弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体构建及在Vero细胞中的表达

目的构建弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体，并在Vero细胞中表达。方法设计1对引物，从弓形虫RH株速殖子基因组DNA中扩增SAG2全长编码基因，构建pVAXl—SAG2真核表达重组质粒。以限制性内切酶Kpn Ⅰ和EcoR Ⅰ进行双酶切、PCR鉴定，纯化后进行测序鉴定。脂质体介导法瞬时转染Vero细胞，同时以pVAX1为对照，48h后收集细胞，Western—blot鉴定。结果从弓形虫RH株DNA中扩增出了577bp的SAG2基因，构建了真核表达载体pVAX1—SAG2，在质脂体介导下转染Vero细胞，质粒DNA成功的转染到细胞中。通过Westen-blot分析，细胞裂解液样品有1条可被弓形虫免疫血清所识别的约17ku大小的条带，与预计大小一致。结论真核表达载体pVAX1—SAG2在Vero细胞中有一定表达，且有一定的活性。     

日本血吸虫疫苗候选分子Calpain的原位表达

目的　探讨日本血吸虫疫苗候选分子———钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)在日本血吸虫体内的表达部位及其特征。方法　用重组纯化的Calpain抗原免疫大鼠 ,制备抗Calpain血清 ,从感染鼠灌流分离的日本血吸虫成虫被切片 ,用羊抗大鼠IgG抗体作为二抗进行免疫组织化学分析 ,观察Calpain蛋白在日本血吸虫成虫体内的表达部位。 结果　重组Calpain抗原免疫大鼠后 ,产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体 ,并在日本血吸虫成虫切片上识别自然的日本血吸虫Calpain ,且大多数表达在成虫真皮层。结论　日本血吸虫钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)主要分布在成虫肌肉和真皮层 ,提示Cal pain可能是日本血吸虫的一个疫苗候选分子 ,并提示这个分子的重组抗原有可能应用于血吸虫病诊断。     

武汉市市售351件动物源性食品中磺胺类抗生素残留检测

目的监测武汉市市售动物源性食品中磺胺类抗生素残留水平,为其潜在健康风险的评估与控制提供参考依据。方法在武汉市12个区大型超市和农贸市场模拟购买动物源性食品样品351件后进行前处理,超高效液相色谱-质谱法同步检测磺胺类抗生素残留水平,以SPSS18.0对检测结果进行分析。结果不同磺胺类抗生素组分检出率高低顺位为磺胺甲恶唑(80/351)磺胺甲噻二唑(59/351)磺胺氯哒嗪(39/351)磺胺异恶唑(36/351)磺胺二甲基嘧啶(35/351)磺胺吡啶(18/351)磺胺甲基嘧啶(1/351),差异有统计学意义(P0.05)。肉类和水产类除STZ外其他组分均有检出,蛋类和奶类却只有STZ检出。不同磺胺类组分在食品中残留量存在关联的同时,各组分在不同食品类别中的残留存在倾向性。结论动物源性食品中磺胺类抗生素残留现状不容忽视,食品安全监管部门在加强中抗生素残留监管的同时,应协调农业及畜牧业管理部门尽快规范饲料生产及养殖领域的兽药使用。     

疟疾疫情预测GM(1,1)灰色模型的建立与应用效果分析

目的目的建立疟疾疫情预测模型GM（1,1）,探讨其应用于深圳市龙岗区疟疾发病率预测的可行性。方法根据1998～2004年龙岗区疟疾发病率数据建立疟疾发病率预测灰色模型GM（1,1）,并作拟合效果检验;外推预测2005年深圳市龙岗区疟疾发病率,将预测值与实际发病率比较,评价龙岗区2005年疟疾防治效果。结果疟疾发病率预测数学模型为^∧Y（t）=-12.8390e^-0.5398（t-1）＋19.9444,经拟合检验,模型拟合精度好（C=0.1559,P=1.000）。利用本模型对2005年深圳市龙岗区疟疾发病率进行外推,估计2005年龙岗区疟疾发病率为0.1224/10万,实际发病率为0.1799/10万,实际值比预测值高31.96%。结论GM（1,1）模型较好地拟合了龙岗区疟疾发病的趋势,预测结果具有一定的参考价值。龙岗区疟疾实际发病率高于预测值,提示疟疾防治工作需要巩固和加强。     

弓形虫GRA8真核表达质粒的构建与体外表达

目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的真核重组表达质粒。方法设计GRA8的特异引物,采用多聚酶链反应(PCR)技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码GRA8的基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达载体pVAC而构建真核重组表达质粒pVAC-GRA8,转化大肠杆菌DH5α;将构建的真核重组表达质粒pVAC-GRA8转染vero细胞,分析转染vero细胞中GRA8的表达状况。结果PCR扩增出GRA8基因的特异片段,所获克隆的序列正确,并被亚克隆到真核表达载体pVAC,构建了真核重组表达质粒pVAC-GRA8;在vero细胞中获得表达。结论成功构建了GRA8的真核重组表达质粒pVAC-GRA8。     

重组耻垢分枝杆菌Msmc^2-CFP10-ESAT6的构建

目的构建能表达结核分枝杆菌早期分泌蛋白CFP10-ESAT6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌。方法采用基因拼接（Gene SOEing）法体外扩增结核杆菌1hp-ESAT6融合基因,插入大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pB-CG3000,构建重组穿梭表达质粒pBCG3000-CFP10-ESAT6,电转化耻垢分枝杆菌mc2155,构建耻垢疫苗株Msmc2155-CFP10-ESAT6,热诱导表达CFP10-ESAT6融合蛋白,Western blot分析其免疫原性。结果经PCR、酶切及测序鉴定,证实成功构建重组质粒pBCG3000-CFP10-ESAT6,并在耻垢分枝杆菌中经热诱导表达出分子质量单位约为22 ku的CFP10-ESAT6蛋白,该蛋白可被结核病患者血清、鼠抗ESAT6血清和鼠抗CFP10血清识别。结论结核分枝杆菌lhp-ESAT6融合基因在耻垢分枝杆菌中成功表达。     

弓形虫DNA疫苗联合诱导BALB/c小鼠保护性免疫力的研究

弓形虫表面抗原F30和P22是弓形虫疫苗的候选抗原。本研究将构建的真核表达质粒pBK-P30和pBK-P22联合免疫小鼠，初步观察其免疫保护效果。     

深圳市淡水鱼华支睾吸虫感染调查及实验研究

目的了解深圳市淡水鱼华支睾吸虫(肝吸虫)囊蚴感染情况,阻断和控制肝吸虫病在深圳市的传播和流行。方法用鱼体消化法筛查肝吸虫囊蚴;以肝吸虫过氧化物酶(SOD)基因保守序列作为摸板,RT- PCR鉴别肝吸虫囊蚴。结果对深圳市淡水鱼肝吸虫感染情况进行调查,共抽检16种鱼257份样品,其中检出肝吸虫囊蚴45份,检出率为17．50％。检出率最高的鱼种依次为鲩鱼40．74％、鲮鱼26％、鲤鱼22．5％、大头鱼 22．85％、生鱼16．6％、非洲鲫鱼14．5％;RT-PCR检测结果与镜检结果完全一致。结论检测结果显示深圳市淡水鱼中肝吸虫的感染情况严重,尤其是鲩鱼的感染率较高,为了控制和阻断肝吸虫的传播必须改变吃淡水鱼生的生活习惯。