饮水型氟中毒动物模型建立及硬组织形态学改变的研究

目的建立慢性饮水型氟中毒动物模型并观察其硬组织形态学改变。方法 48只Wistar大鼠随机分成4组,建立氟中毒动物模型。染氟组分别饮用含氟化钠浓度为50、100、150 mg/L的自来水,对照组饮用常规自来水。8周后取大鼠切牙及股骨,通过组织HE染色方法观察各组大鼠切牙成釉细胞和大鼠骨组织形态学改变,采用氟离子选择电极测定各组大鼠血氟、牙氟及骨氟浓度。结果实验组大鼠切牙出现不同的氟牙症表现。各染氟组大鼠血氟(F=11.234,P<0.05),牙氟(F=275.148,P<0.05),骨氟(F=217.337,P<0.05)含量显著高于对照组,且随浓度增加而增加,各组间均具有显著差异。HE染色发现实验组大鼠切牙成釉细胞排列不规则呈多层,高柱状细胞结构变矮或消失,少量细胞发生扭曲,且随氟浓度增加以上病理学改变加重。大鼠股骨HE染色发现实验组骨组织出现骨小梁增多,排列致密等骨硬化性表现,骨骺板增厚,增殖层软骨细胞排列紊乱,随浓度的增加以上病理学改变加重。结论长时间饮用高浓度含氟水可引起慢性氟中毒,硬组织出现氟斑牙和氟骨症的病理学改变。     

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目的了解辽宁省沈阳市铁西区3岁儿童口腔健康行为和口腔健康状况,从而为制定相应的龋齿预防措施提供参考。方法通过临床检查与问卷调查相结合的方式,于2011年11月至2012年2月对随机抽取的沈阳市铁西区10所幼儿园共计473名3岁儿童进行龋病流行病学调查,并对结果进行分析。临床检查参照世界卫生组织口腔健康调查标准。结果本次共抽样调查3岁儿童473人,其中患龋者236人,占调查总人数49.9%。被调查儿童龋面均(DMFS)为3.53。最易患龋的牙面为上颌中切牙近中面。Logistic回归分析显示:儿童缩短使用奶瓶时间和家长协助儿童刷牙可有效降低牙齿患龋率。结论沈阳市铁西区3岁儿童患龋率较高,充填率低。建议加大该区口腔教育宣传,推广牙病防治适宜技术,减少儿童口腔疾病的发生。     

氟对大鼠切牙成釉细胞内质网伴侣分子表达的影响

目的：研究不同浓度氟化物对大鼠切牙成釉细胞的影响,探讨内质网应激在氟斑牙形成中的作用。方法：30只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。观察大鼠切牙成釉细胞的形态学和GRP78、XBP-1、CRT和caspase-12表达的改变,采用MetaMorph显微图像分析软件和SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果：随着饮水氟离子浓度的升高,切牙逐渐出现氟斑牙症状。免疫组化结果显示,CRT(F=11.72,P<0.05)、GRP78(F=27.42,P<0.05)、XBP-1(F=139.7,P<0.05)、caspase-12(F=43.91,P<0.05)表达随氟离子浓度的升高而升高,且各组间均具有显著性差异。结论：成釉细胞在一定浓度的氟化物作用下,其CRT、GRP78、XBP-1和caspase-12 均过表达,表明成釉细胞处于内质网应激状态,且caspase-12是导致细胞凋亡的重要途径。     

