抗乙型流感病毒单克隆抗体的制备和分析

抗乙型流感病毒单克隆抗体的制备和分析韩洪彦张容惠张励力（解放军第２６２医院临床实验科，北京１０００８８）流感是人类还不能控制的世界性传染病。我国被认为是流感病毒流行和变异的发源地之一［１］，对人类危害较大的是甲型和乙型流感病毒。以往认为乙型流感病毒设...     

青年人群血清甲_3型流感抗体检测和流行株的抗原性分析

采集４５０例战士血清标本，分别用国家代表株甲３／济防／１５／９０（Ｈ３Ｎ２）和甲３／北京／３２／９２（Ｈ３Ｎ２）作血清血凝抑制抗体测定，青年对甲３型抗体阳性率为６０％～６７％，其ＧＭＴ为３４～４５。１９９４～１９９５年两年中在军营人群中分离到３株Ｈ３Ｎ２毒株流行株，分别应用国际、国家和地方代表株作抗原性分析，证明流行株与它们之间抗原性有明显差异。本文分离到的３株流行株均上送国家流感中心鉴定，证实为Ｈ３Ｎ２亚型毒株。     

APAAP免疫印迹技术对抗副流感病毒1，3型单克隆抗体识别抗原表位的研究

副流感病毒１，３型（ＰａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓｔｙｐｅ１，３：ＰＩＶ＿１．３）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）应用免疫印迹技术（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ）识别抗原表位特性。结果表明：ＰＩＶ＿１．３抗原经还原剂处理后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ５％～１５％梯度胶电泳，能分辨二十多条清晰的蛋白带。转印后采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶复合物（ＡＰＡＡＰ）染色，本底浅，呈玫瑰红色带，优于ＨＲＰ染色结果。ＰＩＶ＿１的５株ＭｃＡｂ：ＩＣ＿５、ＩＨ＿６、ＩＨ＿２、ＩＣ＿１０、３Ｄ＿５分别与６８ｋＤ～５０ｋＤ、６８ｋＤ、５８ｋＤ～２７ｋＤ、５５ｋＤ～５０ｋＤ、５０ｋＤ对应ＰＩＶ＿１的蛋白质抗原表位起反应。ＰＩＶ＿３的６株ＭｃＡｂ：２Ａ＿１０、５Ｇ＿３、２Ｄ＿１１、２Ｅ＿１０、２Ｂ＿１２、４Ｆ＿１２与７０ｋＤ、６８ｋＤ、６０ｋＤ～５０ｋＤ、５５ｋｐ～４０ｋＤ、５５ｋＤ、４０ｋＤ对应的蛋白质抗原表位特异结合，说明ＰＩＶ＿１．３的１１株ＭｃＡｂ同对应抗原表位点的结合分布较广，有利于对ＰＩＶ＿１．３抗原的快速、敏感、特异检测。     

一种快速检测甲型流感病毒的方法

目的 开发一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法（GICA）的试剂盒，以用于对甲型流感病毒的检测。方法以柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗甲型流感病毒内部抗原的单克隆抗体。硝酸纤维素膜上包被两种抗甲型流感病毒单克隆抗体的混合液，制成免疫层析试纸。待测样品中的甲型流感病毒首先与胶体金标记抗体结合，后移动至硝酸纤维素上与固定的单克隆抗体发生反应，形成肉眼可见的红色带。结果GICA试纸条与甲1型和甲3型流感病毒共16种毒株均能发生特异性反应，与乙型流感病毒、副流感病毒、腺病毒和呼吸道合胞病毒无交叉反应。用三种不同甲型流感病毒毒株的不同浓度标本与美国同类经过FDA批准的产品比较，灵敏度相同。结论GICA试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求，并具有简便快速、无需特殊仪器设备等优点，对甲型流感的诊断和流行病学调查具有十分重要的应用价值。     

