排序方式: 共有87条查询结果,搜索用时 15 毫秒
1.
人PD-L2基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 克隆人PD-L2基因并构建PD-L2胞外区的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达。方法 以RT-PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD-L2基因的cDNA,构建PD-L2胞外区的原核表达载体,在大肠杆菌BL21(ED3)中进行表达并鉴定。结果 克隆到PD-L2基因cDNA编码区全长序列,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。进而构建了PD-L2胞外区的原核表达载体,并在大肠杆菌表达,免疫印迹分析表明在IPTG诱导后表达PD-L2胞外区蛋白,相对分子质量Mr为22000,与理论值大小相符。结论 成功克隆PD-L2基因,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达,为进一步研究PD-L2功能提供了条件。 相似文献
2.
目的:研究自然杀伤(NK)细胞在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、骨髓植入及造血重建的影响。方法:以近交系小鼠C57/6j(H-2b)为供鼠、BALB/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和/或NK细胞进行异基因骨髓移植,用流式细胞仪检测受鼠的CD34+细胞计数和H-2Kb+细胞表达水平,血细胞自动分析仪检测外周血白细胞计数,并结合临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率、GVHD、植入水平及造血重建等。结果:增加NK细胞组的小鼠存活率显著大于不增加NK细胞组,小鼠出现GVHD的数量少、程度轻,外周血白细胞及骨髓CD34+细胞恢复快、H-2Kb+细胞表达水平高。结论:NK细胞抑制小鼠异基因骨髓移植中的GVHD和移植排斥,促进骨髓植入及造血重建。 相似文献
3.
重组人bFGF的原核表达及其高效价抗血清的制备 总被引:4,自引:1,他引:4
目的 以重组人碱性成纤维生长因子为免疫原,制备高效价抗hbFGF抗血清。方法通过PCR方法改造5’编码区的12个密码子,构建hbFGF’原核表达载体并在大肠杆菌(E.coli)中表达,以纯化的hbFGF、免疫新西兰兔,制备高效价抗血清,用于重组hbFGF、的免疫印迹分析。结果经过改造的hbFGF基因在E.coli中获得较高水平表达。从可溶性部分纯化得到纯度95%以上的重组hbFGF,以该重组蛋白免疫兔子,在二次加强后以间接ELISA检测抗血清效价可达1:512000。免疫印迹分析显示该抗血清与E.coli中表达的重组hbFGF、和标准hbFGF、均有特异性反应,但与某些细菌蛋白存在弱交叉反应,经E.coli菌体蛋白吸附的抗血清,与菌体蛋白的弱交叉反应消失。结论以纯化的重组hbFGF为免疫原制备了高效价的特异性抗血清,经菌体蛋白吸附可消除存在的交叉反应性。 相似文献
4.
目的:利用神经网络集成(NNE)预测MHC-Ⅰ类分子结合肽。 方法: 基于HLA-A*0201编码的MHC-Ⅰ类分子结合肽数据库(含有628个9聚物)及其结合能力分类,利用NNE分别对具有无、低、中和高4类亲合性的结合肽进行分类预测;同时还进一步利用T细胞真实表位集(含50个表位)评估了NNE的预测性能。 结果: 集成数为12的NNE对上述分类的平均预测命中率可达0.8,而且NNE对潜在T细胞表位的预测能力也较高,约84%的真实表位归于高和中等亲合性的潜在抗原肽一类。 结论: 可以利用神经网络集成预测MHC-Ⅰ类分子结合肽,并进而预测相应的T细胞表位。经适当修改,NNE预测工具可扩展为能涵盖任意长度的Ⅰ类分子结合肽甚至可扩展到Ⅱ类分子结合肽的预测。 相似文献
5.
实时定量PCR检测小鼠成熟过程中T淋巴细胞sjTRECs水平 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:实时定量PCR检测正常小鼠成熟过程中胸腺及脾脏T淋巴细胞的信号结合T细胞受体重排删除DNA环(sjTRECs)含量,从而推测T淋巴细胞中的初始T细胞的数目,评价小鼠成熟过程中的胸腺功能.为胸腺发育和功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法.方法:实时定量PCR(SYBR Green法)检测T淋巴细胞中sjTRECs含量.结果:1~6 wk的小鼠胸腺中的初始T细胞含量持续增加,9wk时已经开始下降,12 wk时持续下降.而小鼠的外周中初始T细胞的含量则随着周龄增加而增加(1~12wk).结论:在小鼠的成熟过程中,从9wk开始胸腺的生成功能减弱,而胸腺的输出功能持续增加;成功建立和应用实时定量PCR检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量,是准确评价小鼠胸腺功能的方法. 相似文献
6.
