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1.
目的:构建携带小鼠FoxP3基因的重组腺相关病毒,并检测其在NIH3T3细胞的表达情况。方法:将FoxP3通过内部核糖体进入位点(IRES)与报告基因增强型绿色荧光蛋白连接,构建同时含有目的基因和报告基因的重组腺相关病毒(rAAV)表达质粒,通过磷酸钙沉淀法共转染HEK293细胞,收获并通过肝素亲和层析法纯化病毒,并对病毒纯度和滴度进行鉴定。利用携带FoxP3基因的重组病毒体外感染小鼠NIH3T3细胞,体外观察感染效率和目的基因转录情况。结果:包装成功的rAAV/FoxP3经纯化后获得了高纯度的rAAV/FoxP3,实时定量PCR检测rAAV/FoxP3的病毒滴度达到5.0×1012vg/mL,体外感染NIH3T3细胞,流式细胞术测定感染效率可达92.88%,实时PCR测定细胞内存在高水平FoxP3mRNA。结论:获得携带FoxP3-IRES-EGFP的rAAV,并可有效感染NIH3T3细胞,为进一步研究FoxP3的生物学功能提供了有效工具。 相似文献
2.
人T-bet基因的克隆及序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA,并进行豁定和测序分析,为从转录水平研究Th1/Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法:采用RT-PCR方法,从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA;连接至pGEM-Teasy载体,导入大肠杆菌DH5α并选择阳性克隆;应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。结果:扩增得到的T-bet基因cDNA全长1670 bp,包括编码区1607 bp,编码530个氨摹酸残基,与Genbank中发表的序列完全一致。结论:获得了人T-bet基网的克隆,为进一步研究其生物学功能构建了基础平台,为寻找多种免疫性疾病的有效治疗提供新思路。 相似文献
3.
江苏省乙型肝炎病毒基因型分布与临床相关性 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:了解江苏省乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布及其临床相关性。方法:选择江苏省HBV-DNA阳性慢性HBV感染者215例,其中HBsAg携带者3例,急性乙型肝炎3例,慢性乙型肝炎166例(轻度80例、中度50例、重度36例)。肝硬化27例,原发型肝癌12例,重症肝炎4例,采用S区基因测序法检测HBV的基因型。结果:215例HBV-DNA阳性血清标本中,B基因型72例(33.5%),C基因型132例(61.4%),B+C基因犁11例(5.1%);未发现A、D、E、F、G、H型;C基因型肝癌+肝硬化+重症肝炎+慢性乙肝(中度+重度)显著高于B型与B+C型(P〈0.05),C基因型的病程明显较B基因型和B+C基因型长(F=17.615),γ-干扰素B基因型感染者的血清含量比C基因型和B+C基因型感染者的血清含量显著高(F=13.652),S2+S3+S4方面C基因型比B基因型和B+C基因型显著增多(P〈0.05),结论:江苏省存在HBV的B、C和B+C三种基因型;以C基因型为江苏省优势毒株;并且C基因型病程长,肝纤维化程度明显,严重的肝病以及原发性肝癌的患者中所占比例显著高于其他基因型。 相似文献
4.
患儿,女,5岁,因腹痛、呕吐6 d伴发热4 d入院。6 d前无明显诱因出现上腹部疼痛,呈阵发性发作,胀痛,无放射,伴呕吐,呕吐物为胃内容物,每次量多少不等,每日10次左右,非喷射性,呕吐后腹痛缓解,纳差。4 d前出现发热,最高体温在38℃左右,近3 d未排大便,无腹胀,未呕吐粪样物。3年前因类似发作,在当地医院诊断为“急性胃炎”,且消化道钡餐造影显示幽门狭窄,经抗炎治疗后症状缓解,但3年来时有腹痛,均按“急性胃炎”治疗。查体:T37·8℃,神志清楚,精神差,营养欠佳,体重15 kg,BP 98/60mmHg(1 mmHg=0·133 kPa),急性病容,无脱水貌,全身皮肤未见黄染,… 相似文献
5.
6.
正交试验法优选水飞蓟宾-HP—β-环糊精包合物的制备工艺 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:优选水飞蓟宾-HP-β-环糊精包合物制备工艺。方法:在比较不同制法的基础上,采用正交试验设计,以包合物含量为指标,考察主客分子质量比、研磨时间和温度等因素对水飞蓟宾-HP-β-环糊精包合物的影响。结果:研磨法制备,主客分子质量比20:1,水浴60℃,研磨120min,包合物收得率迭83.45%,包合物含量达7.2%,包合物中水飞蓟宾的溶解度是原来的27.75倍。结论:该工艺具有包合物收率、含量高的特点,且可显著地提高水飞蓟宾的溶解度,操作简便易行、适合工业生产。 相似文献
7.
8.
9.
近年来草果的研究概况 总被引:1,自引:1,他引:1
草果(Am omum tsao-ko Crevost etLem aire)为姜科豆蔻属多年生草本植物,全株有辛香味。草果干燥成熟的果实既是我国一种传统的中药材,具有温中、健胃、消食、顺气的功能,主治心腹疼痛、脘腹胀满、恶心呕吐、咳嗽痰多等,又是日常生活中必备的食用香料。近10年来对其化学成分,药理作用及临床应用,栽培技术等都进行了深入研究。现概述如下。1化学成分研究自20世纪70年代中期,国内开始对草果进行化学成分的研究。李世诚等[1],测定了草果精油成分(1.61%)并鉴定出了反-2-十一烯醛、柠檬醛、α-蒎烯、β-蒎烯、柠檬烯、1,8-桉油素、ρ-聚伞花烃… 相似文献
10.
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)侵犯新生儿外周血单个核细胞(PBMC)后,对新生儿免疫功能的影响,了解其免疫失败发生的机理.方法 聚合酶链反应法(PCR)检测67对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性孕妇及其新生儿血清和PBMC的HBV DNA.根据新生儿PBMC中HBV DNA分成阴性和阳性组,将新生儿的PBMC分别在植物血凝素(PHA)和纯化HBsAg刺激下进行体外细胞培养,检测培养上清液中干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-=4)的分泌含量.结果 (1)35例母亲PBMC HBV DNA阳性者其新生儿15例为阳性,母亲与患儿PBMC HBV DNA阳性,差异有显著统计学意义(P<0.01).(2)新生儿PBMC内HBV DNA阳性组与阴性组比较,纯化HBsAg刺激时,阳性组IFN-γ的分泌量较阴性组低(P<0.01),IL-4含量显示PBMC HBV DNA阳性组高于阴性组(P<0.05),PHA刺激时,两组IFN-γ、IL-4含量差异无统计学意义(P>0.05).结论 PBMC内的HBV DNA可能是HBV母婴垂直传播的一条重要途径;宫内新生儿PBMC感染HBV,IFN-γ特异性反应低下,而IL-4特异性反应增强,细胞调节失衡,可能是新生儿免疫失败和易于免疫耐受的一个重要原因. 相似文献