2000年军队人群流感抗体水平分析

目的：监测军队人群流感抗体水平,获知易感人群的比例,了解流感毒株的变异趋势。方法 2000年春,在全军8个监测地区,采集711例军人血清,应用9种国内及国际流感病毒代表株以微量半加敏血凝抑制方法进行抗体检测。结果 军队人群中,甲3型流感病毒抗体阳性率78.04%-94.01%,抗体平均滴度（GMT）最高达82,易感人群占5.99%-21.96%。对4种不同甲1型毒株抗体水平之间存在很大差异,依次为83．34％、63．96％、48．71％、23．29％呈梯度下降,GMT：61、40、37、24。易感人群依次升高为16.66%、36．04％、51．29％、76．71％。对乙型流感的感染率分别为58．90％、47．95％,GMT：34、27。易感人群41.10%、52.05%。西藏地区人群对甲3型、B型流感染率比其他地区普遍偏低（P＜0．01;P＞0．01）,对近期的甲3型代表株A／沪防／1／98（H3N2）感染率为50％,GMT：25。对两个B型株感染率分别为20％、12％,GMT：21、10。结论 除西藏地区外,部队人群中对甲3亚型株抗体阳性率以达饱和水平。提示 甲3型流感可能在近几年内发生较大变异。甲1亚型毒株几乎每年都有变异。军队人群对A／京防／53／97抗体阳性率很低,因此该亚型有可能在军营中引起流行。乙型流感因易感人群占半数,仍存在局部暴发的可能。西藏地区流感病毒抗体水平普遍偏低,要引起高度的重视,应加强军队的预测预报工作。     

BALB/c与C3H杂交一代小鼠诱生腹水产生McAb的观察

在淋巴细胞杂交瘤技术中,单克隆抗体(McAb)的制备在采用腹腔接种法时,大多采用和骨髓瘤细胞同种系的小鼠进行腹腔注射杂交瘤细胞,由此引起的腹水每只小鼠可达3～5 ml,并含有大量的McAb。而应用杂交小鼠诱生腹水产生McAb的报道却很少。BALB/c纯系小鼠是此项技术中最常用的动物。此种小鼠毛色白,性情温顺,体质娇弱,抵抗力低。1992年初,北京实验动物中鼠痘病毒流行,致使BALB/c小鼠大批死亡,有的实验动物室甚至绝种,影响了研究工作的进行。我院饲养的BALB/c小鼠当时亦供不应求.C3H纯系小鼠为毛色油     

1997/1998北京青年人群中6株甲1型流感流行株(H_1N_1)分离及抗原性分析

１９９７年１０月～１９９８年３月，从北京青年中分离到６株Ｈ１Ｎ１流感亚型毒株，经国家流感中心鉴定确认。将６株中的５株与１９９４～１９９７年３株（Ｈ１Ｎ１）国家代表株作血凝抑制交叉试验，５株的抗原性明显不同于Ａ／桂防／１０／９４，抗原比均≥２。５株中的４株抗原性明显不同于Ａ／京防／２５／９６；５株中的２株抗原性明显不同于Ａ／京防／５３／９７。将６株Ｈ１Ｎ１流行株送日本ＷＨＯ流感协作中心作多株Ｈ１Ｎ１毒株抗原性初步分析，６株抗原性既不同于Ａ／日本山形／１２０／８６和Ａ／日本山形／３２／８９，也不同于国际代表株德国的Ａ／拜恩州／０７／９５和南非的Ａ／约翰内斯堡／８２／９６。表明Ｈ１Ｎ１流感亚型毒株自１９９４年以来抗原变异较大，需严密监测     

军队人群流感监测(1995～200O)

目的：建立“全军流感监测系统”,获得流感流行病学数据和病毒变异及流行趋势,实施流感预测预报,方法：按WHO规定的原理和方法进行：对流感流行株,抗原和基因以及血清抗体和病毒多原实行监测。结果：获军队流感病毒流行株40株,副流感Ⅱ型流行株2株,6000名战士血清流感抗体纵向监测表明;每年每名战士平均受流感病毒侵袭1．4次,流感抗体在6个月之内下降67％,流感抗体横向监测表明：甲1型流感抗体从1995年以来呈阶梯形下降,易感人群由15％上升至75％,甲3型流感抗体从1997年以来长期处于高水平,预示将会发生变异,1000余名战士鼻咽分泌物多病原检测结果表明：流感冒发流行期病毒总检出率为70％,一般流行季节约50％,抗原性变异和基因测序分析结果表明：甲1型流感株已发生明显变异,发现3株新流行株与标准株的同源性仅有92％和91％,新株丢失了130位氨基酸和304位糖化位点,对14840名战士调查表明：在流行季节45d内,流感发病率＞21％,缺勤约50万工作日,军营病毒暴发流行疫情可在6h作出.报告。结论：初步建立了军队人群流感监测系统,掌握了军队战士主要呼吸道病毒的发病率和易感率,为流感的预测和预报提供了科学依据。