在Hela细胞中验证miRNA-21对TLR4的调控

背景:mi RNA通过调节特异靶基因的表达,在疾病的发展及预后中起着重要作用。目的:探索mi RNA-21在宫颈癌Hela细胞中对TLR4基因的调控关系。方法:通过miR NA靶基因预测网站寻找可能与miR NA-21相互作用的靶基因,利用已构建的携带pri-mi RNA-21基因重组腺病毒载体,包装并大量扩增病毒感染Hela细胞,检测荧光蛋白的表达水平,提取感染48 h蛋白,通过Western印迹检测TLR4蛋白表达。从蛋白水平验证在Hela细胞中mi RNA-21与靶基因TLR4的靶向调控关系。结果与结论:100 MOI的重组腺病毒p Ad/pri-miR NA-21、p Ad/neg可以成功感染Hela细胞。生物信息学方法显示mi RNA-21和TLR4存在可能的结合位点。发现感染pA d/pri-miR NA-21组与对照组pA d/neg及空白组相比,TLR4蛋白的表达量明显降低。证实了mi RNA-21可以负调节靶基因TLR4的表达。     

血清CA199、CA724联合检测对良性胃病及胃癌诊断的临床意义

目的:探讨血清中癌相关糖抗原CA199、CA724联合检测在良性胃病与胃癌诊断中的价值。方法:采用电化学发光技术检测40例正常对照组、62例良性胃病、73例胃癌患者血清CA199、CA724的含量。结果:胃癌患者血清CA199、CA724的阳性检测率明显高于良性胃病及正常对照组,差异有显著性(P<0.01),两者联合检测敏感性均显著提高(P<0.05)。结论:血清CA199、CA724联合检测有助于提高胃癌诊断的敏感性。     

临床分离粪肠球菌和屎肠球菌菌株的检测及耐药性研究

目的分析粪肠球菌、屎肠球菌对抗菌药物的耐药性及敏感性,为合理使用抗菌药物提供证据。方法运用Phonex 100全自动微生物鉴定/药敏系统对临床分离的菌株进行鉴定和药敏试验。结果 103株肠球菌耐药率最高的药物依次为红霉素（94.2%）、环丙沙星（85.4%）、利福平（81.6%）,对万古霉素（94.2%）和替考拉宁（93.2%）的敏感性最高。发现万古霉素耐药的粪肠球菌和屎肠球菌各3株。粪肠球菌和屎肠球菌对青霉素的耐药率分别为22%和71.7%,对氨苄西林的耐药率分别为16.7%和86.8%。结论 肠球菌属总体耐药率较高,红霉素、环丙沙星、利福平对肠球菌的敏感率较低,已检测发现VRE,临床上应加强监测,并根据药敏结果、感染严重程度合理选择适当的抗菌药物。     

肝纤维化四项联合检测对肝纤维化早期诊断的临床意义

肝纤维化是肝硬化的前期改变,同时也是慢性肝病的重要病理改变,是在慢性肝损伤的发展过程中,由于致病因素的持续作用和机体免疫功能失调,以至肝细胞持续受损,纤维组织不断增生而达到肝纤维化阶段。肝纤维化的发展与肝病的进展及预后有密切关系,由于肝纤维化具有可逆性,如何将肝硬化在早期逆转,从而阻断肝硬化的形成,对保护肝脏功能具有重要意义。检测血清肝纤维化4项：     

临床产超广谱β-内酰胺酶菌的分离情况及耐药性分析

目的研究临床不同标本中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的检出情况及其耐药特点。方法采用全自动细菌鉴定/药敏分析仪结合双纸片确证法对我院2005—2006年微生物室从各类标本中分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌523株进行检测。结果大肠埃希菌产ESBLs的发生率为26.1%,肺炎克雷伯杆菌产ESBLs的发生率为23.1%,中段尿、痰、伤口分泌物3种标本中分离的大肠埃希菌、克雷伯杆菌产ESBLs的发生率间差异均无统计学意义(P>0.05);产ESBLs菌在ICU病房所占比例最大,其次为呼吸科病房,儿科病房所占比例最小;产ESBLs菌株对抗菌药物的耐药性较非产ESBLs菌株差异有统计学意义(P<0.05),且呈现多重耐药。目前我院产ESBLs细菌主要为大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌。结论产ESBLs菌在我院各个病房、不同标本均有发生,对抗菌药物的耐药性明显高于非产ESBLs菌,除亚胺培南外,产ESBLs菌对多种抗菌药物均出现不同程度的耐药性。     

