B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台的搭建及BALB/c小鼠感染模型的建立

【摘要】 目的 本研究利用基因工程技术全基因合成B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88的8个基因节段,并利用反向遗传技术从体外拯救B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88,同时建立BALB/c小鼠感染模型,为下一步研究B型流感病毒致病机制、传播机制以及开发新型疫苗奠定基础。方法 通过基因合成和反向遗传技术体外拯救B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88。全基因组测序验证拯救病毒基因组序列与Genbank序列的一致性。将拯救病毒以105EID50的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒复制等方面进行致病性分析,建立小鼠感染模型。结果 成功从体外拯救出B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88,命名为B-S9。全基因组测序结果表明,B-S9基因组序列与Genbank公布序列一致。B-S9能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性; 攻毒后第3天,B-S9感染小鼠体重出现下降,攻毒后第8天,小鼠体重开始回升;攻毒后第3天和第6天,B-S9感染小鼠的肺脏内均能检测到病毒复制,且攻毒后第3天的小鼠肺脏病毒滴度比攻毒后第6天的小鼠肺脏滴度高132倍。结论 成功搭建B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台,并建立BALB/c小鼠感染模型。目前国内外对B型流感病毒的研究还较少,该反向遗传操作平台的建立为B型流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定了基础,同时也为包括B型流感病毒减毒活疫苗在内的新型疫苗的研制开辟了新途径。     

狂犬病病毒弱毒疫苗株反向遗传操作系统的建立

目的构建狂犬病病毒弱毒疫苗株SRV9全长cDNA感染性克隆,并建立其反向遗传操作系统。方法通过DNAStar对狂犬病病毒SRV9株全长基因组序列进行分析,利用单一的酶切位点,将SRV9全长cDNA分为4段,根据每段重叠区域的酶切位点拼接全长,分别连入pCI和pCDNA3.1(+)载体,并通过PCR方法分别在全长序列的3′端和5′端引入核酶HamRZ和HdvRZ序列,构建全长真核表达质粒pCI-SRV9和pD-SRV9。同时构建能表达狂犬病病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)、糖蛋白(G)和聚合酶蛋白(L)的4个辅助质粒。分别将pCI-SRV9或pD-SRV9与辅助质粒通过脂质体共转染BSR细胞,拯救重组病毒。结果两种质粒表达系统均可拯救到有感染活性的病毒粒子,但pD-SRV9表达质粒的拯救效率(8/8)较pCI-SRV9表达质粒拯救效率3/30高;重组病毒与母本野生病毒的体外生长动力学曲线相一致,相同培养时间的病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了狂犬病病毒弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,为进一步研究狂犬病病毒致病机理、筛选新型狂犬病疫苗或开发基于狂犬病病毒载体的其他疾病疫苗奠定了基础。     

福建部分地区中华按蚊、致倦库蚊对几种杀虫剂的敏感度测定

1960—1982年福建等4个市(县),中华按蚊、致倦库蚊幼虫对二二三、林丹、敌百虫、马拉硫磷、杀螟硫磷5种杀虫剂是不同程度的抗性。     

儿童脾外伤修补术2例报告

<正> 1982年4～6月我院对2例儿童脾外伤作修补术治疗,效果满意,介绍如下: 例1 女,9岁,因从2m高处跌落于石块上,昏迷20分钟后苏醒,腹部疼痛,头痛、头晕、呕吐。受伤后18小时入院。检查:神志清楚,面色苍白,烦躁不安,脉搏细弱。血压80/40。腹腔穿刺有不凝血液。急诊在基础加局麻下经左上腹直肌切口进腹腔,见腹腔内有300ml不     

PB2 E627K对A/H6N1亚型禽流感病毒的致病性的影响分析

目的 本研究利用A/H6N1亚型禽流感病毒的反向遗传平台,评估PB2 E627K对A/H6N1亚型禽流感病毒的致病性,探究A/H6N1流感病毒的致病性分子基础。方法 通过A/H6N1亚型禽流感病毒A/Mallard/SanJiang/275/2007株反向遗传操作系统和点突变技术拯救病毒rA/H6N1和PB2 E627K位点发生突变的 rA/H6N1-627,两株拯救病毒分别以101EID50~106EID50的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、死亡率、病毒滴定等方面进行致病性分析。结果 成功构建A/H6N1亚型禽流感病毒的反向遗传平台,rA/H6N1的8个基因片段完全源于A/H6N1的基因组,核苷酸序列及生物学特性与A/H6N1完全一致。rA/H6N1能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性(MLD50>106.5EID50),病毒在小鼠体内的分布情况及各个脏器中的病毒滴度与A/H6N1保持一致; rA/H6N1-627能感染小鼠,引起小鼠体重下降,但不能引起所有106EID50组小鼠死亡,病毒能在小鼠的肺脏和脑部进行增殖。结论 实验结果表明,在H5N1禽流感中发挥重要作用的PB2-E627K位点并非A/H6N1流感病毒的毒力决定因子。A/H6N1流感病毒致病性的分子基础还有待继续研究,该反向遗传操作系统和点突变技术的建立为研究该亚型流感病毒致病机制、传播机制及病毒基因功能奠定了基础,同时也为A/H6N1亚型禽流感病毒新型疫苗的研制开辟了新途径。     