内质网应激分子在慢性氟中毒大鼠成釉细胞中的表达

目的 研究不同浓度的氟化物对大鼠成釉细胞内质网应激分子表达的作用,探讨氟牙症形成的机制.方法 选择30只Wistar大鼠,随机分成A、B、C3组,并分别饮用氟浓度为0、75、150mg/L的自来水,8周后处死动物,并制备下颌切牙切片,通过HE染色、免疫组化、透射电镜、TUNEL检测等实验方法,观察3组大鼠成釉细胞内质网应激分子的表达及细胞凋亡情况.结果 随着氟浓度的升高,内质网应激分子GRP78 A组为阳性表达,B、C组为强阳性表达（F=27.42,P＜0.05）;XBP-1 A组为弱阳性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=139.7,P＜0.05）;Caspase-12 A组为弱阳性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=43.91,P＜0.05）;CHOP A组为阴性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=19.61,P＜0.05）;TUNEL检测显示氟浓度为150mg/L组成釉细胞凋亡数量显著高于75mg/L组和自来水组（F=124.02,P＜0.05）.利用MetaMorph显微图像分析软件对结果进行分析,用spss13.0软件包进行统计处理.结论 大鼠饮用高浓度的氟化水可激活内质网应激分子,导致成釉细胞产生内质网应激,并最终诱导细胞发生凋亡.     

过量氟致骨相损伤的早期诊断指标分析

目的探讨过量氟致骨相损伤早期监测和诊断的参考指标。方法将48只Wistar大鼠随机分为四组各12只。染氟低、中、高剂量组分别饮用氟化钠浓度为50、100、150mg／L的自来水,对照组饮用普通自来水。8周后麻醉处死大鼠取切牙及股骨,HE染色观察切牙成釉细胞和骨组织形态学改变;放射免疫法测定血清骨钙素（OC）水平;生化法测定血清碱性磷酸酶（ALP）活性;氟离子选择电极法测定血氟浓度。结果各染毒组切牙成釉细胞排列不规则呈多层,高柱状细胞结构变矮或消失,少量细胞发生扭曲,随氟浓度增加以上病理学改变加重;骨组织出现骨小梁增多,排列致密等骨硬化性表现,骨骺板增厚,增殖层软骨细胞排列紊乱,随浓度增加以上病理学改变加重;血氟含量显著高于对照组（P〈0．05）,且随饮用水氯化钠浓度浓度增加而增加（F=11．234,P〈0．01）。中、高剂量组血清OC水平显著高于对照组（P〈0．01）,亦呈浓度依赖性（F=3．801,P〈0．05）。各染毒组ALP活性均呈上升趋势,呈浓度依赖性;但低、中剂量组与对照组比较无统计学差异;高剂量组明显高于低、中剂量组（F=5．759,P〈0．01）。结论血清氟、ALP和OC水平可作为氟致骨相损伤早期诊断的参考指标。     

过量氟对大鼠牙及骨代谢的影响

目的: 观察氟对大鼠牙及骨代谢的影响, 探讨氟斑牙的发病机制。方法: 48只Wistar大鼠随机分为4组, 每组12只。染氟组分别饮用含氟化钠浓度为50、100、150 mg/L的自来水, 对照组饮用常规自来水。8周后麻醉处死, 观察大鼠氟斑牙的发病情况。应用放射免疫法测定血清骨钙素(OC)、甲状旁腺素(PTH)、降钙素(CT)水平;氟离子选择电极法测定血氟及牙氟浓度, 生化方法测定大鼠血清钙含量。采用SPSS13.0软件包对氟斑牙检出率进行χ2检验, 单因素方差分析比较各指标组间差异。结果: 各染氟组大鼠血氟、牙氟含量显著高于对照组(P<0.05), 差异具有显著性, 而且各组氟含量随饮水氟浓度的增高而逐渐增高(F值分别为11.234、275.148, P<0.01)。染氟组大鼠血清钙含量显著低于对照组(P<0.05), 且各组血钙含量随饮水氟浓度的增高而逐渐降低(F=3.906, P<0.05)。中、高剂量组大鼠血清PTH、OC含量显著高于对照组, 差异具有显著性(P<0.01);各组含量随饮水氟浓度的增高而逐渐增高, 组间差异显著(F值分别为8.548、3.801, P<0.05)。低、中剂量组大鼠血清CT呈下降趋势, 但与对照组相比并无显著差异(P>0.05);而高氟剂量组CT比对照组显著下降(P<0.01)。各组血清CT含量的组间差异显著(F=5.121, P<0.05)。结论: 氟影响大鼠的牙及骨代谢, OC、PTH及CT在氟牙症发病中起着重要作用。     

