应用PCR技术获得人免疫球蛋白重链基因的扩增

人单克隆抗体在人体内应用的特点是,除无鼠源性单抗作为异种蛋白引起的过敏反应所需剂量低外;更重要的是,人单杭可能识别鼠单抗所不能识别的抗原决定簇。但由     

上皮细胞生长因子和山莨菪碱在糖尿病足坏疽治疗中的应用实验

上皮生长因子(EGF)能促进外胚层和内胚层细胞生长。据此,笔者选择5例糖尿病足坏疽患者,3例用EGF,第1次换药时可见溃疡边缘有新皮肤生长,连续用12次治愈。对照组2例,1例用山莨菪碱(654-2)12次,未见皮肤生长;1例用抗生素和生理盐水20次,亦未见皮肤生长。改用EGF,10—16次创面愈合。证明EGF的促皮肤生长作用明显优于654-2。将EGF和654-2用于小鼠成纤维细胞体外培养,发现EGF可使     

抗人卵巢癌单域噬菌体抗体的表达

目的：制备抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３Ｂ２单域（重链可变区，ＶＨ）抗体，以用于卵巢癌放射免疫显像和导向治疗。方法：将已分离的ＶＨ基因克隆入噬菌粒表达载体ｐＦＵＷ８０中，将重组子转化琥珀突变抑制菌株ＸＬ１ＢＬｕｅ，经辅助噬菌体Ｍ１３Ｋ０７援救后包装成噬菌体颗粒，表达产物通过ＥＬＩＳＡ测定活性。结果：ＶＨ基因克隆入噬菌粒ｐＦＵＷ８０，双酶切鉴定见预期大小片段，表明克隆成功。表达产物经ＥＬＩＳＡ测定，待测值高出阴性对照２．５倍。结论：该抗人卵巢癌小分子单域抗体具有与相应卵巢癌抗原发生特异结合的能力，有望用于卵巢癌放射免疫显像和导向治疗。     

抗乙型脑炎病毒人-鼠嵌合抗体表达的研究

从分泌抗乙型脑炎病毒中和抗体的杂交瘤细胞株51-8的基因文库中;筛选和鉴别出功能性重链和轻链可变区基因。将重链可变     

卵巢癌抗独特型抗体6B11scFv和人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白的构建和表达

目的构建和表达模拟人卵巢癌抗原的抗独特型单链抗体６Ｂ１１ｓｃＦｖ和人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭＣＳＦ）的融合蛋白,以提高抗独特型抗体的免疫原性,为进一步用于卵巢癌的免疫治疗提供基础。方法采用基因工程技术,用编码连接肽的ＤＮＡ连接６Ｂ１１ｓｃＦｖ和ｈＧＭＣＳＦｃＤＮＡ,并对大肠杆菌用温度进行诱导表达;采用蛋白免疫吸附印迹法,对表达的蛋白进行活性测定。结果表达的蛋白能分别与６Ｂ１１的初始抗体和小鼠抗ｈＧＭＣＳＦ单克隆抗体特异结合。结论表达的融合蛋白保留了６Ｂ１１ｓｃＦｖ和ｈＧＭＣＳＦ两种成分的活性,增强了６Ｂ１１ｓｃＦｖ的免疫原性。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区基因的克隆及序列分析

[目的]分离日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区 (VL)基因并测定其序列。 [方法 ]根据鼠免疫球蛋白轻链可变区基因FR1和FR4序列的保守性 ,化学合成用于体外扩增Ig轻链可变区基因的数对引物。以日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的杂交瘤细胞株基因组DNA为模板 ,扩增VL 基因 ,将其克隆入 pUC19载体 ,重组子用Sanger的双脱氧链终止法测定序列 ,将序列与GenBank中已发表的抗体序列比较。 [结果 ]VL 基因全长 318bp ,属鼠免疫球蛋白κ轻链第IV亚类 ,由种系基因V与Jκ4 重排而来。该VL 基因序列已被GenBank收录 (accessionNo AF2 0 6 72 0 )。 [结论 ]该VL 基因为日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区基因。     

抗人膀胱癌单链抗体在大肠杆菌中表达及复性研究

抗人膀胱癌单链抗体的构建及表达成功为高特异性诊断和治疗膀胱癌带来了新的途径.本研究对其进行表达和复性研究,为其进入中试和临床应用奠定了基础.具体过程和方法如下.采用本室克隆的抗人膀胱癌抗体重轻链可变区基因以及构建的适于单链抗体表达的谷胱甘肽流基转移酶(GST)融合表达载体pROH80,在大肠杆菌XL1-blue中经1mM IPTG,37℃诱导表达抗人膀胱癌单链抗体.SDS-PAGE和Westem印迹分析表明,融合型单链抗体以包涵体形式存在于超声沉淀中,其表达量可达细菌总蛋白量的30%,而空载体表达GST主要以可溶形式存在于超声上清中.降低诱导强度(0.1mM OPTG,28℃)表达并未影响包涵体形式表达.此外,更换其它培养基,如SB2和M9CAA,也未见明显效果.于是,我们对包涵体进行了一系列复性研究.     

抗膀胱癌免疫毒素的构建及表达

为了对膀胱癌进行早期的检测和治疗,运用免疫毒素寻找并有效杀死癌细胞不失为一个好方法.但是,早期的免疫毒素是通过化学偶联而成的,有以下缺点:1.易释放从而伤害了正常细胞.2 免疫毒素的免疫原性较强.且渗透性较差,导致毒素的活性不够强.为了克服上述缺点,我们利用DNA重组技术,将异源的SeFv基因与削减的毒素基因融合并克隆,在大肠杆菌中翻译出单链融合蛋白.这就是所谓的第三代免疫毒素,又称基因工程免疫毒素.     

基因工程抗体

以单克隆抗体作为载体,连接上毒素或同位素,用于肿瘤的免疫治疗和诊断,一直是一个很吸引人的手段,并且在动物实验和临床上都已证明是一个有效的手段。然而,单克隆抗体存在两个问题使它在应用上受到限制:1、由于人-人杂交瘤技术还存在很难克服的障碍,目前绝大多数单抗都来自