一种可生物降解温度敏感型聚乙二醇-聚己内酯-聚乙二醇水凝胶的合成和表征

合成了一系列分子量较低的聚乙二醇．聚己内酯-聚乙二醇（Poly（ethylene glycol）-Polycaprolactone-Poly（ethylene glycol），PEG-PCL—PEG）三嵌段共聚物。分别采用FTIR和1H—NMR对其结构进行了表征。所合成的PEG-PCL-PEG共聚物具有良好的水溶性，当水溶液浓度高于临界凝胶浓度（Critical gel concentration，CGC）时，随着温度的变化聚合物水溶液会呈现特有的凝胶-溶胶转变。研究了共聚物亲水疏水链段的比例和长度，以及热历史等对凝胶-溶胶转变行为的影响。通过调节上述条件，可以在一定程度上拓宽凝胶-溶胶转变温度范围，有助于PEG—PCL-PEG水凝胶在可注射药物控制释放系统等方面的应用。     

杜氏利什曼原虫表膜的制备及保护性McAb识别膜抗原的研究

本文用匀浆及超声波破碎杜氏利什曼原虫四川犬分离株前鞭毛体,蔗糖密度梯度离心分离其表膜,电镜观察见所得样品是单位膜和膜下微管组成的表膜,测得微管直径平均为23.3nm,微管间距巨平均为15.7nm,经SDS-PAGE分离显示1条主带,次带约15条,再转移到硝化纤维膜上,用单克隆抗体2H6-E3识别,仅见有一条区带,分子量为63kDa,该单克隆抗体是己经被证实定位于前鞭毛体表膜,并具有免疫保护性的。     

Adiponectin真核表达质粒的构建与表达研究

目的构建重组鼠adiponectin真核表达质粒,为进一步研究adiponectin的功能提供实验基础。方法提取鼠脂肪组织总RNA,运用RT-PCR方法扩增鼠adiponectincDNA完全编码区,将扩增产物连接至pCDNA3.1( )载体,对重组质粒进行测序验证,并检测其体外表达和对小鼠乳腺癌细胞4T1的增殖抑制作用。结果重组真核表达质粒经PCR扩增后获得一744bp片段,并经测序证实,Western-blot检测到其体外表达。在体外的细胞学实验中,将重组质粒转染入小鼠乳腺癌细胞4T148h后,与对照组相比,可以观察到明显的细胞形态学改变,细胞体积变小皱缩,4T1细胞生长明显抑制。流式细胞术检测到该组细胞中凋亡细胞所占比例明显高于对照组。结论成功构建了鼠重组adiponectin真核表达质粒,该质粒对小鼠乳腺癌细胞4T1的增殖有明显的抑制作用。     

流式细胞术PI、Annexin V/PI和APO2.7法检测细胞凋亡的比较

目的：探讨流式细胞术PI法、APO2．7法以及Annexin V／PI法三种凋亡检测方法的应用价值。方法：使用PI法、APO2．7法以及Annexin V／PI法三种方法同时对槲皮素处理后的慢性粒细胞白血病K562细胞进行凋亡检测对比研究。结果：三种方法不同时间组间的相关系数分别为0．823（P〉0．05），0．949（P〈0．05），0．994（P〈0．01）。药物作用24小时组APO2．7法与Annexin V／PI法检测细胞凋亡相关系数为0．925（P〈0．05），48小时组相关系数为0．993（P〈0．01）。结论：流式细胞术检测凋亡时可以选用Annexin V／PI法和APO2．7法，不推荐选用PI法。     

人骨骼肌TnI-fast基因克隆和体外表达

目的：构建人骨骼肌TnI-fast基因分泌型真核表达载体，为利用TnI-fast基因进行抗肿瘤血管生成基因治疗奠定基础。方法：采用PCR和RT－PCR制备TnI-fast cDNA，构建TnI-fast基因克隆质粒，测序证实后将TnI-fast cDNA插入到pSecTag2B构建分泌型重组真核表达质粒。然后用TnI-fast基因重组表达质粒转染COS－1细胞，检测TnI-fast基因体外表达。结果：DNA测序证实，我们从人骨骼肌总RNA和cDNA文库中扩增的TnI-fas cDNA序列与NCBIGenebank TnI-fast cDNA序列完全一致。ELISA检测证实，TnI-fast/pSec Tag2 B转染后目的基因可在真核细胞中分泌表达。结论：本研究成功地构建了TnI-fast基因重组表达质粒，可进一步用于抗肿瘤血管生成基因治疗动物实验。     

