胰岛局部肾素一血管紧张素系统在糖尿病及胰岛移植中的作用

肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)产生的血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)除有收缩血管的功能外,还可刺激和抑制细胞分化,诱导凋亡,产生活性氧簇(reative oxygen species,ROS),调节激素释放,促炎症反应和促纤维化.近年来,人们研究发现机体多个组织器官如心脏、肾脏、肾上腺、脑及胰腺等独立存在局部的RAS.胰腺组织局部RAS不仅参与胰腺内、外分泌功能的调节,而且还与某些胰腺疾病如急性胰腺炎、糖尿病等有关.业已证实胰岛细胞亦存在局部RAS,并在抑制葡萄糖刺激下的胰岛素释放及损伤胰岛细胞结构和功能中起到了重要的作用.本文就胰岛RAS及其在2型糖尿病和胰岛移植后的可能作用作一综述.     

艾塞那肽对糖尿病自主神经病变患者氧化应激状态、血糖水平及心率变异性的影响

目的 探讨艾塞那肽对糖尿病自主神经病变（DAN）患者氧化应激、血糖及心率变异性的影响。方法 选取2015年4月—2017年4月在北京航天总医院治疗的DAN患者128例,根据患者最终选取的治疗方案分为观察组（n=67）和对照组（n=61）,对照组给予常规糖尿病治疗方案,观察组在对照组基础上给予sc艾塞那肽,2次/d,5 μg/次,总疗程12周。观察两组患者氧化应激、血糖及心率变异性情况。结果 观察组治疗后餐后2 h血糖（2h-PG）、糖化血红蛋白（HbA1c）和体质量指数（BMI）分别为（7.02±1.37）mmol/L、（6.71±1.82）%和（24.89±1.03）kg/m²,均显著低于对照组（P<0.05）。观察组治疗后丙二醛（MDA）、同型半胱氨酸（Hcy）分别为（2.51±0.91）mol/L和（12.03±3.11）μmmol/L,均显著低于对照组（P<0.05）,而超氧化物歧化酶（SOD）为（37.10±5.03）mU/L,显著高于对照组（P<0.05）。观察组治疗后总体标准差（SDNN）、差值均方的平方根（RMSSD）、爱丁堡指数（PNN50）、极频（VLF）、低频（LF）、高频（HF）分别为（50.25±8.10）ms、（26.02±5.55）ms、（12.01±1.32）%、（86.02±8.22）ms²、（71.14±7.05）ms²、（42.10±8.33）ms²,均显著高于对照组（P<0.05）,而LF/HF为（1.72±0.48）,显著低于对照组（P<0.05）。结论 艾塞那肽能有效控制DAN患者血糖,改善患者BMI和心率变异指标,减轻氧化应激反应。     

鲁抗集团2001年实施出口创汇1400万美元

鲁抗医药集团有限公司面对我国入世给医药行业带来的机遇和挑战,不断优化出口产品结构,降低和分散出口产品市场波动的风险,根据发展需要,积极开发亚、欧、美、非等地区的新客户,将国际出口业务提高到一个新水平。2001年该公司实现出口创汇1400万美元,同比增长了84.2%。鲁抗集团按照“强化出口,淡化进口,弱化代理”的总体方针,确立了强化出口的工作中心,利用现有的出口渠道和销售网络,在国际市场的运作上突出两个重点:一是抓好几个主要产品的出口,二是做好大客户的开发工作,多方寻求国外合作伙伴,努力通过各种渠道寻求开发产品的终端国际用户…     

血管紧张素Ⅱ对RIN-m细胞增殖和凋亡的影响及氯沙坦的保护作用

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对β细胞（RIN-m）增殖和凋亡的影响及氯沙坦的保护作用。方法 常规培养RIN-m细胞,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度AngⅡ(0、0.1、1、10、100nmol/L)在24、36及48h对RIN-m细胞增殖的影响;随后分为空白对照组,100nmol/LAngⅡ组和氯沙坦预处理组,各组干预48h后,MTT比色法检测细胞增殖活性,透射电镜观察细胞的形态学改变以及AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 ⑴AngⅡ浓度及时间依赖性显著抑制RIN-m细胞增殖（P<0.001）,以100nmol/LAngⅡ作用48h抑制的最为明显;⑵各组干预48h后,100nmol/LAngⅡ组RIN-m细胞增殖明显低于空白对照组（P<0.001）,氯沙坦预处理组细胞增殖与空白对照组差异无统计学意义,明显高于100nmol/LAngⅡ组（P<0.001）;⑶透射电镜观察RIN-m细胞,空白对照组和氯沙坦预处理组细胞形态大致正常,100nmol/LAngⅡ组细胞发生典型凋亡样改变;⑷100nmol/LAngⅡ组RIN-m细胞凋亡率高于空白对照组（P<0.001）,氯沙坦预处理组凋亡率与空白对照组差异无统计学意义（P>0.05）,明显低于100nmol/LAngⅡ组（P<0.001）。结论AngⅡ抑制β细胞增殖,诱导β细胞凋亡,氯沙坦预处理可以拮抗AngⅡ的效应,对β细胞起到保护作用。     