目的建立实时定量PCR检测小鼠胸腺及脾脏T淋巴细胞中信号结合T细胞受体删除环(sjTRECs)水平的方法。推测其中的初始T细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增目的片段。纯化构建标准质粒的RAG2片段,构建标准重组质粒并鉴定。优化PCR体系后,实时定量PCR反应建立标准曲线,并检测不同品系(BALB/c和C57BL/6)成年小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞sjTRECs含量。结果成功构建标准质粒。确定最适实时定量PCR反应条件后,在实时定量PCR中建立可信度高的标准曲线。建立的方法分析表明,这两个不同品系的sjTRECs含量统计学差异不显著。结论成功建立定量检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量从而推测其中的初始T细胞数目的方法。为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。 相似文献
7.
目的:通过分析槲皮素对淋巴细胞早期活化标记物CD69表达的影响,探讨其对T淋巴细胞体外活化抑制作用的机制。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂及槲皮素共同培养,分别于2、6、24h收获细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞仪对T细胞的CD69分子表达情况进行分析并计算抑制率。结果:槲皮素(终浓度10μmol/L)对未受刺激的T细胞CD69表达百分率无明显影响,而经佛波醇酯(PDB)及刀豆蛋白A(ConA)活化同时加入槲皮素的T细胞CD69表达百分率在2h、6h及24h均显著下降(P<0.01)。槲皮素对PDB的抑制率随作用时间延长而明显下降,对ConA的抑制率平缓而持久。结论:槲皮素对PDB、ConA活化的T淋巴细胞均显示明显的抑制效应,表明该药可能作用于T细胞活化信号传递通路蛋白激酶Cθ或其下游部位,并且,这种抑制效应表现出一定的可逆性。 相似文献
8.
9.
目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HLA-A*0201(A*0201)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法克隆A*0201cDNA,构建A*0201-EGFP融合蛋白表达载体,转染K562细胞,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果:从两个HLA-A2阳性供者外周血细胞中克隆到A*0201cDNA编码区全长序列。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码,成功构建A*0201-EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞,5h后A*0201和EGFP的表达百分率分别为25.12±2.26、27.37±3.59,24h后表达水平无明显提高。表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上,胞内分布较少。相反,转染空载体的细胞不表达A*0201分子,仅表达EGFP,且其在细胞内呈弥散样分布。结论:成功构建A*0201-EGFP融合蛋白表达载体,并在K562细胞中得到表达,表达产物主要分布于细胞膜表面,提示表达该融合蛋白的K562细胞是潜在的人工抗原提呈细胞。 相似文献
10.
雪胆素乙通过破坏微丝结构和促进p21~(Cip1)表达抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖 总被引:1,自引:0,他引:1
目的分析雪胆素乙(CuⅡb)对人前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞周期的影响,探讨其作用机制。方法 MTS法检测CuⅡb 0.064~200μmol·L-1作用48 h后PC-3细胞增殖;CuⅡb 2和20μmol·L-1作用24 h,相差显微镜观察细胞形态;CuⅡb 2和20μmol·L-1作用48 h,流式细胞术分析细胞周期分布;免疫荧光染色分析CuⅡb 20μmol·L-1分别作用1,4和24 h后微丝和微管细胞骨架变化;免疫印迹法测定CuⅡb20μmol·L-1分别作用1,4和24 h后G肌动蛋白、F肌动蛋白、p21Cip1及细胞周期蛋白A,B1,E和D1的表达。结果 CuⅡb以浓度依赖方式抑制PC-3细胞的增殖(r=0.9817,P<0.05)。CuⅡb 20μmol·L-1作用48 h,使细胞周期阻滞于G2/M期,从溶剂对照组的(27.7±1.5)%上升为(45.3±1.8)%(P<0.01),相差显微镜见细胞发生明显收缩。CuⅡb 20μmol·L-1作用24 h,使G肌动蛋白水平显著下降,F肌动蛋白发生严重聚集(P<0.05),而对微管只有轻微影响。与溶剂对照组相比,CuⅡb 20μmol·L-1作用24 h后,细胞p21Cip1表达明显升高,细胞周期蛋白A表达显著下调,其他细胞周期蛋白表达上调(P<0.05)。结论 CuⅡb能明显抑制人前列腺癌PC-3细胞的增殖,其机制可能是通过诱导肌动蛋白聚集,破坏微丝骨架,促进抑癌因子p21Cip1表达,阻滞细胞周期的进程。 相似文献