日本血吸虫成虫67kD蛋白的分离与鉴定

目的 :分离日本血吸虫感染及免疫血清识别的成虫抗原 (AWA)中的特异蛋白带 ,为血吸虫病免疫诊断提供新的抗原分子。方法 :免疫印迹法分析AWA的特异蛋白带 ,电泳层析法分离靶抗原。结果 :获得了感染血清和免疫血清识别的 6 7kD蛋白。结论 :电泳层析法是一种分离血吸虫抗原的有效方法     

弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体构建及在Vero细胞中的表达

目的构建弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体，并在Vero细胞中表达。方法设计1对引物，从弓形虫RH株速殖子基因组DNA中扩增SAG2全长编码基因，构建pVAXl—SAG2真核表达重组质粒。以限制性内切酶Kpn Ⅰ和EcoR Ⅰ进行双酶切、PCR鉴定，纯化后进行测序鉴定。脂质体介导法瞬时转染Vero细胞，同时以pVAX1为对照，48h后收集细胞，Western—blot鉴定。结果从弓形虫RH株DNA中扩增出了577bp的SAG2基因，构建了真核表达载体pVAX1—SAG2，在质脂体介导下转染Vero细胞，质粒DNA成功的转染到细胞中。通过Westen-blot分析，细胞裂解液样品有1条可被弓形虫免疫血清所识别的约17ku大小的条带，与预计大小一致。结论真核表达载体pVAX1—SAG2在Vero细胞中有一定表达，且有一定的活性。     

深圳市1例输入性恶性疟死亡病例的流行病学调查

目的 对深圳市1例输入性恶性疟死亡病例进行流行病学调查分析,为科学防治恶性疟提供参考依据。方法 访谈收治医生和患者家属,收集分析该病例临床和流行病学资料。结果 该病例发病前在乌干达务工,2020年1月回国,回国后第10天出现发热、发冷、发汗、头痛、腹泻、全身酸痛等症状,发病第2天前往某民营医院就诊,拟诊为“感染性发热”,服药后症状未见好转。发病第3天进行血液检查,结果显示疟原虫,考虑“疟疾”,予将其转院治疗。入院后,给予蒿甲醚抗疟、抗炎、降颅压、脏器功能支持等对症治疗,然而病情进一步加重。发病第6天该病例因脑型疟、多器官功能衰竭而死亡。血涂片镜检查见恶性疟原虫,PCR基因鉴定为恶性疟原虫。结论 综合流行病学史、临床症状和实验室检测结果显示,这是1例输入性恶性疟病例,诊治延误是引起该病例死亡的主要原因。     

疟疾疫情预测GM(1,1)灰色模型的建立与应用效果分析

目的目的建立疟疾疫情预测模型GM（1,1）,探讨其应用于深圳市龙岗区疟疾发病率预测的可行性。方法根据1998～2004年龙岗区疟疾发病率数据建立疟疾发病率预测灰色模型GM（1,1）,并作拟合效果检验;外推预测2005年深圳市龙岗区疟疾发病率,将预测值与实际发病率比较,评价龙岗区2005年疟疾防治效果。结果疟疾发病率预测数学模型为^∧Y（t）=-12.8390e^-0.5398（t-1）＋19.9444,经拟合检验,模型拟合精度好（C=0.1559,P=1.000）。利用本模型对2005年深圳市龙岗区疟疾发病率进行外推,估计2005年龙岗区疟疾发病率为0.1224/10万,实际发病率为0.1799/10万,实际值比预测值高31.96%。结论GM（1,1）模型较好地拟合了龙岗区疟疾发病的趋势,预测结果具有一定的参考价值。龙岗区疟疾实际发病率高于预测值,提示疟疾防治工作需要巩固和加强。     