急诊脾切除加胃冠状静脉栓塞术治疗食道静脉破裂大出血15例体会

<正> 我院自1986年9月以来,采用急诊脾切除加胃冠状静脉栓塞术治疗门脉高压引起的食道静脉破裂大出血15例,取得良好疗效,报道如下。临床资料:本组男10例,女5例;年龄21～56岁;均为肝炎后肝硬变。肝功能Ⅰ级3例,Ⅱ级5例,Ⅲ级1例,另6例未及检查。9例既往有消化道出血史,8例术前行食道钡餐检查或/和胃镜检查证实有中度以上食道静脉曲张。15例术中测门脉压,切脾前最低为28cmH_2O,最高为35cmH_2O,切脾加胃冠状静脉栓塞后,8例下降4～10cmH_2O,平均下降7cmH_2O,4例升高6～8cmH_2O,3例变化不大。术后上腹部平片及     

狂犬病毒胶体金检测试纸的制备及初步应用

目的利用胶体金免疫层析技术建立一种快速、简便、特异的狂犬病毒检测方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金标记鼠抗狂犬病毒单克隆抗体,包被于结合释放垫处,分别利用纯化的兔抗狂犬病毒多克隆抗体和羊抗鼠IgG包被检测线及质控线,组装胶体金检测试纸。结果制备的狂犬病毒胶体金试纸对15个接种狂犬病毒乳鼠脑组织的检测均为阳性,与FAT结果一致;对犬瘟热病毒、犬细小病毒及犬冠状病毒细胞培养液及9个狂犬病毒阴性乳鼠脑处理液的检测均为阴性。结论用制备的狂犬病毒胶体金试纸检测狂犬病毒快速、简便、特异,具有良好的临床应用前景。     

裂谷热病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种快速、敏感、特异的RealtimePCR（实时荧光定量PCR）方法,用于裂谷热病毒（RVFV）的检测。方法根据裂符热病毒N蛋白基因的保守序列设计并合成一对引物及特异性TaqMan探针。通过条件优化,以10倍系列稀释重组质粒为标准品,进行Real-timePCR扩增,绘制标准曲线,并进行重复性、准确性、特异性及敏感性检测。结果建立的Real-timePCR方法检测裂谷热病毒所绘制标准曲线的相关系数大于0．99,灵敏度为1．0×10^1拷贝,高于常规PCR方法（1．0×10^3拷贝）;除裂谷热病毒外的其他7种对照烈性病病原体基因检测均呈阴性;批内重复和批问重复的变异系数均小于1％。结论建立的裂谷热病毒Real-timePCR检测方法敏感性和特异性较高,可用于裂谷执病毒感染懊涑诊眯斤殛流行病学谰杏．     

福州郊区登革热媒介防制措施与效果

目的：1999年夏秋季福州郊区发生登革热暴发流行,白纹伊蚊是当地传播媒介,为迅速控制疫情,在流行区实施以灭蚊为主的防制措施,方法：开展以健康教育,环境治理,清除无用积水和减少媒介滋生环境为主的爱国卫生运动,使用高效氟 氰菊酯和强力克敌等拟除虫菊酯类杀虫剂,以20mg/m2实行滞留喷洒和空间喷洒灭蚊,灭蚊前,后调查白纹伊蚊种群密度,以房屋指数,容器指数,布雷图指数和成蚊刺叮率评价效果,结果：灭蚊前白纹伊蚊房屋指数56．5,容器指数54．5,布雷图指数175．5;灭蚊后分别下降为2．4,11．5和4．0,下降率分别为95．8％,78．9％和97．8％,刺叮率从灭蚊前平均42．3只／人工小时下降为零,从10月12日后未再发现新病例,结果：防制制度得当有效,白纹伊蚊种群密度显著下降,登革热流行迅速得到控制。     

中学生青春期性问题现状调查及教育对策

中学生正处于由青春期向青年期过渡的阶段,随着性生理的发育和性心理的发展,中学生对性知识的渴求日益增多,而学校、家庭性健康教育的缺位,致使中学生产生了许多性方面的问题,严重影响了中学生的正常学习和生活。