流式细胞术在肾移植术后感染中的诊断价值

目的  探讨流式细胞术在肾移植术后感染中的诊断价值。方法  根据术后影像学和实验室检查结果,将51例首次肾移植受体分为细菌组33例、真菌组9例、BK病毒组9例;另选择肾移植术后稳定的受体28例作为稳定组。采用流式细胞术分析各组受体外周血淋巴细胞亚群比例和绝对计数。比较各组肾移植受体的肾功能、外周血淋巴细胞亚群的比例及绝对计数;采用受试者工作特征（ROC）曲线分析淋巴细胞亚群比例和绝对计数在肾移植术后感染性疾病中的诊断价值。结果  与稳定组相比,细菌组、真菌组和BK病毒组血清肌酐（Scr）水平和血尿素氮（BUN）水平均有不同程度升高,差异均有统计学意义（P=0.035、0.007、0.024;0.037、0.006、0.032）。与稳定组比较,细菌组和真菌组CD16⁺CD56⁺自然杀伤（NK）细胞比例均下降（P=0.036、0.015）;真菌组CD4⁺/CD8⁺T细胞比例明显下降（P=0.004）。与细菌组相比,真菌组和BK病毒组的CD3⁺CD8⁺T细胞比例均升高（P=0.013、0.008）,CD3⁺CD4⁺T细胞比例均降低（P=0.003、0.010）,CD4⁺/CD8⁺T细胞比例均明显下降（P=0.003、0.005）。与稳定组比较,细菌组、真菌组、BK病毒组CD3⁺T细胞数量、CD3⁺CD8⁺T细胞数量、CD16⁺CD56⁺NK细胞数量均明显降低（P=0.025、0.002、0.003;0.015、0.005、0.006;0.001、0.001、0.031）;真菌组和BK病毒组CD3⁺CD4⁺T细胞数量降低（P=0.001、0.003）;BK病毒组CD19⁺B细胞数量明显降低（P=0.019）。与细菌组比较,真菌组CD3⁺CD4⁺T细胞数量明显降低（P=0.023）。ROC曲线分析显示,CD3⁺CD4⁺T细胞和CD16⁺CD56⁺NK细胞数量诊断真菌感染的准确度较高,ROC曲线下面积分别为0.8492和0.8889;CD3⁺T细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞和CD19⁺B细胞数量诊断BK病毒感染的准确度较高,ROC曲线下面积分别为0.8472、0.8452和0.8115。结论  采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群可以评估患者机体免疫功能状态,绝对计数能够直观地判断免疫程度,两者结合对于肾移植受者感染性疾病的诊断和鉴别诊断具有指导意义。     

离体消化法分离原代肝星状细胞

目的:改进大鼠肝星状细胞的分离方法,提高肝星状细胞分离的纯度和活力.方法:本研究主要依据Weiskirchen的方法并加以改进,灌注后即将肝脏从原位分离,随之使用0.25%的链霉蛋白酶E和0.025%的胶原酶Ⅳ消化,经DNA酶Ⅰ分散,筛网过滤、离心,将细胞沉淀用18%Nycodenz密度梯度离心,获取肝星状细胞.台盼蓝染色鉴定细胞活率,Desmin免疫细胞化学染色法鉴定肝星状细胞纯度.结果:本方法所建立的离体消化分离肝星状细胞方法,每只大鼠肝约获取2.7×107个肝星状细胞,活率、纯度分别为99%、90%.该方法可有效减少细胞污染、提高细胞活力,值得广泛应用.结论:本文所建立的大鼠离体消化法分离肝星状细胞,方法简单可行,较大程度避免了细胞污染,提高了细胞的存活率和纯度.     

树突状细胞联合细胞因子诱导的肿瘤杀伤细胞生物学特性及其在肿瘤治疗中的研究进展

恶性肿瘤是导致死亡的重大疾病之一,而肿瘤的生物治疗因具有符合生理、高效和低毒的特点,已经成为手术、化疗、放疗外的第四种肿瘤治疗方式,有着巨大的治疗前景.免疫活性细胞的体内注射是肿瘤生物治疗的一个重要领域.其中,树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞是肿瘤生物治疗的两个主要组成部分,两者联合确保了一个高效和谐的免疫系统,已成为当今肿瘤治疗研究的热点之一.该文就DC-CIK细胞的生物学特性及其在肿瘤生物治疗中的研究进展进行综述.     