日本血吸虫成虫组分抗原的分离及小鼠免疫试验

目的 分离日本血吸虫可溶性成虫抗原(AWA)中的组分抗原，分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性。方法 电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原，计算各组分抗原的分子量，并分析其免疫学活性。将各组分抗原分别免疫小鼠，攻击感染日本血吸虫尾蚴，感染后45d剖杀，观察各组分抗原的免疫保护效果。结果 采用电泳层析法分离获得多个组分抗原，选择收集其中4个较纯的组分抗原，分子量分别为52kD、63kD、67kD和74kD；其中63kD和67kD抗原与感染血清有强的反应，而52kD和74kD抗原则反应弱；4种组分抗原均与AWA的免疫血清反应。63kD抗原诱导的免疫保护力水平较52kD、67kD和74kD抗原好。结论 电泳层析法分离的4个血吸虫组分抗原有良好的免疫原性，且63kD抗原有一定的免疫保护性。     

弓形虫GRA8真核表达质粒的构建与体外表达

目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的真核重组表达质粒。方法设计GRA8的特异引物,采用多聚酶链反应(PCR)技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码GRA8的基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达载体pVAC而构建真核重组表达质粒pVAC-GRA8,转化大肠杆菌DH5α;将构建的真核重组表达质粒pVAC-GRA8转染vero细胞,分析转染vero细胞中GRA8的表达状况。结果PCR扩增出GRA8基因的特异片段,所获克隆的序列正确,并被亚克隆到真核表达载体pVAC,构建了真核重组表达质粒pVAC-GRA8;在vero细胞中获得表达。结论成功构建了GRA8的真核重组表达质粒pVAC-GRA8。     

弓形虫依钙蛋白激酶Calpain—like基因的克隆及表达

目的克隆弓形虫RH株Calpain—like基因片段，构建原核表达载体，诱导表达Calpain-like基因重组蛋白。方法收集、纯化弓形虫RH株速殖子，提取总RNA，在设计合成的引物中引入SalI和EcoRI酶切位点。应用FIT—PCR扩增弓形虫RH株Calpain—like基因片段，插入pGEM—T载体，提取重组质粒，双酶切获得目的基因，亚克隆到原核表达质粒pET32a，重组子经双酶切、PCR和DNA序列分析鉴定，转化大肠杆菌BL21并以IPTG诱导表达。结果从弓形虫RH株速殖子eDNA中扩增出316bp的Calpain-like基因片段；含pET32a／Calpain—like的重组质粒在宿主菌经诱导后，获得与预期分子量相符的表达产物。结论成功地克隆和表达弓形虫RH株Calpain—like基因，弓形虫Calpain—like基因的克隆表达为进一步筛选弓形虫疫苗候选分子和治疗药物的靶位提供了研究基础。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B基因克隆、表达及其抗血清在食物中毒快速检测上的应用

目的克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）基因，制备金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）的多克隆抗体，应用于金黄色葡萄球菌引起的食物中毒的诊断。方法用核酸扩增技术从金黄色葡萄球菌菌株中分离产生肠毒素B的标准菌株，采用高保真PCR技术从金黄色葡萄球菌野生株中扩增全长SEB，目的片段经TA克隆后DNA序列测定，重组质粒pGEM—SEB经酶切获得的SEB基因片段与真核表达载体pGEX-4T-3连接，将重组真核载体pGEX-4T-3-SEB转化人E．coli BL21（DE3）株，在0．1mmol／LIPTG诱导下，诱导SEB基因在E-coli BL21（DE3）株中表达，用谷光苷肽Sepharose4B柱分离纯化GST融合蛋白，用SDS—PAGE检测重组SEB（rSEB）的表达，重组蛋白免疫BALB／c小鼠获得抗血清，并用抗血清与天然的SEB和rSEB进行Westembolt分析。结果成功克隆了822bpSEB基因，编码272个氨基酸，在E．coli BL21（DE3）株中表达了rSEB，分离纯化的rSEB能够诱导小鼠产生IgG抗体，此抗体不仅能够与rSEB反应，而且能够与天然的SEB特异性的反应。结论重组SEB具有抗原特性，制备的特异性抗体可应用于金黄色葡萄球菌引起的食物中毒的快速诊断，将能够建立特异性强、敏感性高的金黄色葡萄球菌的诊断体系，同时也有助于对SEB在抗肿瘤机制、炎症过程中的作用等方面研究。