肝癌相关抗原SMP30慢病毒重组子的构建及其对DC成熟作用的观察

目的构建小鼠肝癌相关抗原SMP30基因的慢病毒重组子,经体外转染小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)后,检测SMP30慢病毒重组子对DC成熟的影响。方法运用基因重组技术,将小鼠SMP30基因连接到带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒表达载体Lentivirus中,将上述重组子感染小鼠DC并用荧光显微镜观察感染效果。用流式细胞仪检测感染前后的DC表面分子的差异,判断SMP30慢病毒重组子对DC成熟的影响。结果将该重组子转染DC后,在荧光倒置显微镜下可观察到被转染的DC有绿色荧光蛋白(GFP)高表达,SMP30慢病毒重组子滴度为4×108TU/mL。流式细胞仪检测表明转染后DC表面CD80的表达高于感染前对照组(P0.05),DC表面CD123表达高于CD11c(P0.05)。结论成功构建了表达小鼠SMP30的慢病毒重组子,并有效转染小鼠DC使其稳定表达SMP30基因,实验用到的DC主要是DC123型的DC,DC转染SMP30慢病毒重组子后表面CD80表达升高,表明SMP30慢病毒重组子能促进DC的成熟。     

人Cdc25C基因克隆及其原核表达载体的构建与表达

目的:构建人Cdc25C基因的克隆载体和原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达.方法:从人肝癌细胞株Bel-7404中提取总R N A,经RT-P C R法扩增人C d c25C c D N A后,将其正确插入克隆载体pMD18-T和表达载体pET-32a(+),并转化至BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS和Transetta(DE3)三种感受态大肠杆菌中,分别采用0.25 mmol/L IPTG和ArtMediaTM Protein Expression自动诱导表达培养基诱导表达,并对纯化的融合蛋白进行考马斯亮蓝染色和质谱分析鉴定.结果:成功扩增了Cdc25C基因,并获得p M D18-T-C d c25C克隆载体和p E T-32a(+)Cdc25C表达载体;重组质粒在BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS和Transetta(DE3)三种感受态大肠杆菌中均诱导表达出TRx-His-Cdc25C融合蛋白;考马斯亮蓝染色和蛋白质谱分析结果显示基因重组蛋白与目的蛋白相符.结论:获得肿瘤相关抗原Cdc25C重组蛋白,为后续研究奠定基础.