过量氟诱导成釉细胞钙超载及细胞凋亡的实验研究

目的 研究过量氟对体外培养大鼠成釉细胞内钙超载及细胞凋亡的影响。方法 取大鼠成釉细胞系HAT-7细胞,分别加入不同浓度（0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol·L^-1）的氟化钠培养液,培养48 h后,采用Cell Counting Kit 8（CCK-8）试剂盒检测各组细胞的活性,流式细胞术分析氟对细胞凋亡的影响,激光扫描共聚焦显微镜、Western blot试验和实时荧光定量聚合酶链反应技术检测过量氟诱导大鼠成釉细胞内Ca²⁺浓度和钙网蛋白表达的变化。结果 氟化钠浓度高于1.6 mmol·L^-1时,可抑制成釉细胞的活性,成釉细胞内Ca²⁺浓度升高,钙网蛋白表达上调,细胞早期凋亡数量增加,并且随着浓度的增加,细胞凋亡的数量也随之增加。结论 过量氟可引起成釉细胞内钙超载,诱导成釉细胞凋亡。     

过量氟对成牙本质细胞内质网应激作用的动物实验研究

目的：观察不同浓度氟化物对大鼠切牙成牙本质内质网伴侣分子表达的影响,探讨氟对成牙本质细胞的损伤机制。方法：随机分组的30只大鼠分别饮用氟化钠浓度为0、75、150×10^6的自来水,建立慢性氟中毒模型,采用SP免疫组化法检测大鼠成牙本质细胞中Grp78,xBP-1和Caspase-12的表达。利用MetaMorph显微图像分析软件采集数据并使用spss13．0软件分析。结果：随氟化物浓度增加,成牙本质细胞GRP78、xBP-1、Caspase—12的表达强度增加,且各组问具有显著差异（P〈0．05）。结论：一定浓度的氟化物可以引起成牙本质细胞内质网应激,Grp78和xBP-1过表达,高强度的内质网应激会诱导成牙本质细胞通过活化Caspase-12导致成牙本质细胞凋亡。     

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目的观察不同质量浓度氟化物对大鼠股骨成骨细胞内质网伴侣分子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）及半胱天冬氨酸蛋白酶12（caspase-12）表达的影响,探讨内质网应激在氟骨症形成中的可能作用。方法 2012年6月在中国医科大学附属口腔医院中心实验室将48只Wistar大鼠随机分成4组,对照组（A组）饮用常规自来水,染氟组（B、C、D组）分别饮用含氟化钠质量浓度为50、100、150 mg/L的自来水,建立氟中毒动物模型。观察大鼠股骨成骨细胞形态学改变及内质网伴侣分子GRP78及caspase-12表达情况。采用SPSS13.0软件包和Meta Morph显微图像分析软件进行统计学分析。结果实验组大鼠切牙出现不同程度氟牙症表现,其骨组织免疫组化结果显示,GRP78、Caspase-12呈阳性表达,随着氟浓度增加,其阳性表达均增加,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论大鼠股骨成骨细胞在一定质量浓度氟化物作用下,GRP78与Caspase-12均出现过表达,表明在高浓度氟作用下,成骨细胞出现内质网应激,进而导致细胞凋亡。     

不同时期成釉细胞氟损伤程度差异的动物实验研究

目的：GRP78和BCL-2在氟中毒大鼠不同时期成釉细胞中的表达和分布,探索氟牙症发病机制。方法：选择20只Wistra大鼠,饲喂氟浓度为75mg F-/L的自来水,8周后处死,通过HE染色和免疫组化技术观察大鼠成釉细胞形态和GRP78和BCL-2在氟中毒大鼠不同时期成釉细胞中的表达。结果：GRP78在成釉细胞分泌前期和分泌期表达高于转换期和成熟期,BCL-2在分泌期和转换期表达最高,在分泌前期和成熟期表达下降,各组间具有显著统计学差异（P<0.05）.结论：分泌早期和分泌期成釉细胞对氟诱导的内质网更加敏感,而在分泌期和转换期其抗凋亡能力更强。