2011年全国寄生虫病防治技术竞赛成绩分析报告:蠕虫检测能力分析

目的通过竞赛了解当前我国各级疾控机构寄生虫病防治专业人员的蠕虫检测能力,从而推动各级疾控机构的能力建设。方法2011年9月以省(区、市)为单位,每省选送各级疾控机构的在职专业技术人员4名(年龄<45周岁,县级不少于2名)。竞赛内容包括粪便标本改良加藤厚涂片制作(每参赛选手30 min内制作完成5张涂片;计满分为15分,9分为及格)和11种常见蠕虫卵镜检鉴别(每张标本片含1种或1种以上蠕虫卵;镜检10张,每张5 min;计满分为60分,36分为及格)。结果来自30个省(市、区)的119名参赛选手中,改良加藤厚涂片制片成绩,平均为11.4分,及格者111人,占93.3%;11种常见蠕虫卵镜检读片成绩,平均为22.0分,及格者20人,占16.8%。不同性别、年龄(≤30岁、31~40岁和>40岁)、专业技术职称(初级、中级和高级)、来源单位的级别(省级、市级和县级)的参赛人员制片和镜检成绩的差异无统计学意义(P>0.05)。来自有血吸虫病防治任务省份的参赛选手的制片(12.1±1.7)、镜检读片(32.1±11.5)成绩均好于没有血吸虫病防治任务的省份(11.1±1.8和18.1±10.5);西部地区参赛选手的镜检读片成绩(18.4±11.4)均低于东部(25.2±12.4)和中部(24.1±13.1)。结论我国寄生虫病防治机构的病原检测能力总体水平发展不均衡,仅部分地区检测能力较强,有待进一步的加强和提高。     

应用FTA/PCR检测粪便中隐孢子虫的实验研究

目的 建立用FTA/PCR检测粪便中隐孢子虫的技术,并与常用的商业化的粪便DNA抽提试剂盒进行比较.方法 选择经病原学检测已经确诊的隐孢子虫阳性和阴性粪便,分别采用FTA卡和商业化DNA抽提试剂盒抽提粪便样本中DNA,进行巢式PCR扩增,对PCR阳性产物进行测序并利用BLAST在NCBI上与GenBank数据库进行比对,做同源性分析,确定虫种.结果 应用商业化DNA抽提试剂盒抽提DNA,无论是否反复冻融破壁,2个阳性对照样本扩增出目的 片段,另3个阳性样本未扩增出特异性条带.样本纯化后应用FTA卡抽提DNA进行PCR检测,所有阳性粪样均扩增出830 bp左右的目的 片段,通过测序和比对,其中2个为贝氏隐孢子虫,1个为火鸡隐孢子虫.结论 应用FTA进行粪便样本中隐孢子虫DNA的抽提方法具有简单有效、快速灵敏、准确可靠等特点,可以应用于粪便中隐孢子虫的检测.     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原经两种免疫途径获得的鸡卵黄抗体IgY动态观察

目的对比两种免疫途径产生抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的特异性IgY抗体水平动态变化。方法7只新西兰兔感染日本血吸虫尾蚴(1500/只)42d后解剖收集虫卵,制备SEA。将SEA分别经皮下和静脉注射免疫健康海蓝蛋鸡(3只/组),首次和第2次免疫间隔2周,之后每次间隔4周,共免疫5次,50μg/(只·次)。取两组免疫前,以及首次免疫后2～18周生产的鸡蛋,用水稀释法粗提IgY,ELISA检测每2周IgY的动态变化。IgY纯化试剂盒(EGGstract IgY Purifiction System)纯化静脉组首次免疫后8～18周的IgY,紫外吸收法检测抗体浓度,琼脂糖双扩散法和ELISA检测IgY峰值水平的抗体效价,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析比较免疫前后抗体特异性。结果静脉组和皮下组分别在首次免疫后8和12周IgY抗体水平达高峰,A492值分别为1.28和0.78,静脉组IgY水平至18周仍维持较高水平,皮下组抗体水平达到峰值后逐渐下降。纯化后IgY浓度约为6.5～9.0mg/ml,琼脂糖双扩散法和ELISA测得静脉注射组峰值水平抗体效价分别为1∶16和1∶51200。经SDS-PAGE和Western blotting分析,纯化后的IgY在相对分子质量(Mr)25000和68000处各有一条清晰条带,且免疫后IgY可与SEA发生特异性反应。结论静脉注射法比皮下注射法能获得更高水平的鸡抗日本血吸虫SEA特异性IgY抗体,且纯化后的IgY抗体具有较好的特异性。     

