黄芩素对miR-183/Kif2a介导乳腺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨黄芩素对miR-183/Kif2a介导的乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的作用及可能机制。方法噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测黄芩素对乳腺癌细胞增殖活性的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测细胞中miR-183和Kif2a信使RNA的表达,在线靶基因预测软件预测miR-183和Kif2a的靶向关系。转染miR-183抑制剂和pcDNA 3.1-Kif2a,黄芩素处理细胞后,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡,蛋白质免疫印记技术(western blot,WB)检测细胞中G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、p21、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(C-Caspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(C-Caspase-9)蛋白表达。结果经黄芩素处理后的乳腺癌细胞增殖能力下降(P<0.05),细胞中miR-183水平升高(P<0.05),Kif2a信使RNA水平降低(P<0.05)。miR-183靶向结合Kif2a并负向调控Kif2a的表达(P<0.05)。miR-183抑制剂或pcDNA 3.1-Kif2a转染可以逆转黄芩素对乳腺癌增殖、凋亡以及C-Caspase-3、C-Caspase-9、Cyclin D1、p21蛋白表达的作用。结论黄芩素通过miR-183/Kif2a调控乳腺癌细胞增殖和凋亡。     

下调miR-421靶向Sirt3调控HepG2肝癌细胞生长和侵袭的机制研究

目的探讨下调miR-421靶向Sirt3调控肝癌细胞生长和侵袭的机制。方法 RT-PCR方法测定肝癌细胞和正常肝细胞中miR-421表达变化。在肝癌细胞中转染miR-421 inhibitor,MTT测定细胞增殖变化,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达变化。在线靶基因预测软件发现Sirt3可能是miR-421的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在肝癌细胞中共转染miR-421 inhibitor、Sirt3 siRNA,利用上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移能力和MMP-9、MMP-2蛋白表达水平。结果 miR-421在肝癌细胞中的表达水平高于正常肝细胞。miR-421 inhibitor转染后的肝癌细胞增殖能力下降,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达减少。Sirt3受到miR-421的靶向负调控作用。Sirt3 siRNA能够逆转miR-421 inhibitor对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和MMP-9、MMP-2表达的抑制作用。结论下调miR-421靶向Sirt3抑制HepG2肝癌细胞生长和侵袭。     

真核表达p27构建胃癌顺铂耐药细胞模型的研究

目的:构建p27真核表达载体并导入胃癌SGC-7901细胞获得稳定表达p27的稳定细胞株,以研究p27在胃癌SGC-7901细胞顺铂耐药中所发挥的功能。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增出p27编码区,并将其连接到pCDNA 3.0-Flag载体上,转染293T细胞后分别用定量PCR和Western blot检测其表达情况,并通过Western blot检测SGC-7901细胞过表达Flag-p27稳定细胞株是否构建成功。通过CCK-8药物敏感性实验检测p27在胃癌细胞顺铂耐药中所发挥的功能。结果:双酶切和测序结果表明,pCDNA 3.0-Flag-p27构建成功,并在293T中成功表达,胃癌SGC-7901细胞过表达Flag-p27细胞株建立成功,通过耐药曲线表明过表达p27可以引起SGC-7901细胞顺铂耐药。结论:成功构建了带Flag标签的p27真核表达载体,为进一步研究p27在胃癌耐药中的功能奠定了基础。     

促肝细胞再生磷酸酶-3在鼻腔鼻窦鳞癌中的表达及与预后的关系研究

目的研究促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)在鼻腔鼻窦鳞癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用回顾性研究,收集54例鼻腔鼻窦鳞癌患者(鼻腔鼻窦鳞癌组)、36例鼻息肉患者(鼻息肉组)及30例正常人(对照组)鼻腔黏膜组织标本。采用免疫组织化学染色法对其PRL-3蛋白表达阳性率进行检测,并用实时荧光定量PCR法对PRL-3 mRNA相对表达量进行检测,同时分析PRL-3与鼻腔鼻窦鳞癌患者临床病理特征的相关性。结果鼻腔鼻窦鳞癌组PRL-3蛋白表达阳性率较对照组、鼻息肉组明显升高(P 0. 05)。与对照组、鼻息肉组相比,PRL-3mRNA在鼻腔鼻窦鳞癌组中的表达明显上调(P 0. 05)。不同性别、年龄的鼻腔鼻窦鳞癌患者PRL-3蛋白表达阳性率的比较,并无显著差异(P 0. 05);低分化、病理分期为Ⅲ～Ⅳ期、伴有淋巴结转移的鼻腔鼻窦鳞癌患者PRL-3蛋白表达阳性率明显高于高分化、病理分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移者(P 0. 05)。结论 PRL-3高表达于鼻腔鼻窦鳞癌患者,且与肿瘤分化程度、病理分期及是否伴有淋巴结转移密切相关,提示其有望成为评估鼻腔鼻窦鳞癌患者预后的独立预测因子。     

化疗联合安罗替尼治疗晚期三阴性乳腺癌的疗效和安全性

目的:探讨化疗联合安罗替尼治疗晚期三阴性乳腺癌的疗效和安全性。方法:选取2018年6月至2018年12月我院肿瘤科收治的30例晚期乳腺癌患者为研究对象,根据入组标准和排除标准进行随机分组,对照组给予化疗联合安慰剂治疗6周期,实验组给予化疗联合安罗替尼胶囊（12 mg,qd）治疗6周期,比较两组的临床疗效和安全性。结果:实验组和对照组患者的ORR分别为66.7%和46.7%（P=0.043）,并且中位PFS分别为7.5月和3月（P=0.073）。常见不良反应为乏力、中性粒细胞减少症、高血压症、手足综合征、高甘油三酯血症。其中实验组III-IV级不良反应主要为中心粒细胞减少症（26.7%）和高血压症（13.3%）,调整剂量后患者耐受性好。结论:化疗联合安罗替尼治疗晚期三阴性乳腺癌可明显提高患者的客观缓解率,且安全性较好,值得临床推荐。