甲状腺素治疗对妊娠合并甲减患者甲状腺激素、血清叶酸、孕酮水平及母婴结局的影响

目的探讨甲状腺素治疗对妊娠合并亚临床甲减患者甲状腺激素、血清叶酸、孕酮水平及母婴结局的影响。方法选取我院2016年5月至2017年5月门诊收集的妊娠合并亚临床甲减患者160例,按照随机数字表法均分为妊娠亚临床甲减对照组和妊娠亚临床甲减观察组,每组80例。选取年龄匹配的80位健康妊娠者作为妊娠甲功正常组。对照组患者未给予甲状腺素治疗,观察组患者给予甲状腺素治疗。结果治疗前对照组与观察组FT3、FT4比较差异无统计学意义(P>0. 05);同组治疗前后相比,对照组与观察组患者FT3、FT4水平均显著升高;对照组与观察组患者TSH水平显著降低,观察组降低更明显,两组之间差异有统计学意义(P<0. 05);治疗后观察组FT3、FT4、TSH水平与正常组比较差异无统计学意义(P>0. 05)。治疗前对照组与观察组患者血清叶酸、孕酮均低于正常组,hs-CRP水平均高于正常组,但对照组与观察组比较差异无统计学意义(P>0. 05);同组治疗前后相比,对照组与观察组患者血清叶酸、孕酮水平显著升高,观察组明显高于对照组,对照组与观察组患者hs-CRP水平显著降低,观察组降低更明显,两组之间差异有统计学意义(P<0. 05);治疗后观察组血清叶酸、孕酮、hs-CRP水平与正常组比较差异无统计学意义(P>0. 05)。观察组患者妊娠高血压、胎儿宫内窘迫、妊娠肝内胆汁淤积症、并发症总发生率均低于对照组,差异有统计学意义(P<0. 05);观察组患者妊娠结果和胎儿情况优于对照组,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论甲状腺素可以改善妊娠合并亚临床甲减患者的甲状腺功能,改善血清叶酸、孕酮、hs-CRP水平,降低并发症发生率,改善妊娠结局,值得临床推广。     

软脂酸诱导胰岛微血管内皮细胞凋亡的研究

[摘要] 目的 观察软脂酸对胰岛内皮MS-1细胞株增殖率的影响,不同浓度软脂酸作用于MS-1细胞,观察不同时间细胞发生凋亡的情况,以研究游离脂肪酸对胰岛内皮细胞的作用,探讨微血管病变发生的可能机制。方法 体外培养胰岛内皮MS-1细胞株,设置对照组和试验组,分别用含0.1%BSA的DMEM培养液和含不同浓度软脂酸和0.1%BSA的DMEM培养液处理,1）MS-1细胞用不同培养液培养24小时,MTT法检测各组细胞增殖率;2）将软脂酸处理的MS-1细胞用Annecin V- FITC/PI双染色后荧光显微镜下观察细胞凋亡;3）各组细胞用不同浓度软脂酸作用12小时、24小时,Annexin V- FITC/PI双染色后,上流式细胞仪检测细胞凋亡率。数据行统计学分析。 结果 24小时培养后,与对照组细胞增殖率（1.000±0.202）相比,培养液软脂酸浓度升高MS-1细胞增殖率随之显著降低（0.5mM组0.763±0.154,P<0.01; 1.0mM组 0.433±0.142,P<0.01）;软脂酸作用于MS-1细胞后荧光显微镜下可见散落分布的表面显示绿色荧光的早期凋亡细胞,以及表面显示绿色荧光、胞核显示红色荧光的晚期凋亡细胞和坏死细胞;流式细胞仪分析显示,与对照组凋亡率（6.27%±2.12%）比较, 0.5mM、1.0mM软脂酸作用适当时间均可显著升高MS-1细胞凋亡率（1.0mM*12h组13.72%±1.60%, P<0.01; 0.5mM*24h组17.18%±1.48%,P<0.01;1.0mM*24h组27.08%±2.16%, P<0.01）。结论 高水平软脂酸可显著降低胰岛内皮细胞增殖率,并促进细胞发生凋亡,其凋亡率随着软脂酸浓度和作用时间而升高。     

人LINGO-1aa76-319蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

目的 表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的人LINGO-1胞外段(hLINGO-1_(aa76-319))融合蛋白,并制备兔源性抗hLINGO-1_(aa76-319)的多克隆抗体(pAb).方法 利用PCR从pCMV-SPORT6获得hLINGO-1_(aa76-319)编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pET30a(+),构建重组表达质粒pET30a(+)-hLINGO-1_(aa76-319);将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His-hLINGO-1_(aa76-319)融合蛋白,经Ni-NTA螯合树脂纯化,纯化蛋白免疫新两兰大白兔制备多克隆抗血清,Protein A Sepharose柱纯化获得多抗,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性.结果 成功构建了pET30a(+)-hLINGO-1_(aa76-319)原核表达载体,原核蛋白hLINGO-1_(aa76-319)以包涵体形式在大肠杆菌高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90% 以上的hLINGO-1_(aa76-319)蛋白,蛋白浓度为4600 mg/L,制备的抗hLINGO-1_(aa76-319)多抗效价高达1:1.6×106,Western blotting鉴定其具有良好的特异性.结论 获得高纯度hLINGO-1_(aa76-319)蛋白并成功制备特异性pAb,为进一步研究LINGO-1的生物学功能提供实验基础.