人脐带间充质干细胞生物学特性及其研究进展

背景：人脐带间充质干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,具有来源丰富,对供者无影响,易于采集和运输,无异体排斥反应,避免伦理争议等诸多优点。目的：综述人脐带间充质干细胞的生物学特性及其应用进展。方法：以＂人脐带间充质干细胞,生物学特征,基因分析,诱导分化,human umbilical cord mesenchymal stem cells（hUMSCs）,biocharacteristics,gene analysis,induce differentiation＂为关键词应用计算机检索CNKI数据库、万方数据库、PubMed数据库文章。结果与结论：人脐带间充质干细胞呈典型的成纤维状,其表达的表面标志抗原具有非单一性,高表达间质细胞标志、整合素受体,不表达造血系标志、协同刺激分子CD80、CD86和CD40、人白细胞抗原HLA-DR,HLA-G,HLA-DP,HLA-DQ、内皮标志CD31或CD33、CD14、CD56等。人脐带间充质干细胞与造血干细胞和胚胎干细胞类似,在体外可以分化为骨细胞、软骨细胞、肝细胞、心肌细胞等;在体内可以分化为多巴胺能神经元、骨骼肌细胞、内皮细胞、胰岛细胞等。但人脐带间充质干细胞的研究仍存在亟需解决的问题,如分离方法、培养条件的规范化,如何控制其生长和分化等。     

自体外周血造血干细胞移植治疗1型糖尿病的临床观察

目的 探讨自体外周血造血干细胞移植治疗1型糖尿病的有效性及安全性.方法 2009年11月至2010年8月于解放军第三○九医院细胞治疗科诊治的16例1型糖尿病患者经环磷酰胺+粒细胞集落刺激因子动员造血干细胞至外周血,血细胞分离机采集外周血造血干细胞并予以冻存;患者采用环磷酰胺+猪抗人淋巴细胞球蛋白方案预处理后,经静脉回输造血干细胞.观察所有患者移植前后胰岛素注射剂量、糖化血红蛋白(HbA1c)水平、C肽水平、血糖水平,同时记录治疗过程中的不良反应.结果 自体外周血造血干细胞移植后12例患者脱离胰岛素,脱离胰岛素时间在移植后3～20 d,中位时间为9 d.中位随访28周(8～44周).12例中最长已脱离胰岛素10个月余,无患者再重新依赖胰岛素.4例患者未脱离胰岛素,此4例患者移植前均C肽水平低且病程较长,但胰岛素用量均较移植前下降,所有患者胰岛功能较前明显改善.所有患者未出现骨髓抑制等严重不良反应.结论 自体外周血造血干细胞移植治疗1 型糖尿病,初步结果显示出一定的临床有效性及安全性,远期疗效有待进一步验证.

Abstract：

Objective To explore the efficacy and safety of autologous peripherial blood hematopoietic stem cell transplantation (APBHST) in patients with type 1 diabetes mellitus. Methods Hematopoietic stem cells were mobilized with cyclophosphamide and granulocyte colony stimulating factor for 16 patients with type 1 diabetes mellitus who admitted to our department during November 2009 to August 2010. And then stem cells were collected from peripheral blood by leukapheresis and cryopreservation. The cells were infused intravenously after conditioning with cyclophosphamide and antithymocyte globulin. To compare the daily dose of exogenous insulin requirements, the serum levels of hemoglobin A1c (HbA1c), C-peptide, islet cell function during the mixed meal tolerance test were measured before and at different times after APBHST. Blood glucose was monitored 7 times a day before and after APBHST. And the adverse effects were recorded during and after APBHST. Results The median follow-up was 28 weeks (range: 8-44 weeks). Twelve of 16 patients stayed free from insulin at 3-20 days post APBHST. And islet cell function greatly improved after APBHST. Four of 16 patients required exogenous insulin but the dosage decreased. And all 4 patients had a poor level of C-peptide before APBHSCT. There were no such severe adverse effects as myelosuppression. Conclusion Very encouraging results have been obtained in the patients treated with APBHST. There is definite therapeutic effects and safety in a short term. But further follow-up is necessary to confirm the duration of insulin independence and the mechanisms of action.     

