视蛋白3调控人真皮成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白生成

目的 研究视蛋白3在正常人真皮成纤维细胞中对Ⅰ型胶原蛋白生成的影响及其可能的机制。方法 取小儿包皮真皮成纤维细胞分离、培养、传代，至3～5代，用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别检测视蛋白1～5的表达，细胞免疫荧光检测视蛋白3及Ⅰ型胶原蛋白表达及定位。设计针对人视蛋白3的小干扰RNA,利用脂质体转染入正常人真皮成纤维细胞，分别用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹检验视蛋白3抑制效率。成功下调视蛋白3后，用荧光定量PCR、免疫印迹法、酶联免疫吸附测定及细胞免疫荧光检测Ⅰ型胶原蛋白表达变化；通过CCK-8及EDU检测细胞增殖活力，流式细胞仪检测细胞周期，Transwell检测细胞迁移能力；通过蛋白免疫印迹法检测PI3K、AKT及磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT的表达情况。最后抑制通道蛋白AKT的磷酸化，通过蛋白免疫印迹法检测Ⅰ型胶原蛋白表达变化。结果 视蛋白1～5均在正常人真皮成纤维细胞中表达，其中视蛋白3基因及蛋白表达水平较其他视蛋白表达高，差异有统计学意义(P<0.05)。下调正常人真皮成纤维细胞中视蛋白3后，细胞合成及分泌Ⅰ型胶原蛋白水平降低，差异有统计学意义(P<0.05);...     

A20基因缺失对弥漫大B细胞淋巴瘤P-gp表达影响

目的 弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是成人淋巴瘤中最常见的非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin lymphoma,NHL),近年来发病有上升趋势,治疗效果一直不佳.本研究检测DLBCL中A20(tumor necrosis factor alpha-induced protein 3 gene,TNFAIP3,A20 gene)基因缺失情况,探讨A20基因缺失对DLBCL中核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)通路活化和P-gp表达的影响.方法 收集2009-06-01-2015-05-31贵州医科大学附属医院病理科60例DLBCL标本,以同期12例淋巴结反应性增生病例作研究对照.采用荧光原位杂交检测A20探针在60例DLBCL和12例淋巴结反应性增生病例中DNA缺失的情况.免疫组织化PV两步法检测A20、p65、P-gp蛋白的表达,收集临床病理资料并随访.结果 DLBCL病例中A20基因缺失率为21.7%(13/60),淋巴结反应性增生病例中未检出A20基因缺失;在DLBCL病例中活化B细胞样(Activated B cell-like,ABC)的A20基因缺失率30.5%明显高于生发中心B细胞样(germinal center B cell-like,GCB)的8.3%,χ2=4.190,P=0.041.A20蛋白表达与A20基因缺失之间呈低度负相关(r=-0.259,P=0.023),p65蛋白和P-gp蛋白表达与A20基因缺失之间呈低度正相关(r=0.280,P=0.015;r=0.278,P=0.020).P-gp在DLBCL阳性表达率48.3%(29/60),在淋巴结反应性增生中表达率为16.7%(2/12),χ2=4.090,P=0.043.DLBCL中ABC-DLBCL的P-gp蛋白的表达阳性率61.1%明显高于GCB-DLBCL的29.1%,χ2=5.032,P=0.015.结论 DLBCL中A20的缺失和蛋白表达的下调可能降低了A20对NF-κB的负调节作用,使肿瘤内NF-κB异常活化,下游靶基因MDR1转录上调,P-gp表达增加,使肿瘤细胞对DLBCL的化疗产生耐药.     

儿童甲下外生性骨疣特殊皮肤镜表现1例

患儿男,9岁,6个月前左足无明显诱因突发第3足趾远端疼痛性结节,皮肤镜表现为典型的树枝状血管扩张及角化过度。X线正侧位片示：左足第3足趾远端趾骨骨质增生,可见骨性肿物。皮损组织病理示：表皮可见角化过度,角化不全,真皮见骨小梁形成,散在淋巴细胞、组织细胞浸润。诊断：甲下外生性骨疣。予以手术切除后,趾甲形态正常,无复发及术后并发症。     

小汗腺汗孔瘤2例皮肤镜特征分析

例1 男, 58岁, 因左足底皮疹20余年就诊。患者20余年前无明显诱因左侧足底出现一花生米大小粉红色斑丘疹, 皮损逐渐增宽增厚为条状斑块, 偶有出血, 无瘙痒等不适, 未予治疗。无类似疾病家族史。体检:各系统未见明显异常。皮肤科检查:左足底外侧可见一2.0 cm × 0.5 cm粉红色类椭圆形斑块, 境界清楚, 表面呈颗粒状(图1A), 质稍软, 未见明显角化, 无糜烂、渗出, 无压痛, 皮温正常。皮肤镜检查:未见色素网, 可见乳红色结构, 其上可见大量肾小球状、点状、球状血管, 部分可见不规则线状、叶状血管, 中央可见粉白色结构(图1B), 未见溃疡、蓝白幕。皮损组织病理检查:表皮呈网篮状角化过度, 角化不全, 角栓形成, 表皮内见汗孔细胞形成的瘤团, 与真皮相互交织成宽带状, 瘤团内见管腔形成, 其内见嗜伊红物质;瘤细胞较棘细胞小, 大小形态一致, 呈立方形, 胞核呈圆形, 嗜碱性;真皮浅层、附属器周围散在淋巴细胞及组织细胞(图1C、1D)。     

