pcDNA3．0／PNP-CD和pcDNA3．0／PNP表达载体的克隆和表达

目的：构建新型PNP，Mep-dR自杀基因系统的融合和单基因表达载体。方法：利用DNA重组技术制备融合自杀基因PNP-CD．将其和PNP单基因分别插入真核表达载体pcDNA 3．0中，构建融合与单自杀基因表送载体pcDNA 3.0 PNP-CD和pcDNA 3．0 PNP;酶切、PCR及测序鉴定两重组体结果：成功构建了两个新型自杀基因载体并实现在HepG2肝癌细胞株中的表达。结论：两个新型自杀基因表达载体．尤其是I’Nt。CI)融合自杀基因载体．是肿瘤基因治疗中广谱、高效的治疗载体。     

pcDNA3.0/PNP-CD和pcDNA3.0/PNP表达载体的克隆和表达

目的 :构建新型PNP/Mep dR自杀基因系统的融合和单基因表达载体。方法 :利用DNA重组技术制备融合自杀基因PNP CD ,将其和PNP单基因分别插入真核表达载体pcDNA 3 0中 ,构建融合与单自杀基因表达载体pcDNA 3 0 /PNP CD和pcD NA 3 0 /PNP ;酶切、PCR及测序鉴定两重组体。结果 :成功构建了两个新型自杀基因载体并实现在HepG2肝癌细胞株中的表达。结论 :两个新型自杀基因表达载体 ,尤其是PNP CD融合自杀基因载体 ,是肿瘤基因治疗中广谱、高效的治疗载体。     

肝细胞癌中XIAP mRNA及蛋白表达的意义

目的:通过检测XIAP mRNA及蛋白在肝细胞癌中的表达程度,探讨XIAP在原发性肝细胞癌发生中的作用. 方法:应用RT-PCR技术检测正常肝细胞株L-02,肝癌细胞株SMMC7721,HepG2和30例肝癌及其相应癌旁组织中XIAP mRNA的水平,同时应用免疫组织化学方法检测了上述细胞株及组织中XIAP蛋白的表达. 结果:三株细胞株均有XIAP mRNA的表达,XIAP/β-actin 均值分别为L-02:0.418±0.045,SMMC7721:0.719±0.1369, HepG2:0.654±0.055.其中L-02细胞株的XIAP mRNA水平显著低于SMMC7721及HepG2(P<0.05),两株肝癌细胞株的XIAP mRNA表达无显著性差异(P>0.05).三株细胞亦均有XIAP蛋白的表达,其细胞爬片平均光度分别为0.158±0.016,0.291±0.022,0.238±0.011,三株细胞的XIAP蛋白水平存在显著性差异(P<0.05).肝癌组织XIAP mRNA表达较癌旁组织显著升高,XIAP/β-actin均值分别为:0.587±0.064,0.313±0.059(P<0.05).免疫组化染色显示:XIAP蛋白表达主要集中在肝细胞胞质中,其在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织,平均光度分别为: 0.276±0.054.0.095±0.014(P<0.05). 结论:XIAPmRNA及其蛋白在肝癌组织及肝癌细胞系中表达水平明显升高,提示他可能是促进肝细胞恶变的—个重要因素.     

人肝癌组织α-L-岩藻糖苷酶的提取和鉴定

目的:提取人肝癌组织的α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fuCosidase,AFU)经纯化和鉴定后,为制备特异性多克隆抗体提供纯化的抗原.方法:运用超滤和离子交换层析等方法提取、纯化人肝癌组织的AFU,并经SDS-PAGE检测蛋白纯度及相对分子质量.根据荧光底物4-甲基微型酮-α-L-岩藻糖苷(4-methylumbelliferyl-α-L-fucopyranoside,4-MU-fuCoside)和纯化的蛋白在特定条件下反应生成产物4-甲基微型酮(4-methylumbelliferone,4-MU)的量来检测酶活性.检测蛋白浓度用Bradford方法.结果:提纯并纯化的AFU经SDS-PAGE鉴定有一个亚单位Mr 55 000.经过一系列纯化步骤后,肝癌组织的AFU可得到74倍纯化,15%收率.结论:肝癌组织的AFU可通过离子交换层析法提取和纯化并可用于制备抗体.