华支睾吸虫病患者粪便虫卵核糖体DNA内转录间隔区序列分析

目的 通过PCR方法扩增华支睾吸虫病患者粪便虫卵核糖体DNA （ribosomal DNA,rDNA）内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列进行分析,探讨其用于华支睾吸虫感染检测的价值. 方法 提取2例华支睾吸虫患者粪便中的虫卵DNA作模板,以rDNA ITS基因片段为目的片段进行PCR扩增,对扩增片段进行测序分析. 结果 从2例患者粪便虫卵样本中均扩增出1 123 bp的条带,经序列比对确定患者粪便中的虫卵为华支睾吸虫卵.测序分析发现本研究的两个样本与中国黑龙江分离株（KF740425）相似性为100％. 结论 本研究从2例华支睾吸虫病患者粪便虫卵中成功扩增出rDNA ITS基因,为从分子生物学角度检测华支睾吸虫病提供了资料.     

《血吸虫病控制和消除》(GB 15976-2015)实施情况的跟踪评价北大核心CSCD

目的了解《血吸虫病控制和消除》(GB 15976-2015)(简称《标准》)的实施情况和效果及其实施过程中存在的问题,促进《标准》的实施。方法根据血吸虫病流行情况对全国流行省份进行分层,每层选取一个省的血防专业相关工作人员进行问卷调查、现场调研和访谈,搜集国家关于血吸虫病防治工作的相关政策性文件;对所获取资料用Epidata建立数据库,用SPSS 20.0进行统计分析,得到评价结果。结果本次调查共回收399份问卷,其中有效问卷372份,问卷有效率93.23%。男性217人(58.33%),女性155人(占41.67%),所有被调查者的平均年龄40.12岁。共调查183家单位,所有被调查者中知晓《标准》的人数占97.04%(361/372),不知晓占(11/372)2.69%。通过相关机构培训知晓《标准》的比例最高,为81.99%(305/372)。掌握情况上,对《标准》内容总的掌握率为67.95%,其中,省级单位血防人员掌握率为75.11%,市级单位为72.80%,县级单位为65.97%。工作中每次都使用该《标准》的占12.09%(45/372),经常使用占49.19%(183/372),偶尔使用占32.53%(121/372),几乎不用占6.18%(23/372);认为《标准》在达标考核认定、常规防治工作、教育培训中应用最广泛的分别占65.86%、71.77%和43.82%。有13.71%(51/372)的被调查者所在单位没有对《标准》的实施采取过相应措施,63.71%(237/372)的单位在《标准》实施后举办过宣传贯彻、培训等活动,平均每年0.91次;62.63%(233/372)的单位派人参加过其他机构组织举办的关于《标准》的宣贯与培训,平均每年1.06人次。被调查者喜欢的宣贯形式分别为专题讲座79.03%(294/372)、微信公众号49.19%(183/372);有66.94%(249/372)认为《标准》完全适用,29.84%(111/372)认为《标准》基本适用,但个别地方需要修订;72.85%(271/372)认为《标准》的可操作性非常好,23.92%(89/372)认为《标准》的可操作性一般;通过问卷调查、走访和现场调研共收集38条有效意见和建议,包含修订配套防治手册、加强培训和宣贯力度、创新宣贯培训方式等。《标准》在实施过程中与其他文件,规划等并无冲突,保持了很好的一致性。结论《标准》在我国血防工作中发挥了引领和指导作用,关于《标准》的宣传贯彻力度有待加强。     

