广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶AcCBL1和AcCBL2基因的克隆、表达及鉴定

目的克隆、表达广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶1 (AcCBL1)和AcCBL2基因,分析重组半胱氨酸蛋白酶rAcCBL1和rAcCBL2的免疫反应性。方法基于广州管圆线虫Ⅳ期幼虫的cDNA文库筛选获得AcCBL1和AcCBL2基因,构建pET-28a-AcCBL1和pET-28a-AcCBL2重组质粒,转入大肠埃希菌BL21 (DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达、镍柱纯化后,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分析重组蛋白表达情况。蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白对6×His标签单克隆抗体、感染广州管圆线虫的小鼠和患者血清的免疫反应性。结果AcCBL1和AcCBL2基因PCR扩增产物分别约为1 000、1 100 bp。SDS-PAGE结果显示, rAcCBL1为可溶表达蛋白,相对分子质量(M_r)约为37 800; rAcCBL2主要以包涵体形式存在,约为M_r 40 800。Western blotting结果显示, rAcCBL1和rAcCBL2能与6×His标签单克隆抗体、感染广州管圆线虫的小鼠和患者血清特异性结合。结论成功克隆和表达AcCBL1和AcCBL2基因,二者表达产物均具有良好的免疫反应性。