siRNA干扰胰岛新生相关蛋白表达对胰岛细胞株INS-1细胞增殖的抑制作用

目的 探讨靶向胰岛新生相关蛋白(INGAP)基因RNAi对胰岛细胞增殖的抑制效应.方法 设计合成siRNA,通过脂质体转入胰岛细胞株INS-1中,研究其对靶基因的抑制效应,采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪、Western-blot法分别检测转染后的INS-1细胞中INGAP mRNA和蛋白表达的变化,用噻唑蓝(MTT)法来检测细胞的增殖.结果 结果显示siRNA6序列对细胞增殖有明显的抑制效应,INGAP mRNA及蛋白表达明显降低,INS-1细胞增殖受到抑制,P<0.05.结论 干扰INGAP基因的表达能有效抑制胰岛细胞的增殖,INGAP有可能成为治疗β细胞严重减少或损害的重要新靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of small interfering RNA (siRNA)-mediated islet neogenesis associated protein (INGAP) gene silencing on the proliferation of islet cells. Methods Different siRNAs targeting INGAP gene were designed and transfected into INS-1 islet cells, and the expression levels of INGAP mRNA and protein following the transfection were detected using RT-PCR, flow cytometry and Western blotting. The proliferation of the transfected INS-1 cells was evaluated using MTT assay. Results Compared with those in the irrelevant siRNA, empty vector control, and un-transfected groups, the expression levels of INGAP mRNA and protein in the cells transfected with siRNA6 were reduced significantly. The cell proliferation rate significantly increased after transfection with siRNA6 (P<0.05). Conclusion siRNA targeting INGAP can effectively down-regulate INGAP expression and inhibit the proliferation of INS-1 cells.     

波动性葡萄糖对胰岛β细胞INS-1的影响

目的 探讨波动性葡萄糖对培养的胰岛β细胞株INS-1细胞的损伤机制.方法 实验分5组.对照组:葡萄糖浓度为5.5 mmol/L;持续高糖组:葡萄糖浓度为16.7 mmol/L;波动性高糖组:16.7mmo/L葡萄糖培养2 h后更换葡萄糖浓度为5.5 mmo/L,继续培养3 h,每天重复3次,夜间9 h维持在5.5 mmo/L匍萄糖的培养基中;N-乙酰半胱氨酸(NAC,1.0 mmo/L)+高糖组;NAC+波动性高糖组.流式细胞仪检测活性氧簇(ROS)的水平;四氮唑蓝定量检测细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的活性;同时检测还原型辅酶Ⅱ(NADPH)的含量.结果 干预72 h后,对照组、高糖组、波动性高糖组、NAC+高糖组和NAC+波动性高糖组细胞的ROS活性分别为37.77±2.31、86.97±7.97、124.27±10.04、60.92±2.61和51.47±3.36;G6PD活性分别为1.25±0.03、1.09±0.02、1.03±0.01、1.12±0.02和1.21±0.01;NADPH含量分别为(0.123±0.003)mmoVmg prot、(0.112±0.004)mmol/mg prot、(0.099±0.002)mmol/mg prot、(0.116±0.005)mmol/mg prot和(0.120±0.002)mmol/mg prot.波动性高糖组细胞ROS活性较单纯高糖组显著增加(P＜0.01),G6PD活性和NADPH含量较单纯高糖组显著减少(P＜0.01);加NAC共孵育使细胞的变化程度减小.结论 波动性高浓度葡萄糖使培养的INS-1细胞氧化应激水平增高,其机制可能是由于抗氧化酶G6PD活性降低导致了氧化还原的失衡.     

熬夜当心突然失明

在生活中，很多人都有熬夜的经历，然而对于一些中青年，特别是男性来说，一种颇显“怪异”的眼病常在他们“挑灯夜战”之后悄然突袭，使其视力突然下降很多，而且患原来的视力往往还很不错。     

高糖对INS-1细胞线粒体呼吸链功能的影响

目的 探讨高糖对INS-1细胞线粒体呼吸链功能的影响.方法 将INS-1细胞随机分为正常对照组(葡萄糖5.5mmol/L培养)、高糖组(葡萄糖16.7 mmol/L培养)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)+高糖组(NAC 1.0mmol/L+葡萄糖16.7 mmol/L培养),均干预72 h.分光光度计测定呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅲ活性,荧光素酶方法检测细胞内ATP含量,放免法测定胰岛素分泌水平.结果 高糖组的呼吸链酶复合物Ⅰ活性[(1.53±0.24)μmol/(mg·min)]、Ⅲ活性[(1.08±0.22)μmol/(mg·min)]分别较正常对照组的呼吸链酶复合物I活性((2.31±0.33)μmol/(mg·min)]、Ⅲ活性[(1.92±0.39)μmol/(mg·min)]下降,差异有统计学意义(P<0.01).细胞ATP含量及胰岛素分泌水平在高糖组也较正常对照组明显减少(P<0.01).使用抗氧化剂NAC干预高糖组,其线粒体酶复合物Ⅰ、Ⅲ活性、细胞ATP含最及胰岛素分泌水平均显著增加(P<0.05).结论 高糖损伤INS-1细胞的胰岛素分泌可能与损伤线粒体呼吸链功能有关,高糖可能通过氧化应激损伤INS-1细胞线粒体呼吸链功能.     

前列地尔结合甲钴胺治疗2型糖尿病周围神经病变的临床效果观察

目的探究前列地尔结合甲钴胺治疗2型糖尿病周围神经病变的临床效果。方法选择2016年3月~2017年3月于我院接受治疗的98例2型糖尿病周围神经病变患者,随机分为两组,即对照组用常规治疗,观察组在常规治疗基础上给予前列地尔结合甲钴胺治疗,再对比两组疗效。结果观察组治疗总有有效率为95.9%显著高于对照组的69.4%,差异具有统计学意义(P0.05);观察组与治疗组相比,治疗后空腹血糖值为(4.8±0.3)mmol/l,相比于对照组治疗后(5.6±0.4)mmol/l下降更加明显,有统计学意义(P0.05),且观察组治疗后餐后2h血糖(5.6±0.3)mmol/l同样与对照组(6.5±0.4)mmol/l相比差异明显,有统计学意义(P0.05)。治疗前两组正中神经、腓总神经感觉传导速度对比无统计学差异(P0.05);治疗后观察组正中神经感觉传导速度为(46.2±4.0)m/s,腓总神经感觉传导速度为(42.4±6.3)m/s均显著高于对照组(P0.05)。结论 2型糖尿病周围神经病变患者采用前列地尔结合甲钴胺治疗,可有效提高神经传导速度,疗效确切。     

父母教养方式与学业拖延:学业自我效能感的中介作用北大核心CSCDCSSCI

目的:考察初中生学业拖延与父母教养方式、学业自我效能感的关系。方法:采用学业拖延量表、父母教养方式问卷、学业自我效能量表和自编一般人口学情况调查表,对东莞市一所中学的初一到初三学生进行调查,收回有效问卷460份。结果:父母教养方式中父母关怀、父母自主性、父母过度保护以及学业自我效能感均对学业拖延有直接效应;父母关怀和父母自主性通过学业自我效能感对学业拖延产生间接作用。结论:父母给予孩子较多的关怀与较少的控制干涉,有利于提高孩子的学业自我效能感,进而减少其学业拖延行为。