SARS冠状病毒S2基因原核表达及免疫学特性

目的研究严重急性呼吸道综合征（SARS）冠状病毒S2蛋白表达并对其免疫学特性。方法克隆SARS冠状病毒S2基因。并在大肠埃希菌中表达谷胱甘肽硫转移酶（GST-S2）融合蛋白。通过免疫印迹（Western blot）和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法鉴定表达GST—S2融合蛋白的活性。结果通过原核系统表达的GST-S2融合蛋白可与谷胱甘肽硫转移酶（GST）多克隆抗体结合，并在85千道尔顿（KD）处出现特异性结合条带。GST-S2蛋白能与SARS患者恢复期血清反应，而不与正常人血清反应。结论本项研究获得了SARS冠状病毒GST-82融合蛋白，它可与GST多克隆抗体特异性结合，并与SARS患者恢复期血清发生特异性反应。     

小鼠气性坏疽动物模型的建立

目的建立产气荚膜梭菌感染小鼠的后肢的气性坏疽动物模型,为早期诊断、了解气性坏疽的致病机理及治疗方法提供依据。方法小鼠随机分成4组,每组10只。三个实验组分别肌肉注射3.5×109、3.5×108和3.5×107cfu/ml浓度的产气荚膜梭菌(ATCC13124)菌液0.1ml,空白对照组肌肉注射生理盐水0.1ml,72h后观察小鼠感染情况,取伤口分泌物作革兰氏染色涂片,细菌血平板厌氧培养和荧光定量PCR方法定量检测。结果 3.5×109、3.5×108、3.5×107cfu/ml实验组和对照组在肌肉注射72h内的死亡率为90%、70%、10%和0%。各组平均存活时间依次为(20:43±11:12)h、(37:24±25:39)h、(68:36±10:45)h和(72:00±0:00)h,死亡小鼠出现了气性坏疽的症状,分泌物培养和镜检出产气荚膜梭菌;未死亡小鼠康复;空白对照组无任何症状。各组Ct值均值为21.21±2.69、28.45±2.74、32.49±2.87和0.00±0.00,组间P值均<0.05。结论成功建立了不同浓度的产气荚膜梭菌在不同时间段内感染小鼠的后肢气性坏疽的动物模型,为了解气性坏疽的致病机理及治疗方法奠定基础。     

SARS冠状病毒S2基因变异性分析

目的 测定SARS冠状病毒GD322株S2基因序列并对SARS-CoVS2基因进行系统进化树分析。方法用RT-PCR法从SARS-CoV GD322株基因组中扩增S2基因片段并克隆至pGEM—T载体,转化大肠杆菌DH5a株后测序。利用Lasergene、ClustalX、DNAman和Treeview等软件,将基因序列翻译成氨基酸序列后,与早、中、晚期各地暴发的SARS-CoVS2蛋白序列进行比对,构建系统进化树,并在Internet网数据库中对S2蛋白氨基酸序列进行T细胞抗原表位预测。结果随着SARS-CoV的传播流行,S2基因趋于稳定,晚期的SARS-CoVS2基因的同源性达到99．9％。T细胞抗原表位预测发现。SARS-CoVS2蛋白第57位氨基酸突变对T细胞抗原表位有影响。结论SARS流行过程中SARS-CoVS2基因较为稳定,S2蛋白57位氨基酸的突变可影响病毒T细胞抗原表位。     

