Applications of bio-techniques on treatment of cardiovascular diseases.

ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳＯＦＢＩＯ－ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳＯＮＴＲＥＡＴＭＥＮＴＯＦＣＡＲＤＩＯＶＡＳＣＵＬＡＲＤＩＳＥＡＳＥＳＴａｎｇＪｉａｎ汤健，ＺｈｏｕＡｉｒｕ周爱儒ａｎｄＣｈｅｎＧｕａｎｇｈｕｉ陈光慧ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕ...     

线粒体融合蛋白Mfn2对心肌细胞肥大的抑制作用

目的:探讨线粒体融合蛋8-2(mitofusin 2,Mfn2)在心肌细胞肥大时表达的变化,及其对心肌细胞肥大的作用.方法:原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞用苯肾上腺素(phenylephrine,PE)10^-5moL/L处理,诱导心肌细胞肥大模型.采用RT-PCR和Western blot方法检测Mfn2基因在肥大心肌细胞中的表达.培养的心肌细胞感染含有Mfn2基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad Mfn2)或对照腺病毒Ad GFP后,给予PE刺激诱导心肌细胞肥大,采用3H-亮氨酸掺人法等方法评价过表达Mfn2对心肌肥大的影响.为了便于显示和分析,本研究将对照组的数据设为1,其他各组数据均为与对照组相比得到的相对数.结果:在PE诱导引起的肥大的心肌细胞中,细胞表面积增加约1倍(P<0.01),与不加刺激的对照组相比,心房利钠因子(atrial natriuretic fact,ANF)表达量也增加了约1倍(P<0.01),而Mfn2的mRNA水平(P<0.01)和蛋白质水平(P<0.01)均明显下降,分别为对照组的50%左右.AdMfn2转染后可检测到心肌细胞中Mfn2的过表达,与对照组Ad GFP(1.72±0.12vs2.47±0.06,P<0.05)相比过表达Mfn2能明显抑制PE引起的心肌细胞蛋白质合成量增加(0.98±0.10vs2.47±0.06,P<0.01)以及心肌细胞面积增大(1.530±0.008vs0.830±0.009,P<0.01).结论:在PE诱导的心肌细胞肥大模型中,Mfn2的基因水平与Mfn2蛋白水平表达明显降低,过表达Mfn2能抑制PE所引起的新牛大鼠心肌细胞蛋白质合成增加和心肌细胞表面积的增大.因此,Mfn2可能是参与心肌细胞肥大过程中的一个重要分子.     

一个新的高血压病相关基因的克隆和表达

目的寻找和克隆新的高血压病相关基因，探讨高血压病的发病机制。方法应用差异显示筛选的方法，对正常（ＷＫＹ）大鼠和自发性高血压病大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞进行ＲＮＡｍａｐｐｉｎｇ分析，选择下调的ｃＤＮＡ进行克隆。结果获得一个新的ｃＤＮＡ，其长度为４１６０ｂｐ，可编码５５１个氨基酸，蛋白质分子量为６２６４４。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，这一基因不仅存在于血管平滑肌细胞中，而且也广泛分布在大鼠心、肾、脑、肺和肝组织中。这一基因在ＳＨＲ大鼠的心、肾、脑、肝中低表达，在ＷＫＹ大鼠高表达；血管紧张素ＩＩ、内皮素－１、ＩＬ－１等致血管平滑肌细胞增殖和高血压的因素可以抑制这一基因的表达，其作用可为相应的拮抗剂所阻断；心钠素、降钙素基因相关肽、肾上腺髓质降压素等抑制血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖和降低高血压的因素可以上调这一基因的表达。结论获得了一种新的与血管平滑肌细胞增殖或高血压相关的基因，它可能拮抗ＶＳＭＣ增殖，在高血压的发生中起重要作用。     

Cloning and expression of a novel partial cDNA related to hypertension.

ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌｐａｒｔｉａｌｃＤＮＡｒｅｌａｔｅｄｔｏｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎＣｈｅｎＫｕａｎｇＨｕｅｉｈ陈光慧，ＷａｎｇＦｕｑｉａｎｇ王富强，ＺｈａｎｇＪｉｈｕｉ张吉辉，ＸｉａｎｇＨｕａ向华，ＤｏｎｇＧａｎ...     