Abstract：

Objective To express and purify the fusion protein of extracellular domain of human Ig domain-containing, neurite outgrowth inhibitor (Nogo) receptor-interacting protein-1 (LINGO-1_(aa76-319)) in prokaryotic cells and prepare the rabbit anti-LINGO-1 polyclonal antibody (pAb). Methods The 732 bp DNA sequence of hLINGO-1_(aa76-319), was obtained from pCMV-SPORT6 by PCR and inserted into pET30a (+) plasmid to construct the prokaryotic expression plasmid pET30a(+) -hLINGO-1_(aa76-319) which was subsequently transformed into E.coli. The target fusion protein was expressed with IPTG induction and purified by Ni~(2+)-NTA affinity chromatography column. The antiserum against hLINGO-1_(aa76-319) was obtained from the rabbits immunized with hLINGO-1 _(aa76-319), and the titer of the pAb was determined using enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and its specificity identified using Western blotting. Results The prokaryotic expression plasmid pET30a (+)-hLINGO-1_(aa76-319) was constructed successfully. Efficient expression of the target fusion protein was achieved with IPTG induction at the optimal concentration of 0.4 mmol/L and culture temperature at 37 ℃ for 2.5 h. The hLINGO-1_(aa76-319) fusion protein was effectively expressed in E.coli as inclusion bodies, and the soluble protein was obtained through denaturation and refolding procedures, and the purified fusion protein showed a purity above 90%. The titer of the anti-hLINGO-1_(aa76-319) pAb obtained by immunizing the rabbits with the purified protein reached l:1.6×10~6, and Western blotting confirmed its good specificity. Conclusion The fusion protein hLINGO-1_(aa76-319) with high purity has been obtained and the anti-hLINGO-1_(aa76-319) pAb obtained shows a high titer and good specificity, which provide important experimental basis for further functional investigation of LINGO-1.     

血管紧张素Ⅱ经线粒体途径介导RIN-m细胞凋亡的实验研究

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和氯沙坦对胰岛β细胞的作用及相关分子机制.方法 常规培养大鼠胰岛素瘤RIN-m细胞,分为3组:空白对照组(RPMI 1640培养基常规培养)、AngⅡ组(终浓度100nmol/L AngⅡ处理)、氯沙坦预处理组(终浓度1μmol/L氯沙坦作用15min后再添加终浓度100nmol/L的AngⅡ).按照前述分组处理完毕后继续孵育48h.采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达,分光光度法检测Caspase 3和Caspase9活性.结果 AngⅡ组细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.001)和氯沙坦预处理组(P<0.001),后两组间比较无显著差异(P>0.05).与空白对照组及氯沙坦预处理组比较,AngⅡ组Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.001),Bax mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.001).氯沙坦预处理组Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达与空白对照组比较无显著差异(P>0.05).AngⅡ组Caspase 3和Caspase 9的活性显著高于空白对照组(P<0.05)及氯沙坦预处理组(P<0.05),后两组间比较无显著差异(P>0.05).结论 AngⅡ可能通过线粒体途径诱导胰岛β细胞凋亡,氯沙坦预处理可部分逆转AngⅡ的这种效应,从而对β细胞发挥保护作用.     

推进式离心管结合单密度梯度法快速纯化大鼠胰岛

目的 探索用简化的单一密度梯度法建立快速纯化大鼠胰岛细胞的方法.方法 用胶原酶P消化分离SD大鼠胰腺,采用自制的推进式离心管以及单一密度(1.090 g/cm3)的HCA-Ficoll-400密度梯度液来纯化大鼠胰岛细胞.通过DTZ染色,在倒置显微镜下计数胰岛细胞的数量和纯度,用胰岛素释放试验检测胰岛细胞的功能.结果 纯化后平均每条SD大鼠胰腺可获得(731±89)个胰岛细胞当量(IEQ),平均纯度为(73.2±9.4)%.平均活率为(92.8±2.4)%.纯化后的胰岛细胞对胰岛素释放刺激反应良好,高糖时胰岛素的释放量为低糖时的3.54±O.79倍(P＜o.001).结论 为各种胰岛细胞的实验研究建立了快速分离纯化胰岛细胞的方法,纯化的胰岛细胞功能良好.     

解偶联蛋白-2在胰腺β细胞中的作用

2型糖尿病是世界广泛流行的内分泌代谢性疾病之一,其主要临床表现是葡萄糖刺激胰岛素分泌(glueose stimulated insulin secretion,GSIS)障碍.线粒体通过偶联葡萄糖氧化产生ATP在GSIS中发挥了重要作用.