幽门螺杆菌ureB基因表达产物的反应原性

目的：克隆幽门螺杆菌ureB基因，并进行表达，验证表物的反应原性。方法：应用PCR技术从技术临床分离株中扩增出ureB基因，克隆入载体pGEM-7zf( ）进行测序，进一步转到友大肠杆菌表达载体pBV220进行诱导表达，以Western blot实验验证重组蛋白的反应原性。结果：测序后经同源性比较，证实扩增后得到的片断确为ureB基因，并原核表达出可被抗Hp抗体识别的非融合重组蛋白。结论：获得了有反应原性的重组ureB蛋白。     

幽门螺杆菌cagA蛋白的制备级复性和纯化

目的通过优化复性液的组成、pH值、稀释度等,建立幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(cytotoxin associated gene A,cagA)表达产物的制备级复性及纯化方法。方法以包涵体形式存在的cagA表达产物先用5mL/LTritonX-100进行初步纯化,使其纯度达到约90%;再用含8mol/L脲的变性剂溶解包涵体,用复性液[0.1mol/LTris-HCl、2mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)、0.1mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG)、8mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)及50mmol/L精氨酸(Arg),pH8.0]稀释复性后,用DEAE-HP阴离子交换色谱进行纯化。结果用稀释法复性及液相色谱法纯化,一次可得到100~140mg的cagA。ELISA检测其抗原活性为1∶16000;SDS-PAGE检测纯度为98%。结论用制备级复性、纯化制备的cagA,可作为抗原用于制备检测抗幽门螺杆菌抗体的检测芯片,效果良好,并已获得国家新药批文。     

胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的　建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白 A(Cag A)抗体的胶体金免疫层析法(GICA) .方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体颗粒 ,标记葡萄球菌 A蛋白 (SPA) ,将重组的 Cag A抗原划线固定于硝酸纤维素膜上 ,制成免疫层析检测试条 .血清中 Ig G与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动 ,与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条 .结果　用 GICA与 EL ISA试剂盒对比检测了 32 6份血清标本中抗 Cag A抗体 ,本方法的特异性为95 .8% ,敏感性为 97.3% ,两法符合率为 96 .6 % .结论　 GICA检测…     

胃粘膜组织中Hp的感染与癌基因ras及抑癌基因p53、p16的关系

胃粘膜组织中Ｈｐ的感染与癌基因ｒａｓ及抑癌基因ｐ５３、ｐ１６的关系张沥１阎小君２白西平１韩锋产２张玲霞１苏成芝２Ｓｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓｇａｓｔｒｉｃｍｕｃｏｓａ／ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ；ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ／ｅｄ...     

斑点金免疫渗滤试验快速检测抗Hp细胞毒素相关蛋白A抗体

目的建立快速检测抗幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白Ａ（ＣａｇＡ）的斑点金免疫渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）．方法将ＣａｇＡ抗原点于硝酸纤维素膜上，然后依次加入患者血清及用抗人ＩｇＧ抗体标记的胶体金颗粒，如血清中存在抗ＣａｇＡ的ＩｇＧ，在膜上便出现一个红色斑点．结果ＤＩＧＦＡ仅需几分种便可完成．当用ＤＩＧＦＡ及ＥＩＡ对１０８份血清进行检测时，两种方法之特异性及敏感性相当．当以聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测胃粘膜组织中ＨｐＣａｇＡ的结果作为参照时，ＤＩＧＦＡ的特异性及敏感性分别为９８％（５７／５８）和９４％（４５／４８）．结论ＤＩＧＦＡ特异性强，敏感度高，操作快速且简便，在ＣａｇＡ阳性Ｈｐ感染的检测方面有广泛应用前景     

用PCR产物的探针杂交显色法快速检测血清中HBV DNA

0引言PCR技术已广泛应用于血清HBVDNA的检测方面，但目前所普遍采用的以琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物的方法敏感度低，要求PCR循环的次数应足够多，且操作繁琐，不适宜于大量标本的检测．我们在降低常规PCR循环次数的基础上，通过对PCR产物的酶标探针杂交及酶促显色分析，建立了特异、敏感及快速检测血清HBVDNA的PCR方法．回材料和方法1．1主要仪器及试剂ThermolyneAmplitron11PCR循环仪（美国）；DG3022型酶联检测仪（华东电子管厂）；dNTPS（Pr。mega）；TaqDNA聚合酶（Promega）；亲和素（MW：66000，原平生物工程公司…     

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与Hp相关性胃疾病的关系

现已确认,幽门螺杆菌（Ｈｐ）是慢性萎缩性胃炎及消化性溃疡的主要致病因素之一,与胃癌的发生有密切关系。人群中Ｈｐ的感染率在５０％以上,其中６０％～８０％的Ｈｐ具有单拷贝的细胞毒素相关蛋白基因Ａ,产生细胞毒素相关蛋白Ａ（ＣａｇＡ）。研究表明,产生ＣａｇＡ...     

亚洲乙型肝炎病毒前C区突变检测的临床意义

１９８９年Ｂｒｕｎｅｔｔｏｅｔａｌ［１］和Ｃａｒｍａｎｅｔａｌ［２］先后报道抗Ｈｂｅ阳性的慢性肝炎患者中,发现了ＨＢＶ前Ｃ区突变株,即在前Ｃ区１８９６点ＴＧＧ转变为ＴＡＧ,产生终止码,阻止ＨＢｅＡｇ合成．后来在许多国家和地区都相继发现了相同的突变株．在我国也有许多关于前Ｃ区突变与慢性肝炎肝硬变有关的报道［６］．这些报道总体上说明１８９６点突变株在毒力上不但比野型株强,而且与野型株有相同的复制和感染能力．我们用双重ＰＣＲ方法对ＨＢＶ感染者血清中ＨＢＶＤＮＡ前Ｃ区１８９６点的突变率进行检测,研究其…