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目的:探讨微小RNA-30a-5p(miR-30a-5p)启动子区DNA甲基化在肝损伤中的作用。方法:随机选取4周龄胱硫醚β-合成酶(CBS)基因正常(CBS+/+)小鼠(n=12)及单基因敲除(CBS+/-)小鼠(n=12),均给予高蛋氨酸饮食8周。HL-7702细胞体外常规培养,分为对照(control)组、同型半胱氨酸(Hcy)组和Hcy+5-氮杂胞苷(AZC)组。全自动生化分析仪检测小鼠血清Hcy、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;微板法测定肝细胞ALT和AST水平;小鼠肝脏石蜡切片行HE染色观察肝脏损伤情况;细胞活力染色检测肝细胞活力;RT-qPCR法检测小鼠肝脏组织和肝细胞中miR-30a-5p的表达;Pearson相关性分析肝脏miR-30a-5p表达与血清ALT和AST水平的相关性;巢式降落式甲基化特异性PCR (nMS-PCR)检测小鼠肝脏组织以及肝细胞中miR-30a-5p启动子区DNA甲基化水平的变化。结果:与CBS+/+对照组相比,CBS+/-组... 相似文献
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目的 探讨微小RNA(miR-488-3p)通过靶向调控RAS癌基因家族成员RAP1A在同型半胱氨酸介导肝细胞自噬中的作用。方法 体外常规培养人正常肝细胞(HL-7702),并给予100μmol/L Hcy干预24 h,采用Western blot检测肝细胞自噬相关蛋白LC3、p62和RAP1A的表达水平,qRT-PCR检测肝细胞中miR-488-3p和RAP1A的表达;转染miR-488-3p inhibitor和mimics后,qRT-PCR和Western blot分别检测miR-488-3p的转染效率及其对LC3和p62蛋白表达的影响;TargetScan预测miR-488-3p与RAP1A基因相关性,Western blot检测miR-488-3p下游潜在靶蛋白(RAP1A)的表达改变;Pearson相关系数对肝细胞中miR-488-3p表达水平与自噬相关蛋白水平进行相关性分析。结果 与Control组相比,Hcy组肝细胞自噬相关蛋白LC3、RAP1A和miR-488-3p的表达水平升高(P<0.01),而p62表达明显降低(P<0.01);同时,转染miR-48... 相似文献
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目的 探讨miRNA-143(miR-143)和DNMT3a在血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制.方法 分别用miR-143的前体和抑制物干预血管平滑肌细胞(VSMCs),MTT法检测VSMCs增殖情况,qRT-PCR法检测miR-143和DNMT3a的表达,Westem blot法检测DNMT3a的蛋白表达,巢式降落式特异性甲基化PCR法分析miR-143启动子区的甲基化状态,双荧光素酶报告基因检测系统分析荧光素酶活性.结果 miR-143的前体干预VSMCs后,细胞的增殖活性显著下降,DNMT3a mRNA和蛋白表达均降低,而miR-143的抑制物作用后细胞增殖活性明显增强,DNMT3a表达增加;转染miR-143前体后,荧光素酶活性减弱,而用miR-143抑制物作用细胞后,荧光素酶活性明显增强(P<0.01);干扰DNMT3a后,miR-143的表达增加,但miR-143启动子区甲基化程度降低.结论 miR-143和DNMT3a相互调控可能是VSMCs增殖的重要机制. 相似文献
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目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及其DNA甲基化在载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠肾损伤中的作用及意义。方法实验动物分为2组:(1)Apo E-/-组(n=10):雄性Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食;(2)对照组(n=10):雄性C57BL/6J鼠饲以高蛋氨酸饮食。喂养14周后,全自动生物化学分析仪测定小鼠血清肌酐和尿素氮水平;PAS染色及透射电子显微镜观察小鼠肾脏组织损伤情况;实时定量PCR及Western blot分别检测小鼠肾脏中MST1 mRNA和蛋白表达水平。巢式甲基化特异性PCR(n MS-PCR)检测小鼠肾脏MST1 DNA甲基化水平。结果与对照组比较,Apo E-/-组血清肌酐和尿素氮分别升高了1.1倍和1.6倍(P0.01);PAS染色和透射电镜结果显示,Apo E-/-组较对照组肾脏明显损伤;Apo E-/-小鼠肾脏MST1表达分别与血清肌酐和尿素氮水平呈正相关(R2=0.7571,P=0.0012;R2=0.7342,P=0.0015);n MS-PCR结果显示,Apo E-/-组肾脏中MST1 DNA甲基化水平较对照组显著降低(P0.01)。结论 MST1表达上调可能在Apo E-/-小鼠肾损伤中发挥重要作用,而MST1启动子区DNA低甲基化改变可能是MST1表达上调的重要机制。 相似文献
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目的研究枸杞多糖(LBP)对单核细胞源性泡沫细胞泡沫化与胆固醇酯流出的影响及内质网应激的作用机制。方法原代培养单核细胞源性泡沫细胞后,用50、100、200μg.mL-1 LBP孵育72 h,油红O染色法检测泡沫细胞的数量;用荧光分光光度法分析细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量;用酶联免疫吸附法检测细胞中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及内质网应激蛋白(Grp78,CHOP,Xbp-1)的含量。结果 LBP可减少泡沫细胞的形成和细胞内TC、FC、CE的含量,同时可降低细胞内ox-LDL与内质网应激蛋白的含量(P<0.05,P<0.01)。结论 LBP通过降低ox-LDL及内质网应激蛋白的含量引起泡沫细胞内胆固醇的含量下降从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。 相似文献
