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目的建立环介导等温扩增(LAMP)体系用于检测唾液和胃液中的幽门螺旋杆菌(Hp)及基因分型。方法收集临床Hp阳性标本,应用荧光定量PCR进行分型检测,即分为Ⅰ型和Ⅱ型。分别根据Hp,HpⅠ型设计LAMP引物并优化反应条件,通过LAMP检测验证这3套引物的特异性,并通过检测稀释后模板验证引物的灵敏度,同时加入钙黄绿素使产物显色,使Hp分型检测可视化。用LAMP方法检测收集的临床标本,计算Hp阳性率,并与荧光定量PCR法相比较。结果建立的LAMP体系特异性良好,对Hp、HpⅠ和HpⅡ型检测的灵敏度均为102 IU/ml。利用钙黄绿素进行产物检测的效果和电泳结果相一致。对临床标本进行Hp分型检测,HpⅠ、HpⅡ型LAMP结果与荧光定量PCR法比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LAMP对Hp的检测与分型均具有较高的特异性和灵敏度,且操作简便,在基层医院具有良好的应用前景。 相似文献
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<正>军事训练伤目前已成为我军的常见病和多发病[1],并以软组织损伤、骨与关节损伤最常见。骨骼肌肉损伤(musculoskeletal injuries,MSIs)多发于腰、膝、踝部位,严重影响部队战斗力,并且带来巨额的经济负担[2]。MSIs是指急性外伤、过度使用、重复性应激引起的肌肉、骨骼、神经、韧带损伤,包括肌肉擦伤、拉伤、肌腱病变、筋膜炎、滑囊炎、韧带撕裂、关节扭伤、关节脱臼、软骨损伤和应力性骨折等[3]。目前我国对MSIs现况调查的研究较多,但具体防治措施的系统研究相对较少。笔者对我军官兵在军事训练期间骨骼肌肉损伤的发生情况、危险因素、防治措施等研究现状做一综述,以期降低军事训练伤的发生率,提升战斗力。 相似文献
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目的 构建pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,初步探讨胶原三股螺旋重复蛋白1基因(CTHRC1)与microRNA(简写为miR)-30b的关系。方法 设计特异性引物,通过PCR扩增合成含有CTHRC1 CDS+3′UTR区的序列,并克隆至pIRES2-EGFP真核表达载体,得到pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体。采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切电泳和测序法进行鉴定;通过脂质体转染法转染Huh7及HepG2细胞评价转染效率;将miR-30b mimic、control、pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒和pIRES2-EGFP质粒转染至293T细胞中,分别采用Western Blot和实时荧光定量PCR法检测转染48 h后CTHRC1蛋白的表达水平及miR-30b的表达水平,初步探讨CTHRC1基因与miR-30b的关系。两组间比较采用独立样本t检验。结果 采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,得到5300 bp和1100 bp两条片段,与预期结果一致,测序结果也显示序列与GeneBank公布序列完全一致,表明pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体构建成功。2 μg和4 μg的pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒转染Huh7及HepG2细胞,转染效率分别可达90%、89%和85%、83%。在293T细胞中,miR-30b组CTHRC1表达下降(P<0.05)。而过表达CTHRC1组中miR-30b的表达下降(P<0.05)。结论 成功构建了pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体;在293T细胞中,CTHRC1基因表达与miR-30b的表达水平相反。 相似文献
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目的探讨局部应用CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)联合OX40单抗方案对肝细胞癌的疗效,以及对远处同源肿瘤的治疗效果。方法在BALB/c雄性小鼠四肢腋窝皮下注射H22单细胞悬液,建立荷瘤模型,7 d后筛选出30只荷瘤体积相当的小鼠,随机分成模型对照组、CpG组、CpG+OX40组,每组10只,并在左下肢瘤内注射药物。选取10只同批正常小鼠作为正常对照组。计算荷瘤体积,ELISA法检测血清IL-12和IFNγ浓度,流式细胞术检测脾脏CD8+T淋巴细胞比例,比较3组小鼠治疗后的生存情况。计量资料多组间比较采用重复测量设计资料的方差分析和单因素方差分析,进一步两两组间比较采用LSD-t检验;采用log-rank检验分析3组小鼠(不包含正常组)生存率,并绘制生存曲线。结果给予治疗后,模型对照组荷瘤呈进行性增长,血清IL-12和IFNγ水平、脾脏CD8+T淋巴细胞比例较正常对照组均减低(P值均0. 05)。与模型对照组相比,CpG组和CpG+OX40组干预荷瘤体积均缩小(P值均0. 05); CpG+OX40组远处荷瘤体积比CpG组和模型对照组增长减慢(P值均0. 05),但CpG组远处荷瘤体积与模型对照组差异无统计学意义(P 0. 05)。与模型对照组相比,两实验组血清中IL-12和IFNγ水平及脾脏CD8+T淋巴细胞比例均升高(P值均0. 05),且CpG+OX40组高于CpG组(P值均0. 05)。CpG+OX40组小鼠生存率均高于模型对照组和CpG组(P值均0. 05),CpG组与模型对照组之间差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 OX40单抗联合CpG-ODN可使治疗处肝脏肿瘤缩小,并有效减缓远处肿瘤增长,延长小鼠生存时间。 相似文献
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