shRNA沉默干扰HMGA2基因对胃癌细胞株MKN-45的增殖与凋亡的影响

目的:观察小分子RNA(shRNA)沉默后HMG-A2基因在胃癌细胞株MKN-45的表达,并探讨HMGA2基因对胃癌细胞的增殖与凋亡的影响.方法:构建针对人HMGA2基因的shRNA真核表达载体,瞬时转染人胃癌细胞株MKN-45.用细胞免疫组化的方法观察转染72h后HMGA2的蛋白表达水平,以MTT比色法、流式细胞术检测转染后MKN-45细胞的生长增殖、凋亡的情况.结果:转染HMGA2-shRNA组的蛋白表达强度(171.34±19.61)明显弱于scrambled组(143.48±19.04)和空白对照组(141.79±18.09,P<0.05),较之scrambled组(5.66%±0.63%)和空白对照组,HMGA2-shRNA组(39.32%±2.37%)能明显抑制细胞的增殖(P<0.05),HMGA2-shRNA组的凋亡率(39.67%±2.35%)与scrambled组(4.29%±1.33%)和空白对照组(5.05%±1.84%)相比明显增加(P<0.05).结论:靶向HMGA2基因的shRNA可以有效抑制人胃癌MKN-45细胞的生长,并促进细胞的凋亡,HMGA2可能是胃癌治疗的一个潜在靶点.     

HMGA2shRNA真核表达载体转染胃癌MKN45细胞株的沉默作用

目的:将HMGA2shRNA真核表达载体转染至胃癌细胞MKN45,检测其HMGA2mRNA及蛋白的表达.方法:实验分3组:空白组(未转染的胃癌细胞)、实验组(转染HMGA2shRNA组)、阴性对照组(转染错义序列组),RT-PCR和Western blot分别检测HMGA2在mRNA及蛋白水平的变化.结果:与空白组和阴性对照组相比,实验组HMGA2mRNA的表达明显下降,差异具有统计学意义(均P＜0.05);HMGA2蛋白表达的变化与基因的变化相一致,实验组的蛋白表达明显受抑制,差异具有统计学意义(均P＜ 0.05).结论:HMGA2的特异性shRNA表达载体抑制了HMGA2的表达,HMGA2shRNA转染有望用于胃癌的基因治疗,为进一步研究其更多功能打下基础.     

胃癌组织中mTOR的表达及其临床意义

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹检测30例胃癌组织及正常胃黏膜上皮组织中mTOR mRNA及蛋白的表达,并分析其表达与胃癌临床病理学特征的关系。结果 mTOR mRNA在胃癌组织中的阳性表达率和表达水平均显著高于正常胃黏膜上皮组织(P<0.05),且mTOR mRNA的表达随分化程度的降低而显著增高(P<0.05),有淋巴结转移者较无淋巴结转移者显著增高(P<0.05)。mTOR蛋白在胃癌组织中的阳性表达率及相对表达值均显著高于正常胃黏膜上皮组织(P<0.05),并且其在胃癌组织中的表达值随分化程度的降低而增高(P<0.05),有淋巴结转移者较无淋巴结转移者mTOR蛋白的表达值显著增高(P<0.05)。结论 mTOR的表达可能与胃癌的发生发展有关,其对判断胃癌的生物学行为具有一定的意义。