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目的 :探讨浸润性乳腺癌中肝配蛋白A型受体2(ephrin A receptor 2,EphA2)表达及其启动子区DNA低甲基化与细胞焦亡发生的相关性。方法 :应用免疫荧光技术和蛋白质印迹法检测42例乳腺癌患者正常乳腺组织、癌旁组织和癌组织中EphA2的表达情况;采用免疫荧光技术和蛋白质印迹法检验细胞焦亡相关蛋白核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)的表达水平;采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase 1和炎性细胞因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达水平;应用巢氏甲基化特异性PCR(nested methylation-specific PCR,nMS-PCR)检验EphA2基因启动子区DNA甲基化水平;采用蛋白质印迹法测验DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)和DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferase3a,DNMT3a)蛋白表达水平;应用P... 相似文献
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目的 探索miR-204在衰老心肌细胞缺氧后处理中的作用.方法 经D-半乳糖诱导心肌细胞衰老后,随机分为对照组(ONC组)、缺氧复氧组(OAR组)、后处理组(OIPO组).采用ELISA法检测培养基中cTn-Ι的含量;微板法检测LDH的含量;XTT法检测细胞活性;荧光定量PCR法检测miR-204的mRNA表达,并确定miR-204与cTn-Ι、LDH的相关性.结果 与ONC组相比,OAR、OIPO组cTn-Ι、LDH的含量均增加(P<0.05,P<0.01);与OAR组相比,OIPO组cTn-Ι、LDH的含量无显著性改变.与ONC组相比,OAR、OIPO组miR-204的表达均降低(P<0.01);相关性分析显示miR-204与cTn-Ι、LDH呈现负相关.结论 缺氧后处理对缺氧复氧所致的衰老心肌细胞损伤的保护作用减弱与miR-204有关. 相似文献
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背景:激素性股骨头坏死的发病机制尚不清楚,成骨细胞凋亡与其关系密切。目的:探讨长链非编码RNA H19(long Non-Coding RNA H19,lncRNA H19)在地塞米松促进成骨细胞凋亡中的作用。方法:培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,分为对照组(不处理)和地塞米松组(1μmol/L地塞米松处理24 h),采用Western blot检测各组细胞Bax、Bcl-2和细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2/ERK1/2)蛋白的表达,流式细胞术和细胞活力染色检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测lncRNAH19的表达。转染lncRNA H19阴性对照(ad-NC)和lncRNA H19过表达质粒(ad-lncRNA H19)并给予地塞米松干预24 h后,采用细胞活力染色、Western blot和流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡情况;使用MAPK-ERK通路抑制剂PD98059处理MC3T3-E1细胞24 h,Western blot检测各组细胞Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果与结论:(1)与对照组相比,地塞米松组MC3T3-E1细胞凋亡率升高,lncRNA H19相对... 相似文献
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目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)导致Apo E-/-小鼠肾脏损伤的作用机制,为HHcy所致肾脏疾病的预防和治疗提供理论和实验依据,为肾病患者的疾病监测提供新的指标。方法将5周龄雄性纯合子Apo E-/-小鼠随机分组:Apo E-/-对照组饲以普通饮食,Apo E-/-高蛋氨酸组饲以高蛋氨酸饮食,Apo E-/-干预组饲以加叶酸和维生素B12的高蛋氨酸饮食,5周龄SPF级C57BL/6J雄鼠饲以普通饮食作为正常对照组,喂养14周后,生化分析仪测定血清同型半胱氨酸(Hcy)、肌酐及尿素浓度,透射电镜和PAS染色检测小鼠肾脏损伤情况,荧光定量PCR检测肾脏基质金属蛋白酶9(MMP-9)和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)m RNA表达水平,并以免疫组织化学染色法分析肾脏MMP-9蛋白表达,ELISA检测TIMP-1蛋白表达。结果与正常对照组相比,Apo E-/-高蛋氨酸组血清Hcy、肌酐及尿素浓度分别升高了3.66倍、1.1倍和1.6倍(P0.01);透射电镜和PAS染色结果显示,Apo E-/-高蛋氨酸组较正常对照组肾脏损伤明显,荧光定量PCR结果显示MMP-9及TIMP-1 m RNA表达则分别升高了5.25倍和1.38倍(P0.01);免疫组织化学结果显示Apo E-/-高蛋氨酸组MMP-9表达较正常对照组明显升高(P0.01);ELISA结果显示Apo E-/-高蛋氨酸组TIMP-1蛋白表达比正常对照组明显升高(P0.01)。与Apo E-/-高蛋氨酸组相比,Apo E-/-干预组血清Hcy浓度下降,且肌酐和尿素浓度均降低(P0.01);透射电镜和PAS染色结果显示,Apo E-/-干预组肾脏损伤较Apo E-/-高蛋氨酸组减轻。血清Hcy浓度与其肌酐及尿素浓度呈正相关(r2=0.4344,P0.0001;r2=0.4478,P0.0001),与MMP-9/TIMP-1比值也呈正相关(r2=0.39309,P0.001),且小鼠肾脏MMP-9/TIMP-1比值与肌酐及尿素浓度也成正相关(r2=0.1464,P0.05;r2=0.3027,P0.01)。结论 HHcy可能是经MMP-9/TIMP-1比例上调致细胞外基质降解,继而导致肾脏损伤。 相似文献