皮肤经典型卡波西肉瘤合并原发结肠的浆母细胞淋巴瘤1例

<正>患者，男性，83岁，因“双足皮疹4+年，加重伴发热2+年，体重减轻1+年”入院，患者4+年前无明显诱因出现双足皮疹，表现为数粒黄豆-花生大小紫红色隆起性、较实性结节，2+年前皮疹逐渐蔓延至躯干、四肢，同时双侧腹股沟淋巴结肿大，未诉淋巴结不适，患者伴间断发热，发热时皮疹瘙痒不适，2+年来发热反复，皮疹加重，且淋巴结也相应增大，近1年来体重减轻15 kg。为求进一步诊治，就诊于本院，以“卡波西肉瘤?”收治入院。     

长春新碱降低由转染A20 siRNA促进的弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系增殖

目的研究A20小分子干扰RNA片段(siRNA)对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞(OCI-LY1)增殖和多药耐药基因(MDR1)表达的影响。方法分对照组、转染组、长春新碱干预组(VCR)组和转染+VCR组。用脂质体转染法将A20 siRNA转入OCI-LY1细胞,MTT法检测细胞对VCR的敏感性;流式细胞计量术检测细胞凋亡;用real-time PCR检测A20及MDR1 mRNA;用Western blot检测细胞内A20、Pgp蛋白及核蛋白NF-κB的表达。结果 1)A20 siRNA转染后,细胞增殖能力增强(P0.05),VCR刺激后转染细胞的增殖曲线下降缓慢。2)转染细胞凋亡率明显低于对照组,VCR刺激24 h后OCI-LY1细胞凋亡率较加药前明显增加(P0.05),VCR组凋亡率比转染+VCR组增高的幅度大(P0.05)。3)转染后,A20 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.001),NF-κB蛋白(P0.001)、MDR1mRNA(P0.001)和Pgp(P0.001)表达都明显增高;但MDR1 mRNA和Pgp在药物刺激后表达降低(P0.05),且VCR组较转染+VCR组降低的幅度大(P0.01)。结论 A20 siRNA能有效的增强OCI-LY1细胞内NF-κB的表达,使得MDR1基因及编码蛋白Pgp蛋白增强,从而抑制细胞凋亡、促进细胞增殖;VCR刺激后细胞内MDR1 mRNA和Pgp的表达明显降低,A20 siRNA则减弱了VCR的这一作用。     

IL-6和AG490对移植裸鼠的弥漫大B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤生长的影响

目的:观察STAT3通路对移植裸鼠弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)和伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma,BL)的作用。方法:建立OCI-LY8细胞(DLBCL)和Raji细胞(BL)裸鼠移植瘤模型,并分别将其分为对照组、IL-6组和AG490组,测量裸鼠体重和肿瘤体积;应用Western blot和免疫组织化学检测移植瘤组织中p-STAT3、survivin及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的水平;real-time PCR检测瘤组织中survivin和VEGF的mRNA表达。结果:2种细胞株总成瘤率为83.3%(25/30),其中OCI-LY8细胞成瘤率为66.7%(10/15),低于Raji细胞成瘤率100%(15/15)(P0.05)。DLBCL和BL荷瘤鼠IL-6组在第9和10天裸鼠体重和总瘤体积较对照组均增加,2种移植瘤的IL-6组中第1天与第10天瘤体积总差值均明显大于对照组(P0.05)。pSTAT3阳性信号定位于细胞核;survivin和VEGF以细胞浆表达为阳性。与对照组相比,DLBCL移植瘤IL-6组survivin和VEGF明显升高(P0.05),p-STAT3无显著变化;AG490组p-STAT3及VEGF明显降低(P0.05),survivin无显著变化;在BL移植瘤IL-6组,p-STAT3和VEGF蛋白与相应对照相比均显著升高(P0.05),在AG490处理组中3种蛋白均明显降低(P0.05)。IL-6组和AG490组中survivin和VEGF的mRNA表达与对照组相比差异无统计学显著性。结论:IL-6和AG490可能通过STAT3通路影响DLBCL和BL的生长,STAT3通路活化可能通过调控VEGF和survivin表达而影响肿瘤的发生发展。     

A20基因缺失对弥漫大B细胞淋巴瘤临床病理特征和预后的影响及相关分子机制研究

目的 检测弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中肿瘤坏死因子α诱导蛋白3基因(A20基因)缺失情况,探讨A20基因缺失对DLBCL临床过程及预后的影响及其与核因子-κB(NF-κB)通路活化的关系.方法 荧光原位杂交检测其A20基因缺失情况;免疫组织化学染色检测肿瘤中A20、Survivin、P65、Ki-67蛋白的表达,TUNEL技术检测肿瘤细胞凋亡水平,收集临床病理资料并随访,进行统计分析.结果 DLBCL病例A20基因缺失率为21.7％,活化后B细胞样型(ABC)-DLBCL的A20基因缺失率明显高于生发中心B细胞样型(GCB)-DLBCL(30.6％ vs.8.3％,P＜0.05),A20蛋白表达与A20基因缺失呈负相关(r=-0.259,P=0.023),P65蛋白和Survivin蛋白表达与A20基因缺失呈正相关(r=0.280、0.313,P=0.015、0.007);肿瘤细胞凋亡在A20基因缺失的DLBCL病例中较低,在A20蛋白表达阳性病例中明显高于表达阴性病例,在Survivin和P65蛋白阳性表达病例中明显低于阴性表达病例(P＜0.05),而在ABC-DLBCL和GCB-DLBCL病例间差异无统计学意义(P＞0.05);COX回归分析结果显示,年龄、A20基因的缺失、DLBCL类型和Ki67表达是DLBCL独立的生存相关因素;A20基因缺失者的生存状况明显较未缺失者差(P=0.015).结论 A20缺失可能影响A20蛋白表达,使其对NF-κB活化的负调节作用减弱,使Survivin表达上调而影响肿瘤细胞的增殖和凋亡;A20基因缺失对DLBCL的临床过程和预后有一定影响.