Sjcb2基因原核表达载体的构建及表达

目的 探讨日本血吸虫（Schistosoma japonicum，Sj）中国大陆株（Chinese strain）组织蛋白酶B肽链内切酶基因（Cathepsin B endopeptidase）的原核表达载体pWR450-1的构建及表达情况。方法根据Genbank中Cathepsin B endopeptidase全序列（Genbank登录号为AY226984）设计特异性引物应用聚合酶链反应技术扩增基因全长，克隆入pUCm—T载体，酶切后亚克隆入原核表达载体pWR450-1并进行表达；利用SDS—PAGE及Western blotting观察日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶表达情况。结果成功构建了Sjcb2／pWR450-1原核表达重组质粒，该重组质粒在大肠杆菌中可经IPTG诱导表达分子量约为86kD的融合蛋白，Western blotting分析表明，该融合蛋白能被兔阳性血清所识别。结论 日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶可在原核表达载体pWR450-1中表达，为研究其功能打下了必要的基础。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床感染监测及耐药性分析

目的研究分析不同年度耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床感染情况及耐药性。方法收集2008年1月至2010年12月本院微生物室分离的金黄色葡萄球菌,采用Phoenix-100全自动细菌鉴定药敏系统进行药物敏感试验,经仪器判定苯唑西林耐药的菌株为MRSA。结果 3年共分离出金黄色葡萄球菌菌株1 048株,其中MRSA 793株,占金黄色葡萄球菌总数的75.7%,2008~2010年分别为63.3%、72.7%、81.5%。MRSA对多种药物耐药,但对万古霉素、利奈唑胺、甲氧苄氨嘧啶、奎奴普丁/达福普汀、替考拉宁、呋喃妥因有较好的敏感性,无万古霉素、利奈唑胺耐药菌株出现。结论近3年来北京航天总医院的MRSA的分离率逐步增高,应加强监测,并为临床合理使用抗菌药物提供必要的实验室依据,以利于医院MRSA感染的控制。     

日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样蛋白基因结构与功能分析

目的 利用生物信息学技术对已登录的日本血吸虫(Schistosoma japonicum，Sj)中国大陆株(chinese strain)新基因-ATP合酶脂结合蛋白样蛋白(ATP synthase lipid-binding protein-like protein)基因结构和功能进行分析。方法 使用NCBI，SAPS，TMHMM2．0，PsortⅡ，Protscale和Scanprosite等软件对新基因的结构和功能进行分析。结果 通过Internet在线分析和生物信息学软件分析，对新基因的结构和功能有了进一步的认识，日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样蛋白基因编码122个氨基酸，分子量为12．7kDa，等电点为9．41，为一跨膜蛋白，含有磷酸化位点和烷基化位点。结论 生物信息学技术有利于日本血吸虫新基因的结构和功能研究。     

Sjcb2 DNA疫苗的构建及其在真核细胞中的表达（英文）

目的 克隆日本血吸虫组织蛋白酶B基因，构建真核表达重组质粒，转染真核细胞，观察其表达情况。方法用PCR技术从已构建好的重组质粒pBCSK＋／Sjcb2中扩增出Sjcb2基因片段，重组入克隆载体pUCm-T。再将Sjcb2基因片段亚克隆入真核表达载体pcDNA3．1（＋）。进行PCR、双酶切和DNA序列鉴定后，运用电穿孔技术将重组体pcDNA3．1（＋）／Sjcb2转染HeLa细胞，间接免疫荧光技术观察目的基因的表达。结果成功扩增出Sjcb2基因片段并构建DNA疫苗；重组质粒在HeIJa细胞中获得表达。结论Sicb2基因能够在体外真核细胞中表达。