基因打靶进展

应用既往的基因打靶(gene targeting)策略不能产生核苷酸水平上的精确突变,并存在潜在的不利因素。本文介绍三种新策略,即打了就走策略、标记-交换策略和应用Cre-loxP重组系统策略。其中以应用Cre-loxP重组系统策略最有应用和发展前景。     

内抑素基因对小鼠动脉粥样硬化斑块发展的作用

目的观察内抑素基因对动脉粥样硬化斑块发展的作用。方法采用重组内抑素基因的真核表达载体，对不同周龄的ApoE基因敲除的动脉粥样硬化小鼠进行电脉冲介导的骨骼肌内抑素基因转移，共进行10次基因转移，以空载质粒作为对照。结果24周龄组处理前主动脉起始部狭窄率为16%±4%，经过20周处理后对照组平均狭窄率为56%±14%，治疗组为34%±8%，较对照组减轻了54%。36周龄组处理前平均狭窄率为30%±6%，20周处理后对照组为64%±12%，治疗组为49%±10%，较对照组减轻了44%。治疗组斑块内内皮细胞数和毛细血管出现率较对照组均减少，两组间血脂指标没有差异。结论骨骼肌介导的内抑素基因转移能够有效抑制动脉粥样硬化斑块的发展。     

神经管畸形的分子生物学研究进展

神经管畸形(NTDs)是由于胚胎神经管在发育过程中闭合不全所引起的出生缺陷，主要包括无脑、脊柱裂、脑脊膜膨出等，其发病率占所有出生缺陷的三分之一到四分之一。我国神经管畸形率为1、1～3．2‰。目前认为：神经管畸形是一种“多病因”疾病，是遗传因素和环境因素综合作用的结果。     

去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因与血管平滑肌细胞增殖(英文)

背景:线粒体融合素2基因作用于血管平滑肌细胞Ras蛋白,通过胞外信号调节蛋白激酶1/2通路抑制细胞增殖.线粒体融合素2基因氨基酸序列第442位丝氨酸为蛋白激酶A磷酸化位点,与其磷酸化状态密切相关,能参与其功能调控.目的:观察大鼠线粒体融合素2基因在去除蛋白激酶A磷酸化位点后对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其相关信号通路.方法:利用已构建的携带绿色荧光蛋白基因、线粒体融合素2基因和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因的3种重组腺病毒,感染大鼠主动脉血管平滑肌细胞,将其传代培养3～10代后以抽签法随机分为4组:①不加干预的对照组.②感染携带绿色荧光蛋白的对照组(Adv-GFP组).⑨感染携带线粒体融合素2基因的实验组(Adv-Mfn2组).④感染携带去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因的实验组(Adv-Mfn2-PKA(△)组).激光共聚焦显微镜观察完整的和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因在细胞中的定位.Westernblot检测p-ERK1/2表达水平及完整的和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因在血管平滑肌细胞中的表达.MTT法绘制细胞生长曲线.结果与结论:完整的和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因在血管平滑肌细胞中均表达蛋白特异性条带.两种基因表达产物都主要分布于线粒体外膜.与对照组和Adv-GFP组相比,Adv-Mfn2组吸光度值在第3,4,5,6天都显著降低(P＜0.01＝,Adv-Mfn2-PKA(△)组吸光度值无明显变化.与对照组和Adv-GFP组相比,Adv-Mfn2组p-ERK1/2表达水平显著降低(P＜0.01＝,Adv-Mfn2-PKA(△)组无明显变化.提示去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因定位于线粒体外膜,对血管平滑肌细胞的增殖无拮抗作用,对胞外信号调节蛋白激酶1/2通路无抑制作用.     

去除Mfn2基因PKA磷酸化位点对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究大鼠线粒体融合素基因2(Mfn2)在去除蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点后对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其相关的信号通路.方法:构建携带去除PKA磷酸化位点的Mfn2重组腺病毒[Adv-Mfn2-PKA(△)]和携带Mfn2的重组腺病毒(Adv-Mfn2)并感染VSMC.Western blot分析法Mfn2-PKA(△)和Mfn2蛋白的表达;激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位;荧光显微镜观察细胞形态变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法比较其对细胞增殖的影响;Western blot法分析磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达变化.结果:激光共聚焦显微镜示Mfn2-PKA(△)与Mfn2蛋白都主要分布于线粒体外膜;荧光显微镜示Mfn2组细胞数较少,而Mfn2-PKA(△)组与对照组相似;MTT示,Mfn2-PKA(△)抑制VSMC增殖作用较Mfn2显著减弱(P＜0.01),与对照组无显著差异;Western blot结果显示,Mfn2-PKA(△)较Mfn2组p-ERK1/2表达显著升高(P＜0.01),与对照组无明显差异.结论:Mfn2-PKA(△)与Mfn2蛋白一样都定位于线粒体外膜,但抑制VSMC增殖的作用消失,对ERK1/2信号通路无抑制作用.表明PKA磷酸化位点是调控Mfn2抗VSMC增殖的重要功能位点.