内质网应激蛋白激酶RNA样ER激酶（PERK）通路对肝星状细胞激活及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的 探讨内质网应激蛋白激酶RNA样ER激酶（PERK）/真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)信号通路对肝星状细胞（HSC）活化的影响。方法 收集11例肝穿刺病理提示S1～S4肝纤维化患者和9例肝血管瘤、肝腺瘤患者术后周围正常肝组织病理切片,进一步行组织免疫组化检测PERK、eIF2α、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）表达情况;使用不同浓度的内质网应激诱导剂毒胡萝卜素（0、125、250、500、1 000 nmol/L）作用于人HSC-LX2,使用qRT-PCR检测PERK mRNA及Western Blot检测PERK、肌醇需要酶1(IRE1)、激活转录因子6(ATF6)、CHOP及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平。使用慢病毒转染构建PERK稳定过表达LX-2组及对照组,并通过qRT-PCR检测PERK、eIF2α、α-SMA mRNA,Western Blot检测PERK、p-eIF2α、α-SMA蛋白表达,免疫荧光检测胶Ⅰ型原蛋白（COL1A1）表达。符合正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较...     

耐索拉非尼肝癌细胞株的构建及耐药机制研究

［摘要］　目的　构建耐索拉非尼肝癌细胞株并探讨其耐药机制。方法　应用HepG2、Huh7细胞通过浓度递增法建立耐索拉非尼细胞模型。通过CCK8法检测细胞对不同浓度索拉非尼的敏感性。通过划痕实验检测细胞的迁移能力。通过流式细胞术分析细胞凋亡情况。通过荧光实时定量RT-PCR和Western blot实验检测凋亡相关因子caspase-3和自噬标志因子P62、LC3的表达水平。结果　获得耐索拉非尼肝癌细胞株HepG2-SR、Huh7-SR。随着索拉非尼药物干预浓度的升高，耐药细胞株及野生型细胞株的存活率均逐渐降低。HepG2-SR细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）显著高于HepG2细胞［（15.74±0.38）μM vs （7.27±0.44）μM ；t=5.450，P<0.001］；Huh7-SR细胞的IC₅₀显著高于Huh7细胞［（11.73±0.27）μM vs （4.92±0.31）μM；t=4.807，P<0.001］。相较于野生型细胞株，耐药细胞株具有更高的抗凋亡和迁徙能力。耐药细胞株的caspase-3、P62表达水平显著低于野生型细胞株（P<0.05），而LC3表达水平显著高于野生型细胞株（P<0.05）。结论　耐索拉非尼肝癌细胞株HepG2-SR、Huh7-SR具有更强的抗凋亡、抗生殖抑制和迁移能力，且自噬水平更高，为研究肝细胞癌对索拉非尼的耐药机制提供了基础。