人型结核杆菌克隆DNA探针的制备及其应用的研究

用限制性内切酶ＰｓｔⅠ消化人型结核杆菌Ｈ３７ＲｖＤＮＡ,与质粒ｐＵＣ１９ ＤＮＡ连接后转化大肠杆菌,经同位素３２Ｐ标记的人型结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ全染色体ＤＮＡ探针筛选出６个阳性克隆（ＭＴ１￣６）,其中克隆ＤＮＡ片段ＭＴ２（４．２Ｋｂ）、ＭＴ４（３．５Ｋｂ）和ＭＴ５（３．０Ｋｂ）标记成探针,检测了２２种分支杆菌标准株和１５侏人型结核杆菌临床分离侏以及２种非分支杆菌,其杂交结果完全相同,与人型结核杆菌及     

基于社会接触网络的大规模人群天花传播并行仿真

天花生物恐怖是世界各国面临的重大潜在威胁.本文利用并行仿真的技术手段,研究天花在大规模城市人群中的传播规律并对环形接种和大规模疫苗接种这两种主要的天花疫苗接种策略进行有效性分析,结果表明环形接种措施能够有效控制天花疫情的扩散,在天花疫苗储备不足的情况下可以优先考虑采用该措施.     

神经痛大鼠痛行为与ω-芋螺毒素SO3的影响

目的:有研究显示ω-芋螺毒素SO3与SNX-111结构相似,探讨蛛网膜下腔注射ω-芋螺毒素SO3或SNX-111对慢性压迫性损伤后神经痛的大鼠痛行为的影响。方法:实验于2004-02/07在军事医学科学院生物工程研究所蛋白质工程室及实验动物中心完成。采用随机对照双盲法。制备右侧坐骨神经慢性挤压伤模型并行蛛网膜下腔置管成功的雄性SD大鼠90只,随机均分为9组。对照组经导管鞘内注射生理盐水20μL,其余8组动物分别经导管鞘内注射SO3或SNX-111300,600,900和1200ng。观察各组动物坐骨神经结扎前、给药前、给药后每隔1h热痛觉过敏及触觉异常的反应阈值。各毒素不同剂量给药后2h与给药前阈值比较采用配对t检验;两种毒素相应剂量间的比较采用t检验。结果:两种毒素均呈剂量依赖性提高坐骨神经慢性挤压伤大鼠热刺激痛及触诱发痛阈值。鞘内注射SO31200ng2h后热痛阈最大可能镇痛百分率达94%,触诱发痛阈值也由给药前的2.94g上升到9.20g。结论:蛛网膜下腔注射SO3可有效地治疗神经源性疼痛,其镇痛作用与剂量相关,镇痛强度与SNX-111相近。     

乙型肝炎病毒adw亚型基因组在大肠杆菌中的克隆

乙型肝炎是严重危害人类健康的一种疾病,其感染率相当高,尤其在亚洲及非洲地区某些国家更高。患者中有相当数量成了慢性患者,致使劳动力丧失,部分导致肝硬变、肝坏死和肝癌。乙型肝炎的病原是乙型肝炎病毒(HBV),存在于感染者的血浆或肝细胞中,在感染者的血浆中为42nm球状的Dane颗粒结构,HBV感染的免疫学标志有表面抗原(HBsAg)、“e”抗原(HBeAg)及其相应的抗体和抗核心抗原(HBcAg)的抗体。     

鼠疫耶尔森菌pgm位点及其侧翼序列遗传变异的比较分析

目的研究鼠疫耶尔森菌中国自然分离株pgm位点及其侧翼序列的变异,了解不同疫源地菌株间的毒力差异,为鼠疫防治提供帮助。方法比较分析现有4株菌的pgm位点及其侧翼序列的变异,采用PCR、等位基因特异性PCR扩增260株中国自然分离株和7株假结核耶尔森菌。结果除锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株外,其他菌株均缺失了YPl666的70～87bp之间的18bp碱基。1406bp处T的缺失仅存在于东方型菌株中。北天山东段型及西段A、B型,锡林郭勒高原型,青海田鼠型菌株的pgm位点下游都没有IS100插入;锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株的色素沉着区有1个IS285插入,在其下游3kb区域还有1个IS100插入。冈底斯山型和昆仑山A、B型菌株的pgm位点上游侧翼区与其他菌株不同。36株菌的pgm位点缺失,缺失的菌株主要集中在鄂尔多斯高原型,松辽平原B型,昆仑山A、B型4种生态型菌株中。结论北天山东段型及西段A、B型,锡林郭勒高原型,青海田鼠型菌株是中国鼠疫耶尔森菌中比较古老的菌株。锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株是一个独特的分支,建议归为第4个生物型——田鼠型。北天山东段型及西段A、B型,锡林郭勒高原型,青海田鼠型菌株的pgm位点,由于在其下游没有IS100插入,所以稳定、不易缺失。pgm位点及其侧翼序列的变异与菌株的生物型、自然疫源地和生态型都具有一定的相关性。     