脑膜炎大肠埃希菌侵袭素IbeA结合多肽的初步研究

目的脑膜炎大肠埃希菌（E．coli）侵袭素IbeA通过与脑微血管内皮细胞表面受体结合,从而介导细菌穿透血脑屏障引起新生儿细菌性脑膜炎。为通过肽库筛选获得与IbeA蛋白结合的多肽,建立噬菌体随机肽库筛选IbeA结合多肽模体的方法。方法首先制备靶分子,用PCR扩增出全长ibeA基因序列,克隆至表达载体pET28a中,转化大肠埃希菌BL21（DE3）．经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白,经变性复性后通过Ni^2＋-NTA亲和层析柱得到纯度达90％的重组蛋白。然后以固相化IbeA重组蛋白为靶亲和筛选噬菌体线性12肽库。结果经过3轮淘选,得到能和IbeA结合的24个重组噬菌体克隆;挑选15个亲和力高的克隆进行DNA测序,对比分析所得的短肽序列。固相Fmoc法合成短肽,并进行结合实验、阻断实验和竞争抑制实验。绪论以重组表达的IbeA融合蛋白为靶筛选得到的重组噬菌体十二肽克隆,能够和IbeA蛋白结合,为IbeA蛋白结合多肽。结果提示所筛选的阳性噬菌体克隆及其合成肽可能模拟IbeA受体表位的结构。     

实时荧光定量PCR法检测产气荚膜梭菌

目的:运用实时荧光定量PCR法检测产气荚膜梭菌,为早期快速诊断气性坏疽提供新方法.方法:以产气荚膜梭菌16s rDNA基因序列为模板,在其保守区域设计特异性引物与探针,将PCR扩增所得产物片段克隆,作为定量检测的标准品,绘制标准曲线.并对荧光定量PCR体系与反应条件进行优化,验证方法的特异性、敏感性、重复性及可行性.结果:实时荧光定量PCR法对产气荚膜梭菌的检测具有高度特异性,与创伤弧菌等24种相关细菌等均无交叉反应;检测灵敏度以纯菌计数达9×102cfu/mL,相当于9 cfu/反应;反应体系有较高稳定性;整个操作过程仅需3 h;300例创伤可疑分泌物样本的荧光定量PCR检测结果与细菌培养结果一致.结论:实时荧光定量PCR法特异、灵敏、快速,适用于产气荚膜梭菌的临床检测及突发事件的批量检测.     

正畸-牙周-修复多学科联合治疗前牙冠根折的临床体会

目的评价多学科技术联合治疗前牙冠根折的疗效。方法对21例前牙冠根折患者,在完善根管治疗后使用正畸力牵引,牵引后3个月进行牙周手术,稳定半年后行修复治疗。结果 21例患牙均形态恢复良好,冠边缘密合,牙龈无炎症,X线片显示根尖周围组织及牙周组织正常,冠根比协调。结论多学科联合治疗前牙冠根折能够恢复良好的前牙牙冠及牙龈形态。     

彩色多普勒在胆管细胞癌诊断中的应用价值

目的探讨彩色多普勒超声在胆管细胞癌诊断与鉴别诊断中的价值。方法对20例胆管细胞癌与20例肝内胆管结石患者的彩色多普勒血流进行对比观察。结果胆管细胞癌组彩色多普勒显示病灶周围门静脉血流变细的为90%(18/20),其中70%肝动脉显示不清;而22%(4/18)显示丰富的肝动脉血流。肝内胆管结石组门静脉、肝动脉均显像不清者仅为10%(2/20),2组比较有显著性差异(P<0.001)。结论门静脉血流信号变细或消失为胆管细胞癌的彩色多普勒特征性表现,在胆管细胞癌的诊断和鉴别诊断上具有重要的临床价值。     

需氧菌与厌氧菌混合感染致糖尿病足一例病原学检测

1病例简介 患者,男,44岁,有糖尿病病史,因“右下肢进展性红肿、溃疡、流脓、坏死伴疼痛1月”入院。患者于2009年8月10日左右劳作中被铁片刺伤,足跟部出现破溃,逐渐形成溃疡,右足肿胀明显,自行在社区诊所清创,效果不佳,足跟处脓肿扩大。     

血培养药敏结果与经验用药的调查分析

目的 提高临床医生在血培养结果出来前经验性用药的准确率.方法 对2009年11月-2010年10月我院血培养阳性菌株的耐药性进行分析,对相关病例进行回顾性分析.结果 178份血培养阳性的菌株耐药率较高;血培养结果出来前经验用药率达94.94%,与药敏试验结果的符合率为43.82%.使用率最高的抗菌药为喹诺酮类药物,使用率为41.86%.结论 临床医生应根据医院耐药谱合理选择用药,提高经验用药的准确率.