基于免疫学展开多学科研究生培养模式的探索与实践

解放军总医院第八医学中心呼吸与危重症医学部研究所适临改革调整学科转型之际,依托北京市器官移植与免疫调节重点实验平台,构建以免疫学为核心的多学科研究生联合培养模式,从个体化研究生培养背景、教学模式、能力培养等方面进行分析,探索多个临床学科研究生共同培养的实践模式,以期培养具有系统和整体论的医学思维人才,更好地展开临床工作。     

人脐带间充质干细胞分离培养及表面标志检测

 目的　探讨体外分离培养人脐带源间充质干细胞（hUCMSC）的方法,并检测hUCMSC的表面标志。方法　分离脐带华通胶（Wharton's jelly）,将其剪碎后利用组织块贴壁法培养获得hUCMSC,生长至一定密度后进行传代,采用流式细胞术检测第3代hUCMSC表面标志。结果　由人脐带华通胶可方便、有效地获得hUCMSC,其体外生长形态类似成纤维细胞,并可稳定增殖和传代。hUCMSC表面标志CD29、CD44、CD105高表达,而表面标志CD45、CD34、HLA-DR、HLA-G、CD80、CD86不表达。结论　利用人脐带华通胶组织块培养可有效获得hUCMSC,为组织工程提供丰富的细胞来源。     

不同他克莫司血药浓度检测方法的对比分析

目的 分析化学发光微粒子免疫法和胶乳增强免疫抑制法检测他克莫司(Tacrolimus,Tac)全血药物浓度的结果.方法 用化学发光微粒子免疫法和胶乳增强免疫抑制法平行检测96例肾移植受者他克莫司全血药物浓度,对比检测结果差异性并进行相关和回归分析.结果 采用化学发光微粒子免疫法测得的Tac血药浓度(5.78±2.18)...     

肾移植免疫抑制剂研究进展

肾移植是终末期肾病的有效替代治疗方法,新型免疫抑制剂的应用极大提高了肾移植受者的存活率。新型免疫抑制剂的广泛应用促进了免疫抑制方案的改善和优化,术后急性排斥反应发生率不断降低和移植物短期存活率不断提高验证了免疫抑制剂发展的巨大成功。然而,其伴随的不良反应也逐渐显现。如何正确、高效、合理地应用免疫抑制剂是临床医师面临的新挑战。现从以T淋巴细胞为靶点的免疫抑制剂、以B淋巴细胞为靶点的免疫抑制剂、以补体为靶点的免疫抑制剂、以细胞因子为靶点的免疫抑制剂、以混合多克隆抗体为靶点的免疫抑制剂以及以多种细胞为靶点的免疫抑制剂的种类及机制等做一综述,从而为免疫抑制剂的选择应用提供理论基础。     

人脐带间充质干细胞生物学特性及其研究进展

背景:人脐带间充质干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,具有来源丰富,对供者无影响,易于采集和运输,无异体排斥反应,避免伦理争议等诸多优点.目的:综述人脐带间充质干细胞的生物学特性及其应用进展.方法:以"人脐带间充质干细胞,生物学特征,基因分析,诱导分化,human umbilical cord mesenchymal stem cells(hUMSCs),biocharacteristics,gene analysis,induce differentiation"为关键词应用计算机检索CNKI数据库、万方数据库、PubMed数据库文章.结果与结论:人脐带间充质干细胞呈典型的成纤维状,其表达的表面标志抗原具有非单一性,高表达间质细胞标志、整合素受体,不表达造血系标志、协同刺激分子CD80、CD86 和CD40、人白细胞抗原HLA-DR,HLA-G,HLA-DP,HLA-DQ、内皮标志CD31或CD33、CD14、CD56等.人脐带间充质干细胞与造血干细胞和胚胎干细胞类似,在体外可以分化为骨细胞、软骨细胞、肝细胞、心肌细胞等;在体内可以分化为多巴胺能神经元、骨骼肌细胞、内皮细胞、胰岛细胞等.但人脐带间充质干细胞的研究仍存在亟需解决的问题,如分离方法、培养条件的规范化,如何控制其生长和分化等.