5 L生物反应器中长期灌流培养CHO工程细胞生产rt-PA

目的 :利用 5L反应器培养CHO工程细胞生产重组组织型纤溶酶原激活剂 (recombinanttissueplasminogenactivator ,rt PA)。 方法 :在 5L搅拌式生物反应器中采用Cytopore1多孔微载体和无血清培基DF5S连续灌流培养CHO工程细胞株 4B3。结果 :持续培养达 10 3d ,活细胞密度和rt PA生产水平分别达到 6 .52× 10 6 个细胞 /ml和 1716 1U/ml。细胞培养上清经StreamlineSP离子交换层析和Lysine Sepharose 4B亲和层析两步纯化 ,获得纯度达到 98%的rt PA。SDS PAGE分析表明 ,整个培养过程所生产的rt PA具有较好的质量一致性。产品热原检测合格。结论 :实现高密度长期培养 4B3细胞 ,确定 5L培养工艺 ,为进一步扩大生产规模奠定了基础     

表达SARS冠状病毒受体人ACE2转基因小鼠的建立

目的:建立表达SARS冠状病毒的功能性受体人ACE2的转基因小鼠.方法:克隆人2型血管紧张素转换酶(hACE2)的cDNA,连入PCAGGS构建转基因表达载体,以显微注射的方法将5.6 kb的转基因片段引入小鼠的受精卵.采用PCR、Southern印迹、RT-PCR、Western印迹、免疫荧光染色的方法对转基因小鼠进行鉴定.结果与结论:获得了在小鼠肺组织中表达有SARS病毒功能性受体hACE2的两个转基因小鼠系,证明了SARS病毒的S蛋白能很好地和转基因小鼠肺组织中表达的hACE2受体结合,这将为SARS的研究提供一种良好的感染动物模型.     

鞘内注射ω-芋螺毒素S03对大鼠慢性神经痛的镇痛作用及对DRG细胞内Ca~(2+)含量的影响

目的ω-芋螺毒素SO3是通过分子生物学手段从海洋生物线纹芋螺中提取的一种多肽,为新型、特异性N型电压敏感性钙离子通道阻滞剂。观察鞘内注射(it)ω-芋螺毒素SO3对大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CC I模型)所致神经痛的镇痛作用,以及对背根神经节(DRG)细胞内Ca2+含量的影响。方法♂SD大鼠40只,随机均分为5组,即正常对照组(N组)、CC I后14 d组(C组)、CC I 14 d it生理盐水组(CN组)、CC I 14 d it SO3 600 ng组(CS 1组)和CC I 7 d后连续鞘内注射SO3 30 ng.h-1共7 d组(CS 7组)。观察各组动物热痛觉过敏及机械刺激痛觉异常的反应阈值,并测定DRG细胞内Ca2+含量。结果CC I 14 d时结扎侧与非结扎侧热及机械刺激痛阈值均下降,同时DRG细胞内Ca2+含量也升高。it SO3后,结扎侧及非结扎侧痛阈值均升高,而DRG细胞内Ca2+含量降低。结论it SO3对慢性神经痛有镇痛作用,同时可以抑制CC I引起的DRG细胞内Ca2+含量增加,提示DRG细胞N型Ca2+电流在此伤害性信息传递中起作用。     

吖啶酯发光法测定组织型纤溶酶原激活剂活性的研究

吖啶酯发光法测定组织型纤溶酶原激活剂活性的研究徐秀英刘农乐陈琳王珏欧阳应斌刘士辉蒋滋慧黄培堂血栓疾病为危害人们生命安全的主要疾病之一，在几种研究较多的纤溶药物中，组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）由于其纤溶作用的特异性而倍受医学界的青睐。机体的许多组织...