/L,P0.01],LVEF低于对照组[(50.87±4.58)%vs (55.15±5.87)%,P0.01]。AMI组GRK2在发病后3、6、12、24个月随访时逐渐增高(P0.05,P0.01),sST2水平在发病后6、12、24个月随访时显著增高(P0.05),LVEF在发病后6、12、24个月随访时显著降低(P0.01)。结论 75岁以上老年男性急性NSTEMI患者GRK2对AMI后心衰的预警作用优于sST2。     

吡格列酮对大鼠尿酸钠晶体诱导的炎症组织细胞中S100A8和S100A9的mRNA表达的影响

目的为进一步了解吡格列酮的抗炎机制,观察其对炎症组织细胞中免疫及炎性调节因子S100A8和S100A9的mRNA表达的影响,探讨其痛风防治作用机制。方法大鼠单侧踝关节腔一次性注射尿酸钠(MSU)晶体建立急性痛风性关节炎模型;腹腔一次性注射MSU诱导急性腹膜炎模型。MSU注射诱发模型前3d,大鼠灌胃口服吡格列酮(20mg.kg-1.d-1),连续给药5d;模型诱发当天,在吡格列酮给药后2h注射MSU。以RT-PCR检测关节炎诱发后48h滑膜组织中和腹膜炎诱发后4,8,24,48及72h腹腔巨噬细胞S100A8和S100A9的mRNA的表达以及吡格列酮给药的影响。结果S100A8和S100A9的mRNA在正常大鼠滑膜中仅有微量表达(0.01±0.01,0.20±0.07),但在诱发关节炎后48h,滑膜组织中呈现高表达(1.21±0.20,1.44±0.20),吡格列酮则显著抑制其高表达(0.26±0.14,0.25±0.16)。S100A8和S100A9的mRNA在正常大鼠腹腔巨噬细胞未见表达,但在诱发腹膜炎后4,8,24,48和72h大鼠腹腔巨噬细胞中均有较高表达。吡格列酮仅在48和72h显示出明显的抑制作用(S100A8mRNA:1.17±0.38vs0.03±0.02和0.70±0.20vs0.02±0.01;S100A9mRNA:0.90±0.31vs0.10±0.01和0.77±0.10vs0.02±0.01)。结论吡格列酮具有抑制S100A8和S100A9的mRNA表达的作用,很可能与其对痛风炎症的防治作用密切相关。     

吡格列酮对大鼠痛风性关节炎滑膜细胞因子表达的作用

目的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome　proliferator-activated　receptor　gamma，PPARγ）激动剂吡格列酮。对大鼠急性痛风性关节炎滑膜表达细胞因子的调控作用，探讨其作用机制。方法：大鼠单侧踝关节注射人工尿酸钠晶体制作急性痛风性关节炎模型，于注射48h后取关节滑膜，以RT—PCR法检测吡格列酮（20mg·kg^-１·d^-1）口服给药对滑膜表达肿瘤坏死因子α（TNF—α）、白介素1β（IL-1β）、白介素1受体拮抗剂（IL—IRα）、细胞因子诱导中性粒细胞化学趋化因子（CINC，相当于人的白介素8）、干扰素γ（IFN-γ）和白介素4（IL-4）的作用。结果：吡格列酮用药组滑膜表达TNF—α、CINC和IFN-γ显著低于对照组，抑制率分别为81．7％、90．9％、65.3％；IL-4表达高于对照组，增加率为340．0％；IFN-1／IL-4比值显著低于对照组，抑制率为92．6％。2组IL-1β和IL-IRa的表达差别无统计学意义。结论：吡格列酮对急性痛风性关节炎的抗炎作用与抑制TNF—α和CINC的表达。并促使Th1／Th2平衡向Th2为优势转化有关。     

PPAR受体双重/泛激动剂存在的问题及前景

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)是一类配体依赖的核转录因子,属于核受体超家族。目前单纯的PPARγ激动剂类药物并不能有效预防糖尿病心血管并发症,而PPARα/γ双重激动剂能在增加胰岛素敏感性的同时还能预防心血管并发症。这类化合物正在临床试验并计划用于治疗伴有心血管并发症的2型糖尿病。研究发现,PPARα/γ双重激动剂具有意想不到的不良反应,这给临床应用带来了一系列的问题。现就PPAR受体双重/泛激动剂研究和发展中存在的问题及前景进行分析。     

四物汤对辐射小鼠造血功能影响的初步探讨

目的：观察四物汤对3．5Gyγ射线照射小鼠造血系统的影响，探讨四物汤作用机制。方法：通过外周血象观察、造血祖细胞体外培养、MTT法检测四物汤及其拆方诱导NIH3T3细胞上清对G－CSF依赖细胞株NFS－60增殖等指标的影响研究四物汤的作用机制。结果：四物汤显著升高3．5Gyγ射线照射小鼠外周血白细胞、血小板，促进其造血祖细胞CFU－GM、CFU－meg、CFU－mix集落的增殖；四物汤诱导的NIH3T3细胞上清能显著促进G－CSF依赖细胞株NFS－60细胞的增殖。结论：四物汤对辐射小鼠造血细胞的作用机制与刺激NIH3T3细胞产生类G－CSF作用或与G－CSF产生协同作用而促进外周血白细胞、血小板恢复有关。