表达人CD40配体的重组腺病毒载体的构建

目的　构建含有hCD40L基因的重组腺病毒载体,为其在动物模型体内表达和肿瘤基因治疗提供基础。方法　用XhoⅠ、SwaⅠ双酶切质粒pORF-hCD40L,回收1 900 bp基因片段并定向克隆插入穿梭质粒pShuttle中 XhoⅠ、EcoRⅤ双酶切位点,得到重组质粒pShuttle-hCD40L。经PmeI酶切与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化 BJ5183细菌,同源重组后用选择培养基筛选阳性克隆,提取质粒PacI酶切线性化后用脂质体介导转染293细胞。酶切分析和PCR鉴定重组的腺病毒。结果　酶切分析、PCR验证表明,hCD40L基因成功克隆到腺病毒pAdEasy-1 载体中。结论　成功构建表达hCD40L基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其在哺乳动物内表达及基因治疗提供了基础。     

应用细菌双杂交系统技术寻找与人PCIA1基因相互作用的基因

目的探寻与新近发现的人类交叉免疫反应抗原（homo sapiens cross-immune reaction antigen）基因PCIA1相互作用的基因,为其功能研究提供线索。方法应用Stratagene公司的细菌双杂交系统和人胚肾cDNA文库,构建诱饵质粒pBT-PCIA1,与靶质粒pTRG-cDNA文库大规模地共转化报告菌株,筛选并分离具有相互作用的pTRG-cDNA阳性克隆,经DNA序列分析和生物信息学确定靶基因。结果发现7种靶蛋白基因,其中3种基因功能尚不清楚,其余4种具有重要生理功能,突变或表达异常都会导致严重疾病;α-辅肌动蛋白-4（actinin,alpha4,ACTN4）、鞘脂激活蛋白原（prosaposin,PSAP）或真核翻译起始因子（eukary-otic translation initiation factor 3,subunit 10 theta,EIF3S10）过表达都会促进肿瘤发生和演进。结论细菌双杂交系统技术探测蛋白质之间的相互作用,是一种提供新基因功能研究信息的有效方法;PCIA1基因表达与肿瘤形成、侵袭和转移密切相关。     

杂交瘤细胞在玻璃微载体培养中生物特性观察

本文报道以玻璃微载体小珠(CMB,Class microcarrier beads)作为载体培养杂交瘤细胞方法的建立。结果表明4株杂交瘤细胞在GMB培养显示GNB法上清中特异性单克隆抗体的滴度。OD值较单层培养法为高。比较培养7d后的杂交瘤细胞数,也以GMB法获得细胞数为多。各株细胞都诱生出高滴度腹水。亚类鉴定方面,GMB法培养的4株杂交瘤细胞上清内McAb所属亚类,又都保持了与单层法培养者完全相同的结果。表明杂交瘤细胞在CMB培养中,细胞迅速增殖,且保持各细胞株分泌其特异的McAb的生物特性,细胞活力旺盛,为今后体外培养杂交瘤细胞,制备McAb,提供了新的途径。     

细胞DNA含量与大肠癌临床分期及生物学特性的关系

为进一步探讨大肠癌DNA倍体与临床分期及生物学特性的关系,采用流式细胞仪对86例大肠癌患者手术切除的新鲜大肠癌标本细胞DN A含量进行了检测.结果显示:本组病例中41例(47.7%)为二倍体;45例(53.3%)为非二倍体.DNA倍体与性别、年龄、分化程度、肿瘤部位无关,但与Dukes'分期相关,Dukes' A期肿瘤病例DNA二倍体比Dukes'B、C、D期肿瘤病例更常见;Dukes' B～D期肿瘤病例之间DNA倍体分布无明显差异;局部有淋巴结转移肿瘤病例DNA非二倍体更常见.提示DNA倍体与临床分期、淋巴结转移有关.     

抗人肺癌单克隆抗体的制备及其生物特征的研究

目的制备抗人肺癌细胞的单克隆抗体（McAb）,鉴定其生物学特征。方法用人肺癌细胞株A549作为抗原,采用杂交瘤技术制备抗人肺癌细胞McAb,用ELISA进行筛选和鉴定其亚类,并用细胞扒片免疫化学方法检测其特异性。结果获得了1株分泌抗人肺癌细胞McAb杂交瘤细胞（命名为1D11）,其染色体呈双亲特点,该McAb与人卵巢癌细胞株SKOV3有交叉反应,与肝癌细胞株SMMC7721,宫颈癌细胞株Hela.表皮癌细胞株A431,正常肝细胞株L02无交叉反应。结论该McAb对肺癌和卵巢癌具有特异性。