国外寄生虫学发展简史

该文以一些历史事件和历史人物为主线索，结合学科发展共性及不同时期寄生虫学发展的特点，对国外寄生虫学的发展历史作回顾性综述。     

中国卫氏并殖吸虫分子鉴定和遗传进化的研究概况

卫氏并殖吸虫病是我国重要的食源性寄生虫病之一,其病原体通过蝲蛄、溪蟹传播,可寄生于人体及多种哺乳动物组织、脏器内,引起肺吸虫病。我国是重要的卫氏并殖吸虫分布国度,有25个省(市、自治区)有分布卫氏并殖吸虫的报告。在卫氏并殖吸虫分类地位的研究中,仅靠形态学技术很难全面揭示该虫种的分子多样性。近些年来,随着分子生物学技术的发展,采用各种分子方法对卫氏并殖吸虫进行分类和鉴定的技术展现出很大的优势。分子遗传技术的应用也为阐明卫氏并殖吸虫的生物学、流行病学和遗传学特性提供了有效的手段和方法。但是,这些分子方法的敏感性和特异性以及其检测时间和花费又有着明显的差异,需要根据不同的研究场合使用相应的方法。分子方法的应用能更好地揭示卫氏并殖吸虫的流行病学和进化的特性,并能为该虫引起的疾病提供更为有效的诊断方法和防控手段。因此,该文概述了我国用于卫氏并殖吸虫分子鉴定和遗传进化的分子手段和方法。     

中国寄生虫种质资源库的构建与展望

目的 通过对各种寄生虫种质资源的收集、整理、鉴定和保藏,构建中国寄生虫种质资源库。方法 根据各种寄生虫虫种资源的生物学特性,制定寄生虫虫种资源共性描述标准和各类寄生虫个性描述标准及技术规范,对动物、植物和人体寄生虫进行标准化分类整理、保藏,并进行数字化描述,建立统一规范的实物库和数据库。结果 建立了含有11个门23个纲1 115种/117 814件寄生虫种质资源实物库和数据库;构建了3个寄生虫种质资源活体保藏基地;实物保藏库波及全国15个地区,发现了11种新溪蟹种和1种线虫新种;构建了中国寄生虫种资源网(www.psic.net.cn)。结论 初步建立了中国寄生虫种质资源库。     

四个旋毛虫地理株肌幼虫虫体抗原和排泄—分泌抗原的免疫学分析

目的分析4个旋毛虫地理株肌幼虫的虫体抗原、排泄-分泌抗原的蛋白组成和免疫学特性。方法昆明小鼠16只,每只感染旋毛虫肌幼虫300条,45 d后人工消化法收集旋毛虫肌幼虫制备虫体抗原,幼虫体外培养获得排泄-分泌抗原。用聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)分析虫体抗原和排泄-分泌抗原的组分,并用感染小鼠血清和旋毛虫病、血吸虫病、华支睾吸虫病、棘球蚴虫病、裂头蚴病、鞭虫病、卫氏并殖吸虫病、囊尾蚴病、钩虫病患者血清与抗原进行免疫印迹反应,观察阳性反应抗原条带。结果经SDS-PAGE分析,4个旋毛虫地理株虫体可溶性抗原和排泄-分泌抗原均有8条主带,相对分子质量(M_r)分别为100000、66000、49000、45000、43000、30000、18000、12000和M_r 66000、53000、49000、43000、36000、34000、30000、16000。免疫印迹结果显示,旋毛虫肌幼虫虫体可溶性抗原与旋毛虫病患者和感染小鼠血清的反应条带以M_r 95000、72000、53 000、49 000、43 000为主,排泄-分泌抗原反应条带以M_r 53 000、49 000、43 000、40 000为主。结论各地理株不同抗原的组分和免疫学反应存在一定的差异,其中虫体可溶性抗原的M_r 95 000、72 000成分和排泄-分泌抗原的M_r 40 000成分是进一步研究的重点。     

人的行为对血吸虫病人家庭分布的影响

人的行为(生产、生活)与血吸虫病的发生和分布有密切关系。农村经济体制的改变又直接影响人的行为的变化。为探讨农村经济体制改变对血吸虫病人分布的影响,我们对云南省巍山县中和乡和其中的吉利古、石头地、阿查黑3个村的血吸虫病人分布进行了分析。