麦胚凝集素的分离纯化及其在亲和层析中的应用

目的 :将分离纯化麦胚凝集素 (WGA)的方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法进行改良 ,从而得到能够有效结合细胞膜受体的亲和层析柱。方法 :依次用去脂抽提、分级盐析、离子交换层析、甲壳素亲和层析的方法分离纯化WGA ;将制备的WGA与用溴化氰活化的琼脂糖 4B(Sepharose 4B)耦联固定。结果 :得到的纯化倍数为 15 8 5倍的WGA单体相对分子质量为 160 0 0 ,表观相对分子质量为 3 2 0 0 0 ,血凝活力为 8 3mg·L-1。WGA Sepharose4B可以与红细胞表面糖基特异性结合。结论 :改良的WGA分离纯化方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法简便、有效 ,可用于实验室中细胞膜受体的研究     

丝裂原蛋白激酶在糖尿病慢性血管并发症中的作用

目的 研究在高糖条件下人血管平滑肌细胞丝裂原蛋白激酶(MAPK)活性、c-fos表达与糖尿病慢性血管并发症的发病机制的关系.方法 新生儿脐动脉原代培养获得人血管平滑肌细胞.高糖为刺激因素,PD98059为MAPK特异性抑制剂,甘露醇作渗透压对照.同位素示踪法测定MAPK活性,免疫细胞化学方法检测c-fos表达.结果 高糖条件培养下人血管平滑肌细胞内MAPK活性升高(77358±1822)、与对照组(47830±1946)相比差异有统计学意义(P＜0.05).高糖条件培养下人血管平滑肌细胞c-fos表达增加(0.314±0.058),与对照组(0.245±0.049)相比差异有统计学意义(P＜0.05).PD98059可阻止高糖诱导的c-fos表达.结论 高糖可增加人血管平滑肌细胞MAPK活性及c-fos的表达,MAPK活性的增高与c-fos表达呈正相关.     

高糖诱导的MAPK激活对人肾小球系膜细胞的影响

目的：探讨高精对人肾小球系膜细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性的影响及MAPK在人肾小球系膜细胞的纤维结合蛋白(FN)分泌和c-fos表达中的作用。方法：采用人肾小球系膜细胞进行体外培养，高精作为刺激因素，PD98059作为MAPK特异性抑制剂．同位素示踪法测定MAPK活性．ELISA法测定培养上清中FN含量，免疫细胞化学方法检测c-fos的表达．结果：高糖可增加MAPK活性、促进FN分泌、增加c-fos的表达、抑制MAPK后，可阻止高糖诱导的FN分泌以及c-fos表达：结论：高糖可激活人肾小球系膜细胞内的MAPK，促进FN的分泌，c-fos的表达及导致糖尿病肾病的发生。     

高糖对肾小球系膜细胞c-fos表达与纤维结合蛋白分泌的影响

目的 :研究高糖对人肾小球系膜细胞纤维结合蛋白 (FN)分泌以及c fos表达的影响 ,探讨高糖对人肾小球系膜细胞的作用。方法 :采用人肾小球系膜细胞进行体外培养 ,高糖作为刺激因素 ,ELISA法测定培养上清中FN含量 ,免疫细胞化学方法检测c fos表达情况。结果 :细胞培养上清中FN含量 ,在对照组每孔中为 (88.9± 19.1)ng ,高糖组 (15 6.0± 40 .9)ng ,甘露醇组(15 6.0± 2 1.9)ng ,后两组显著高于对照组 (均P <0 .0 5 ) ;c fos的光密值 ,在对照组中为 0 .14± 0 .0 2 ,高糖组 0 .2 8± 0 .0 3 ,甘露醇组 0 .2 8± 0 .0 4,后两组显著高于对照组 (均P <0 .0 1)。结论 :高糖可增加人肾小球系膜细胞c fos的表达 ,促进FN的分泌。     

游离脂肪酸对人红细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性的影响

肥胖是2型糖尿病(T2DM)发病的危险因素之一^[1,2]。肥胖人群中高水平的血游离脂肪酸(FFA)可能是T2DM的重要致病因素^[3]。本研究从细胞信号传导入手，探讨FFA对红细胞膜胰岛素受体(InsR)酪氨酸蛋白激酶(PTK)活性的影响。     

高糖对人肾小球系膜细胞MAPK活性的影响

目的研究高糖对人肾小球系膜细胞丝裂原蛋白激酶(MAPK)活性的影响,探讨其在糖尿病肾病发病中的作用.方法采用人肾小球系膜细胞进行体外培养,按培养液中葡萄糖浓度分为对照组(含11mmol*L-1葡萄糖)、高糖组(含30mmol*L-1葡萄糖)、MAPK抑制剂组(含25μmol*L-1PD98059加30mmol*L-1葡萄糖)及甘露醇组(含20mmol*L-1甘露醇),以32P标记的髓磷脂碱性蛋白为底物,用同位素示踪技术测定培养细胞的MAPK活性.结果高糖组MAPK活性明显高于其它各组;加入MAPK抑制剂后,其活性明显降低,同时细胞的增殖受到抑制.结论高糖可增加人肾小球系膜细胞MAPK活性,且可能与渗透压引起的应激刺激相关.